李天賦，周青，張翠，蔣衛(wèi)軍，吳秋月，李衛(wèi)巍，許豪勤，夏欣一，（.江蘇大學生命科學研究院，江蘇 鎮(zhèn)江0；.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院解放軍臨床檢驗醫(yī)學研究所，江蘇 南京 000；.江蘇省計劃生育科研所，江蘇南京 009）

雌激素受體α基因多態(tài)性與男性不育關系的 Meta分析

李天賦1，周青1，張翠2，蔣衛(wèi)軍2，吳秋月2，李衛(wèi)巍2，許豪勤3，夏欣一1，2
（1.江蘇大學生命科學研究院，江蘇 鎮(zhèn)江212013；2.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院解放軍臨床檢驗醫(yī)學研究所，江蘇 南京 210002；3.江蘇省計劃生育科研所，江蘇南京 210029）

目的：運用 Meta分析的方法系統(tǒng)評價雌激素受體α基因多態(tài)性2位點（rs2234693和 rs9340799）與男性不育的相關性。方法：檢索 PubMed、EMABSE、萬方、中國知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫，初篩得到文獻 24篇，對符合納入標準的文獻使用 Stata 11.0軟件在4個模型中進行分析，計算優(yōu)勢比值及95％可信區(qū)間評價其關聯(lián)度，并進行敏感性分析及發(fā)表偏倚的評估。結果：共納入6篇病例 對照研究，包括774名患者和841名健康對照者。Meta分析結果顯示rs2234693基因的3種模型CC vs.TT（OR=0.72，95％CI:0.54-0.96）、CT vs.TT（OR=0.74，95％CI:0.58-0.94）和（CC+CT）vs.TT（OR=0.73，95％CI:0.58-0.91）有明顯相關性，提示原發(fā)性不育的風險降低。而 rs9340799基因2種模型AA vs.GG（OR=1.67，95％CI:1.21-2.32）和 AA vs.（GA+GG）（OR=1.63，95％CI:1.32-2.03）也有明顯相關性，提示男性不育的風險顯著增加。結論:rs2234693 CC基因型可以降低男性不育的危險性，而rs9340799 AA基因型可能與男性不育相關。

雌激素受體α；男性不育；基因多態(tài)性

［Abstract］Objective:To analysis the relationship between two polymorphism genes of estrogen receptor α rs2234693 and rs9340799 and male infertility by Meta-analysis.Methods:We searched PubMed，EMABSE，CNKI and WanFang database，while 24 articles were concluded.Meta analysis was performed using Stata 11.0 software.Calculated the odds ratio and 95％ confidence interval and evaluated the strength of the associations，sensitivity and publication bias.Results:For the rs2234693，there were significant association in the comparison of CC vs.TT（OR=0.72，95％CI:0.54-0.96），CT vs.TT （OR=0.74，95％CI:0.58-0.94）and（CC+CT）vs.TT（OR=0.73，95％CI:0.58-0.91）with male infertility.For rs9340799 polymorphism，increased risks were observed for the comparison of AA vs.GG（OR=1.67，95％CI:1.21-2.32）and AA vs.（GA+GG）（OR=1.63，95％CI:1.32-2.03）.Conclusion:The rs2234693 CC genotype was associated with the decreased risk for male infertility；however，the rs9340799 AA genotype was associated with an increased risk for male infertility.

［Key words］estrogen receptor α；male infertility；polymorphisms

男性因素是造成20％～25％的家庭無法生育 的原因，其中約有一半是特發(fā)性不育［1］。男性不育患者中15％是由遺傳因素所致，包括染色體變異和基因突變，造成了精子發(fā)生障礙和精子質量下降［2］。以往觀點認為雌激素是“女性”激素，但近來越來越多的學者開始關注雌激素在男性生殖中的調節(jié)作用［3］。男性生殖系統(tǒng)中附睪、Sertoli細胞、Leydig細胞和生精細胞均存在雌激素［4］。研究發(fā)現(xiàn)［5］在發(fā)育過程中，補充雌激素會減少 Sertoli細胞數(shù)量并降低睪酮的生成，也會破壞胎兒的 Leydig細胞發(fā)育，抑制成人減數(shù)分裂后精子細胞的凋亡［6］。雌激素的生理功能在發(fā)育的不同階段受到雌激素受體（estrogen receptors，ER）的調控。ER位于人染色體6q25，分為α、β兩類，兩者在雄性生殖系統(tǒng)的分布有所不同，研究結果也不盡相同［7］。ERα有多個多態(tài)性位點，其中位于內含子區(qū)域的 rs2234693、rs9340799研究較多［8］。近年來研究顯示 ERα與精子發(fā)生障礙有密切關聯(lián)，但研究結果卻不一致。為了評估ERα基因多態(tài)性與男性不育的相關性，我們基于先前的研究進行了 Meta分析，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索

通過計算機檢索 PubMed、EMABSE、CNKI和萬方等數(shù)據(jù)庫，搜集國內外發(fā)表的關于 ERα基因多態(tài)性與男性不育相關性的文獻。中文數(shù)據(jù)庫的檢索關鍵詞為ERα、雌激素受體、rs2234693、rs9340799、多態(tài)性、男性不育。英文檢索詞:ERα、estrogen receptors、rs2234693、rs9340799、polymorphism、male infertility。語種限定為英文和中文，檢索時間為建庫至2014年6月30日。同時輔以文獻追溯。

1.2 納入和排除標準

納入標準:①關于rs2234693、rs9340799多態(tài)性與男性不育關系的病例對照研究；②研究對象為人類；③數(shù)據(jù)齊全，有各基因型在病例組和對照組的頻數(shù)；④對照組基因型分布符合Hardy-Weinberg（H-W）遺傳平衡定律。排除標準:①單純病例研究、病例報道、綜述等文獻；②數(shù)據(jù)質量不可靠或重復發(fā)表。

1.3 資料提取

由兩位研究者獨立進行文獻篩選和資料提取，意見不一致時通過討論或由第三位研究者協(xié)助解決。提取數(shù)據(jù)包括:第一作者姓名、發(fā)表年份、種族、病例對照組基因型分布和對照組H-W平衡檢驗值。

1.4 統(tǒng)計學分析

對照組基因型頻率數(shù)據(jù) H-W檢驗使用在線工具（http://ihg.gsf.de/cgi-bin/hw/hwal.pl）分析，P＜ 0.05表示該研究對照組 H-W檢驗不平衡。使用Stata 11.0軟件計算優(yōu)勢比（OR）及 95％可信區(qū)間（95％CI），分析ERα基因多態(tài)性與男性不育關聯(lián)度。共有3種基因型:野生純合型基因（WW）、雜合型基因（WR）和純合突變型基因（RR），計算顯性遺傳模型（WR+RR）vs.WW、隱性遺傳模型 RR vs. （WR+WW）、共顯性遺傳模型WR vs.RR及WW vs.RR的 OR值，并采用 Q檢驗和 I2定量評估對納入研究進行異質性檢驗［9］。若各研究結果之間無顯著異質性（P＞0.05），采用固定效應模型 Mantel-Haenszel方法合并OR值；反之則選用隨機效應模型 DerSimonian and Laird法進行合并［10］，并對可能引起異質性的因素進行亞組分析。I2值在0～25％之間為無異質性；25％～50％為輕度異質性；＞50％為高異質性。敏感性分析為依次排除單個文獻后重新進行 Meta分析，估計綜合效應大小。通過 Begg秩相關法和Egger線性回歸法［11］檢驗是否存在發(fā)表偏倚，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 文獻檢索結果

檢索到相關文獻24篇，初步排除16篇，通過閱讀全文排除1篇數(shù)據(jù)重復的文獻和1篇缺少具體數(shù)據(jù)的文獻，最終納入 6篇［3，12-16］。全部為英文文獻，其中4篇來自歐洲人群［3，13，15，16］，2篇來自亞 洲黃 種人［12，14］。除文獻［14］外對照組均符合 H-W平衡。除文獻［13］其余各研究均使用聚合酶鏈反應 限制性片段長度多態(tài)性的方法（polymerase chain reaction -restriction fragment length polymorphism，PCRRFLP）進行基因多態(tài)性鑒定。所有研究對照組來源均為健康人群，根據(jù)WHO第5版指南，各項精液指標合格。病例組均為不育男性，精液檢查確診為無精子癥和嚴重少精子癥，各研究基本情況見表1。

2.2 分析結果

對于rs2234693基因，Meta分析顯示歐洲人中CC vs.TT、CT vs.TT和（CC+CT）vs.TT三種模型結果有明顯相關性，亞洲人中CC vs.TT、CT vs.TT和（CC+CT）vs.TT三種模型結果有明顯相關性，提示 可 能 會 降 低 不 育 的 風 險 性 （表 2）。對rs9340799，AA vs.GG和 AA vs.（GA+GG）則增加了不育的風險系數(shù)，根據(jù)種群進行的亞組分析也提示在歐洲人中 AA vs.GG和AA vs.（GA+GG）兩種模型以及亞洲人中AA vs.（GA+GG）模型結果均有相關性（表3）。

表1 納入文獻的基本情況

表 2 rs2234693多態(tài)性與男性不育的遺傳易感性分析

表 3 rs9340799多態(tài)性與男性不育的遺傳易感性分析

2.3 異質性與敏感性分析

在rs2234693和 rs9340799這兩個位點的文獻分析中沒有發(fā)現(xiàn)明顯的異質性（P＞0.05）。敏感性分析:剔除不符合H-W平衡的文獻［14］后，顯性遺傳模型合并效應量無改變；依次單獨剔除1篇文獻后，各遺傳模型合并效應量仍無明顯改變。

2.4 發(fā)表偏倚

通過Begg漏斗圖和 Egger線性回歸法檢驗是否存在發(fā)表偏倚。漏斗圖的形狀并沒有顯示明顯的不對稱，Egger線性回歸檢驗也提示沒有發(fā)表偏倚（圖1、圖2、表4）。

圖1 rs2234693基因多態(tài)性發(fā)表偏倚的漏斗圖（CC vs.TT）

圖2 rs9340799基因多態(tài)性發(fā)表偏倚的漏斗圖（AA vs.GG）

3 討論

大量研究表明，雄性動物的血清和睪丸網(wǎng)中都存在一定量的雌激素［17］。雌激素是生殖細胞的關鍵因素，參與誘導DNA的氧化損傷，異常的雌激素水平還會導致精子發(fā)生障礙［18］。雌激素可以通過增加核呼吸因子1（NRF-1）的表達調控線粒體的功能，通過與 NRF-1啟動子區(qū)域的雌激素效應器交互作用從而實現(xiàn)對線粒體的調控［3］。以乳房細胞MCF-7為模型的體外實驗表明，雌激素可以調控NRF-1的轉錄并且增加線粒體的合成［19］。這個發(fā)現(xiàn)表明ERα的多態(tài)性可以通過 NRF-1的轉錄增加線粒體活性，并使精子活動力增加［15］。受試者基因多態(tài)性導致ER功能改變的機制尚不清楚。研究表明基因多態(tài)性通過核苷酸序列的改變以及由此引起的ER mRNA二級結構的改變，可以引起mRNA功能的改變［20］。

表4 ERα兩個多態(tài)位點 Egger檢驗結果

ERα基因多態(tài)位點（rs2234693和rs9340799）通過作用于 CYP19調節(jié)雌激素，CYP19編碼芳香化酶的表達，導致精子數(shù)量的下降并引起男性不育［21］。一些研究也證實特定的 ERα基因多態(tài)會生成低性激素結合球蛋白（SHBG）從而影響雌激素的結合，影響男性精子發(fā)生［22］。SHBG還參與了性激素的傳遞以及血清中雌、雄激素的濃度控制。Pavlovich等［23］發(fā)現(xiàn)與健康人相比，嚴重少精子癥患者伴有低水平的雄激素及高水平的雌二醇。

本研究納入了6篇病例對照研究，包括774名患者和841名健康對照者。合并結果表明rs9340799 AA基因型可能會增加男性不育的危險性，而 rs2234693 CC基因型可以降低男性不育的危險性。引起這種差異的原因可能在于不同人種間遺傳因素及其生活環(huán)境的不同。異質性是影響研究結果可靠性的主要因素，本研究在總人群中均未發(fā)現(xiàn)明顯異質性。H-W平衡是遺傳學研究中的基本定律，我們對納入的文獻進行了檢驗，結果發(fā)現(xiàn)有1項研究不符合，剔除后結果無明顯改變。我們采用Begg漏斗圖和Egger線性回歸檢驗分別定性和定量評估發(fā)表偏倚，發(fā)現(xiàn)4個遺傳模型均無發(fā)表偏倚，證明結論可靠。

本研究存在以下不足:納入文獻質量一般，樣本量較小，遺傳關聯(lián)性研究只有大量樣本才能真實反映基因和疾病之間的關聯(lián)。其次患者的其他信息（如生活方式、工作、年齡等）無法收集，需要進一步的研究來證實相關性。綜上所述，ERα rs2234693 和rs9340799基 因多態(tài) 性與男 性 不育有 關。rs2234693 CC基因型可以降低男性不育的危險性，而rs9340799 AA基因型則可能增加男性不育的風險。ERα基因多態(tài)性與男性不育的關聯(lián)性尚需大樣本量、多中心研究及依據(jù)不育類型、種族和環(huán)境等分層分析進一步證實。

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Meta analysis the association of polymorphisms in estrogen receptor α with male infertility

LI Tian-fu1，ZHOU Qing1，ZHANG Cui2，JIANG Wei-jun2，WU Qiu-yue2，LI Wei-wei2，XU Hao-qin3，XIA Xin-yi1，2
（1.Institute of Life Sciences，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013；2.PLA Research Institute of Clinical Laboratory Medicine，
Nanjing General Hospital of Nanjing Military Region，Nanjing Jiangsu 210002；3.Jiangsu Province Research Institute of Planned Parent
hood，Nanjing Jiangsu 210029，China）

R698.2

A

1671-7783（2015）01-0057-05

10.13312/j.issn.1671-7783.y140285

江蘇省科技專項基金資助項目（BM2013058）

李天賦（1986—），男，碩士研究生；夏欣一（通訊作者），博士，副主任醫(yī)師，副教授，E-mail:xiaxy@gmail.com；許豪勤（通訊作者），E-mail:1325825613@qq.com

2014-11-04 ［編輯］何承志