陳文文，余　強(qiáng)，王志遠(yuǎn)，劉月環(huán)，吳舊生

（1. 浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，杭州 310058； 2. 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，杭州 310013）

不同pH值飲用水對(duì)SD大鼠生長(zhǎng)發(fā)育及血清生化的影響

陳文文1，2，余強(qiáng)2，王志遠(yuǎn)2，劉月環(huán)2，吳舊生1

（1. 浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，杭州 310058； 2. 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，杭州 310013）

目的觀測(cè)不同pH值飲用水對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響。方法選取3周齡SPF級(jí)SD大鼠，隨機(jī)分為4組，分別給予不同pH值的飲用水，并于飼養(yǎng)后第4、6、8、10和12周，分別從每組取10只大鼠，雌雄各半，測(cè)定體質(zhì)量，安死術(shù)后取心、肝、脾、肺、腎和腎上腺6個(gè)臟器稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，同時(shí)采集血樣檢測(cè)血糖、血脂、肝功能、腎功能等生化指標(biāo)。結(jié)果不同pH值飲用水組SD大鼠體質(zhì)量，與同周齡pH7.0飲用水組相比無顯著性差異。不同pH值飲用水組SD大鼠臟器系數(shù)及生化指標(biāo)亦在正常值范圍內(nèi)波動(dòng)。結(jié)論不同pH值飲用水對(duì)3～15周齡大鼠體質(zhì)量、臟器系數(shù)和生化指標(biāo)基本上無顯著影響。

飲用水； 臟器系數(shù)pH值； 臟器系數(shù)； 血糖； 血脂； 肝功能

SD大鼠是常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，具有適應(yīng)性強(qiáng)、繁殖率高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、藥理學(xué)、遺傳疾病等研究［1］。動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育性能是其遺傳特性與所處環(huán)境共同作用的結(jié)果［2］。其中，飲用水對(duì)大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育起著至關(guān)重要的作用。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，采用高壓滅菌 （121 ℃，25～30 min）后，將水酸化至pH2.0～2.5的處理方法可有效抑制飲用水中細(xì)菌生長(zhǎng)，以此解決實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水儲(chǔ)存期短的問題［3，4］。但長(zhǎng)期飲用酸化水是否會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物敏感生理生化指標(biāo)發(fā)生變化等問題尚少有報(bào)道。因此，本文進(jìn)行了SD大鼠長(zhǎng)期飲用不同pH值滅菌酸化水的飼養(yǎng)試驗(yàn)，旨在確定長(zhǎng)期飲用酸化水對(duì)SD大鼠血液理化指標(biāo)的影響。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3周齡SPF級(jí)SD大鼠200只，雌雄各半，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［SCXK（浙）2014-0001］。整個(gè)試驗(yàn)過程在屏障系統(tǒng)進(jìn)行，飼養(yǎng)條件嚴(yán)格按照GB14925-2010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施指標(biāo)設(shè)置。

1.2主要儀器

BS-1500A電子天平，感量1 g，德國(guó)賽多利斯公司；AB204-E型電子天平，感量1 mg，瑞士梅特勒-托利多國(guó)際有限公司； 7020全自動(dòng)生化儀，日本日立公司。

1.3方法

1.3.1分組與飼養(yǎng)3周齡大鼠隨機(jī)分為4組，雌雄各半，分別飲用滴加0.1 mol/L的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至所需的pH濃度，并用pH計(jì)檢測(cè)，制備得pH2.0、pH3.0、pH7.0和pH9.0滅菌過濾水。自由飲食。

1.3.2檢測(cè)指標(biāo)于實(shí)驗(yàn)后4、6、8、10和12周后（即7、9、11、13和15周齡），每組分別各取5只雄性和5只雌性大鼠，稱重，用速眠新麻醉靜脈采血后，頸椎脫臼處死。取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺，除去上述器官周圍的脂肪結(jié)締組織，吸盡臟器表面血液，用電子天平稱量，計(jì)算臟器系數(shù)。血樣經(jīng)3 000 r/min離心15 min，分離血清，采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清生化指標(biāo)。血液生化指標(biāo)包括谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿素（UREA）、肌酐（CREA）、空腹血糖（GLU）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLOB）、白蛋白與球蛋白比值（A/G）、總蛋白（TP）、總膽紅素（T-BIL）、直接膽紅素（DBIL）、間接膽紅素（IBIL）、總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和免疫球蛋白G（IgG）。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

2　結(jié)果

2.1不同pH值飲用水對(duì)SD大鼠體質(zhì)量的影響

大鼠分別飲用pH2.0、pH3.0和pH9.0飲用水飼養(yǎng)4周、6周、8周、10周和12周，與同周齡pH7.0飲用水組SD大鼠的體質(zhì)量比較無顯著性差異（P＞0.05）（表1）。

2.2不同pH值飲用水對(duì)SD大鼠臟器系數(shù)的影響

如表1所示，分別給予不同pH值飲用水飼養(yǎng)4周～12周后，與同周齡pH7.0飲用水組SD大鼠相比， 盡管心、肝、脾等個(gè)別臟器系數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， 但其仍處于大鼠臟器系數(shù)正常值波動(dòng)范圍內(nèi)。

2.3不同pH值飲用水對(duì)SD大鼠血清生化指標(biāo)的影響

分別給予不同pH值飲用水飼養(yǎng)4周～12周后，與同周齡pH7.0飲用水組SD大鼠相比，盡管某些時(shí)間點(diǎn)GLU、CREA、UREA、LDL-C等個(gè)別生化指標(biāo)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但其仍處于大鼠生化指標(biāo)正常值波動(dòng)范圍內(nèi)（表2）。

表1　不同pH值飲用水對(duì)SD大鼠體質(zhì)量及臟器系數(shù)的影響

表2　各組SD大鼠生化指標(biāo)比較

（續(xù)表2）

2.4不同pH值飲用水對(duì)SD大鼠血清生化指標(biāo)的影響

分別給予不同pH值飲用水飼養(yǎng)4周～12周后，與同周齡pH7.0飲用水組SD大鼠相比，盡管某些時(shí)間點(diǎn)GLU、CREA、UREA、LDL-C等個(gè)別生化指標(biāo)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但其仍處于大鼠生化指標(biāo)正常值波動(dòng)范圍內(nèi)（表2）。

3　討論

飲水是SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)中引起微生物污染的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。一般飲水的pH值 調(diào)到3.0時(shí)，可有效抑制細(xì)菌的增殖。研究表明，小鼠飲用pH2.5左右的酸化水能解決綠膿桿菌感染問題。國(guó)內(nèi)一些學(xué)者也提出飲用pH2.0～2.5的酸化水以防止SPF小鼠綠膿桿菌感染［5］。樵星芳等［6，7］研究發(fā)現(xiàn)，高壓滅菌水存放第2日即可長(zhǎng)菌，而酸化滅菌水（pH2.5～3.0）存放7 d間，細(xì)菌檢測(cè)均為陰性，說明小鼠飲水經(jīng)過一定的酸化處理后利于存放，且隨著酸度增加，飲水中可檢出的細(xì)菌數(shù)亦隨之減少，可檢出細(xì)菌的時(shí)間亦延后，提示小鼠飲水經(jīng)過一定程度酸化處理后，對(duì)抑制細(xì)菌的增殖有一定效果。同時(shí)研究表明，Wistar大鼠和ICR、KM小鼠長(zhǎng)期飲用滅菌酸化水對(duì)其血液細(xì)胞學(xué)以及脾、胸腺等免疫臟器指標(biāo)并無明顯影響［7-10］。

本研究選取3周齡離乳大鼠，分別給予不同pH值（2.0～9.0）的飲用水，飼養(yǎng)4～12周，觀察其對(duì)SD大鼠生長(zhǎng)發(fā)育及生理功能的影響。結(jié)果表明，不同pH值飲用水組同周齡SD大鼠體質(zhì)量之間無顯著性差異。同時(shí)，各組大鼠心、肝、脾、肺、腎等主要臟器系數(shù)以及血糖、血脂、肝功能、腎功能等血液生化指標(biāo)的變化亦在正常值范圍內(nèi)。由此說明，pH2.0～9.0飲用水對(duì)SD大鼠的臟器系數(shù)和生化指標(biāo)無顯著性影響。但不同pH值飲用水對(duì)動(dòng)物的組織學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)和繁殖性能的影響尚有待進(jìn)一步研究。

［1］湯家銘， 陳民利. 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)［M］. 北京: 中國(guó)中醫(yī)藥出版社， 2012:28-30.

［2］張璐， 袁子彥， 趙善民， 等. 裸鼴鼠生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)及主要臟器系數(shù)正常參考值測(cè)定［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)， 2013，33（6）:473-476.

［3］Tober-Meyer BK， Bieniek HJ. Studies on the hygiene of drinking water？for laboratory animals. 1. The effect of various treatments on bacterial contamination ［J］. Lab Anim，1981， 15（2）:107-110.

［4］徐平， 毛佳賢. 小鼠飲水酸化后細(xì)菌生長(zhǎng)情況［J］. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 1992， 12（3）:157-159.

［5］朱美芬. 小鼠飲用酸化水以清除綠膿桿菌的觀察［J］. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 1984， 4（3）:156.

［6］陳建康， 樵星芳， 李小軍， 等. 酸化水對(duì)KM小鼠繁育的影響［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)， 2006， 26（4）:249-250.

［7］樵星芳， 陳健康， 李小軍， 等. 小鼠長(zhǎng)期飲用滅菌酸化水對(duì)部分血液學(xué)指標(biāo)的影響［J］. 醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制， 2006， 22（9）: 703-704.

［8］陳建康， 艾必燕， 樵星芳， 等. 27周齡Wistar大鼠飲用酸化水生物學(xué)特性的觀察I.血液學(xué)指標(biāo)的測(cè)定［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 2010， 27（6）:75-77.

［9］Hermann LM， White WJ， Lang CM. Prolonged exposure to acid， chlorine， or tetracycline in the drinking water: effects on delayed-type hypersensitivity， hemagglutination titers，and reticuloendothelial clearance rates in mice ［J］. Lab Anim Sci， 1982， 32（6）:603-608.

［10］ Tober-Meyer BK， Bieniek HJ， Kupke IR. Studies on the hygiene of drinking water for laboratory animals. 2. Clinical and biochemical studies in rats and rabbits during long-term provision of acidified drinking water ［J］. Lab Anim， 1981， 15 （2）:111-117.

Q95-33

B

1674-5817（2015）01-0061-04

10.3969/j.issn.1674-5817.2015.01.013

2014-08-29

浙江省科技廳院所專項(xiàng)（2012F30026）

陳文文（1982-）， 男， 助理研究員， 研究方向: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)， E-mail: cww0428@163.com

吳舊生（1969-）， 男， 副教授， 研究方向: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)， E-mail: wujosh@zju.edu.cn