龐向東, 楊 娜, 江 虹

(長江師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，重慶 408100)

安乃近是吡唑酮類解熱鎮(zhèn)痛藥中最具代表性的藥物，它是治療各種急、慢性疼痛性疾病的首選藥，常用于高熱時的緊急對癥用藥。安乃近存在一定副作用，長期使用會引起粒細(xì)胞減少、再生障礙性貧血、嚴(yán)重的過敏、休克虛脫，甚至死亡等，所以一些國家對安乃近作出了限用或停用的規(guī)定。為了臨床能更好的使用安乃近，對其進(jìn)行分析方法研究，以適應(yīng)急檢需要，顯得很有必要和重要。目前，測定安乃近的方法主要有碘量法[1]、高效液相色譜法[2,3]、電化學(xué)分析法[4]、熒光分析法[5]、化學(xué)發(fā)光法[6]、紫外分光光度法[7]、紅外光譜法[8]等，未見用共振瑞利散射(RRS)法測定安乃近的報道。

本實(shí)驗(yàn)在弱堿性的Tris-HCl緩沖介質(zhì)中，以維多利亞藍(lán)B作探針，研究并建立了測定痕量安乃近的RRS法。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，維多利亞藍(lán)B與安乃近的結(jié)合物在364 nm波長處有最大的RRS峰，且安乃近在一定濃度范圍內(nèi)與共振散射強(qiáng)度△IRRS呈良好的線性關(guān)系。該方法用于實(shí)際樣品的測定，回收率在98.2%～102.5%范圍。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

F-2500型熒光光度計(jì)(日本，日立公司)；pH計(jì)(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)。

安乃近(ANG，重慶藥檢所提供)標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.0×10-4mol/L 儲備液，冰箱4 ℃保存，使用時稀釋10倍。維多利亞藍(lán)B(VB；上海源葉生物科技有限公司)溶液：1.0×10-3mol/L。Tris-HCl緩沖溶液：0.1 mol/L HCl和0.2 mol/L Tris混合，用酸度計(jì)測定配成pH=3.0～9.8的系列緩沖溶液。所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

于10 mL具塞比色管中，依次準(zhǔn)確加入0.5 mL pH=9.36 的Tris-HCl緩沖溶液，適量的1.0×10-5mol/L 安乃近標(biāo)準(zhǔn)溶液和1.0 mL 1.0×10-3mol/L 維多利亞藍(lán)B 溶液，用水稀至刻度，搖勻，10 min后，在熒光光度計(jì)上進(jìn)行同步掃描(λex=λem=220 nm，測定狹縫為 5.0 nm)，得共振瑞利散射光譜，在最大散射波長處測定體系的共振瑞利散射強(qiáng)度(IRRS)和試劑空白的共振瑞利散射強(qiáng)度(I0)，計(jì)算△IRRS。

2 結(jié)果與討論

圖1 安乃近-維多利亞藍(lán)B的RRS光譜 Fig.1 RRS spectra of analgin-victoria blue B1.ANG (8.0×10-7 mol/L);2.VB (1.0×10-4 mol/L);3-7.ANG (0.0, 2.0×10-7,5.0×10-7,8.0×10-7,1.2×10-6 mol/L)-VB (1.0×10-4 mol/L), pH=9.36.

2.1 共振瑞利散射光譜

按實(shí)驗(yàn)方法配制溶液并掃描光譜圖。從圖1可知，安乃近本身幾乎無散射，維多利亞藍(lán)B在414 nm波長處有弱散射。當(dāng)在安乃近的弱堿性溶液中加入維多利亞藍(lán)B 溶液后，由于維多利亞藍(lán)B 是堿性陽離子染料，可以與安乃近上的磺酸根離子以靜電引力結(jié)合生成離子締合物，使溶液的共振瑞利散射明顯增強(qiáng)，最大散射峰位于364 nm，紫移50 nm。在體系的最大散射波長處，隨著安乃近濃度的增加，體系的共振瑞利散射信號隨之增強(qiáng)，安乃近在一定濃度范圍內(nèi)與體系的共振瑞利散射強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系，可用于安乃近的定量分析。

2.2 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

2.2.1反應(yīng)介質(zhì)、酸度及用量考察了Tris-HCl、HAc-NaAc緩沖介質(zhì)對體系共振瑞利散射強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明：在pH=9.0～9.5 范圍內(nèi)，使用0.5 mL Tris-HCl 緩沖溶液時，體系的△IRRS較大，方法有較高靈敏度。實(shí)驗(yàn)用0.5 mL pH=9.36 的Tris-HCl緩沖溶液。

2.2.2維多利亞藍(lán)B用量考察了1.0×10-3mol/L 維多利亞藍(lán)B 溶液對體系△IRRS的影響。結(jié)果表明：維多利亞藍(lán)B溶液用量在0.8～1.2 mL 范圍內(nèi)，體系的△IRRS較大，實(shí)驗(yàn)用1.0×10-3mol/L維多利亞藍(lán)B 溶液1.0 mL。

2.2.3試劑加入順序考察了安乃近、維多利亞藍(lán)B 及Tris-HCl緩沖溶液在不同加入順序時對體系靈敏度的影響。結(jié)果表明：按實(shí)驗(yàn)方法的加入順序較佳。

2.2.4反應(yīng)時間在最佳條件下，考察了不同反應(yīng)時間對體系穩(wěn)定性的影響，結(jié)果表明：締合物在 10 min內(nèi)即可形成，至少穩(wěn)定1 h。實(shí)驗(yàn)選在 10 min后測定。

2.3 共存物質(zhì)的干擾

在選定條件下，考察了某些常見物質(zhì)對測定1.0×10-6mol/L 安乃近的影響。結(jié)果表明，當(dāng)相對誤差不超過±5% 時，下列物質(zhì)不干擾測定：100倍的葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘氨酸、KCl、NaCl、Na2S2O3；50倍的L-白氨酸、L-丙氨酸、L-組氨酸、L-色氨酸、DL-蘋果酸、CaCl2、BaCl2、Na2SO4、K2SO4、Mg(NO3)2、KNO3；20倍的淀粉、MnSO4?？梢?，方法具有良好的選擇性。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按實(shí)驗(yàn)方法配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液并掃描共振瑞利散射光譜，作△IRRS-c標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性回歸方程為：△IRRS=-358.6+1647×106c(c：mol/L)，相關(guān)系數(shù)為0.9987，線性范圍為0.20×10-6～1.2×10-6mol/L，檢出限(3Sb/S)為2.6×10-8mol/L(n=11)。

2.5 樣品分析

取安乃近注射液和滴鼻液各1支，分別將其內(nèi)容物置于1 000 mL 容量瓶中，用水稀至刻度，搖勻。取稀釋液各1.0 mL 分別置于500 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即為待測液。取安乃近藥片4粒，用水溶解后，過濾，將清液轉(zhuǎn)入500 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，取清液0.50 mL 置于1 000 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即為待測液。取上述樣液的待測液各1.0 mL，按實(shí)驗(yàn)方法分析，各平行測定5次，同時作加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表1。

表1 樣品分析結(jié)果及回收試驗(yàn)(n=5)

3 結(jié)論

維多利亞藍(lán)B與安乃近可生成穩(wěn)定的締合物，利用共振瑞利散射法可以定量測定安乃近的含量，方法簡便、快速、靈敏，有較高的準(zhǔn)確度、精密度和良好的選擇性。