范源 徐國(guó)發(fā) 張建博 陳平 鄧玨力 林青

摘要：目的研究和分析鞣云實(shí)素在不同PH磷酸鹽緩沖液中的含量變化情況。方法采用在60℃的恒溫條件下觀察鞣云實(shí)素在不同PH的磷酸鹽緩沖液（PH分別為l、2、3、4、5、6、7、8）中的水解情況，應(yīng)用反相高效液相色譜儀測(cè)定鞣云實(shí)素及其水解產(chǎn)物沒(méi)食子酸含量，并比較和分析鞣云實(shí)素樣品液水解前后鞣云實(shí)素和沒(méi)食子酸含量變化。結(jié)果緩沖溶液PH值在l～3范圍內(nèi)，鞣云實(shí)素隨著PH值的上升，其含量呈逐漸上升的趨勢(shì)，PH值在4～8范圍內(nèi)，鞣云實(shí)素隨著PH值的上升，其含量呈逐漸下降的趨勢(shì)，在PH值J～3范圍內(nèi)沒(méi)食子酸含量呈逐漸下降的趨勢(shì)，PH值在4～7的范圍內(nèi)，沒(méi)食子酸含量呈逐漸上升的趨勢(shì)，PH值在7～8的范圍內(nèi)，沒(méi)食子酸含量呈下降的趨勢(shì)。其中在PH值為l時(shí)鞣云實(shí)素的水解產(chǎn)物沒(méi)食子酸含量最高，在PH值為3時(shí)沒(méi)食子酸含量最低；結(jié)論鞣云實(shí)素在不同PH條件下的含量變化反映了酸堿度對(duì)鞣云實(shí)素水解反應(yīng)的影響，本實(shí)驗(yàn)研究可為含鞣云實(shí)素的中藥提取加工、養(yǎng)護(hù)、藥效學(xué)、穩(wěn)定性研究等方面的應(yīng)用提供一定參考。

關(guān)鍵詞：鞣云實(shí)素；水解；沒(méi)食子酸；PH磷酸緩沖液

中圖分類號(hào)：R284

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2015） 01-0065-03鞣云實(shí)素（ Corilagin）是一種多酚類化合物，別名柯里拉京、鞣云實(shí)精，呈白色針晶狀粉末，分子式為C27H22018[1]，其化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)下圖。易溶于乙醇、甲醇、丙酮、稍溶于水。在冷水中溶解度小，容易被氧化和水解，樣品應(yīng)置于陰暗低溫處避光保存[2-3]、鞣云實(shí)素存在于多種藥用植物中，其中葉下珠（Phyllanthus reticulatus）、橄欖（Canarium album）、余甘子（ Phyllallt11IIs enlblica）、老鸛草（Ceranium wilfordii）、龍眼（Di-mocarpus longana）等植物含量較多[4-7]。 藥理學(xué)研究表明，鞣云實(shí)素具有抗炎、保肝、抗- HIV、抗腫瘤、抗高血壓、抗氧化等多種生物活性，尤其在抗腫瘤、抗氧化方面藥效良好[8-13]。鞣云實(shí)素含有糖苷鍵，易水解斷裂脫落下一分子的沒(méi)食子酸，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)鞣云實(shí)素和沒(méi)食子酸的理化性質(zhì)，運(yùn)用RP - HPLC法測(cè)定不同PH值條件下鞣云實(shí)素及水解產(chǎn)物沒(méi)食子酸的含量變化。1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器1.1實(shí)驗(yàn)藥品鞣云實(shí)素樣品（購(gòu)自上海同田生物技術(shù)有限公司）；鞣云實(shí)素對(duì)照品（購(gòu)自上海同田生物技術(shù)有限公司）；沒(méi)食子酸對(duì)照品（購(gòu)自昆明中檢所）；1.2儀器與試劑高效液相色譜儀（Agilent1200型）；分析天平；電子天平；精密PH測(cè)定儀計(jì)（0. 01pH）；恒溫水浴鍋；恒溫干燥箱；移液管；燒杯；玻璃棒；容量瓶；0.45um微孔濾膜；ImL注射器；無(wú)水甲醇（色譜純）；無(wú)水乙醇（色譜純）；磷酸（分析純）；磷酸氫二鈉（分析純）；醋酸（分析純）；純化水。2實(shí)驗(yàn)方法2.1 磷酸鹽緩沖液的配制 A液：取磷酸10 mL，加純化水至100 mL，搖勻。B液：稱取磷酸氫二鈉7.163 g，加純化水使溶解成100 mL。分別取上述不同體積的A液和B液混合配制成不同PH（1、2、3、4、5、6、7、8）的磷酸鹽緩沖溶液，即得。2.2 對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，于分析天平上精密稱定，加50%甲醇溶解配制定容成每l mL含25μg的溶液，即得；取鞣云實(shí)素對(duì)照品適量，于分析天平上精密稱定，用20%乙醇溶解定容成每lmL含20μg的溶液，即得。2.3供試品溶液的制備 取鞣云實(shí)素樣品適量，精密稱定5. 730 mg.以20%乙醇溶解定容配制成10 mL樣品溶液，取移液管分別吸取制備好的鞣云實(shí)素樣品溶液0.4 mL，放入固定體積的不同PH的磷酸鹽緩沖液中，超聲使其溶解混勻，以600C恒溫水浴鍋控制水浴環(huán)境溫度在（60±0.5）℃，讓鞣云實(shí)素樣品溶液在恒溫條件下充分水解2h，對(duì)水解后的樣品液用微孔濾膜（0. 45 um）進(jìn)行過(guò)濾，即得供試品溶液。2.4色譜條件2.4.1鞣云實(shí)素色譜條件 色譜柱ZoRBAX SB - C18柱（4.6 x250 mm，5 um）；流動(dòng)相：甲醇-0. 4%醋酸（22：78）；柱溫：250C；檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：20 uL[14]。2.4.2沒(méi)食子酸色譜條件 色譜柱ZoRBAX SB - C18柱（4.6 x 250 mm，5 um）；流動(dòng)相：甲醇-0. 2%磷酸（5：95）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：273 nm；流速：1mI/min；進(jìn)樣量：10 uL。2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2.5.1 鞣云實(shí)素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 于分析天平上精密稱定鞣云實(shí)素對(duì)照品2. 860 mg，以20%乙醇溶解定容成25mL，配制成每1mL含0.1144 mg的溶液，分別取上述對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL放入10 mL容量瓶中，用20%乙醇溶液稀釋至刻度配制成不同濃度的對(duì)照品溶液，按上述鞣云實(shí)素色譜條件進(jìn)樣，以鞣云實(shí)素的峰面積（Y）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y= 24877X - 68. 267，r=0.9987，結(jié)果表明：鞣云實(shí)素的峰面積值與濃度有良好的線性關(guān)系，線性范圍為：0. 0572 ug -0. 572 ug。2.5.2沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，于分析天平上精密稱定4. 45 mg，加50%甲醇溶解配制定容成25 mL，分別取上述對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL于10 mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀釋至刻度配制成不同濃度的對(duì)照品溶液，按上述沒(méi)食子酸色譜條件分別進(jìn)樣，以沒(méi)食子酸的峰面積（Y）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得方程Y=23542x一1.7214，r=0.9995，結(jié)果表明：沒(méi)食子酸峰面積值與濃度有良好的線性關(guān)系，線性范圍為：0. 089 ug -0. 89 ug。2.6鞣云實(shí)素和沒(méi)食子酸的含量測(cè)定 分別取2.3項(xiàng)下方法制備的供試品溶液，按2.4色譜條件分別測(cè)定鞣云實(shí)素、沒(méi)食子酸在不同PH的磷酸鹽緩沖液條件下的含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.1 不同PH條件下鞣云實(shí)素和沒(méi)食子酸含量變化 見(jiàn)表1。3.2表l顯示：在緩沖液PH值為l～3的區(qū)間，隨著PH值的增大，鞣云實(shí)素含量逐漸增加，沒(méi)食子酸含量逐漸減少，且當(dāng)緩沖液PH值等于l時(shí)，沒(méi)食子酸的含量最高，當(dāng)緩沖液PH值等于3時(shí)，沒(méi)食子酸含量最低。表明在較酸性條件下，鞣云實(shí)素酯鍵斷裂水解產(chǎn)生較多的沒(méi)食子酸。3.3 從圖（3、4）中可以看出，當(dāng)PH 4～7的范圍內(nèi)，鞣云實(shí)素含量逐漸下降，沒(méi)食子酸含量上升，PH 6～7范同鞣云實(shí)素含量急劇卜-降，而沒(méi)食子酸含量上升緩慢，大部分鞣云實(shí)素可能沒(méi)有水解出沒(méi)食子酸，其有可能被氧化或水解成其他化合物。當(dāng)PH 7—8時(shí)鞣云實(shí)素含量下降，而沒(méi)食子酸含量也在下降，鞣云實(shí)素水解產(chǎn)生沒(méi)食子酸的速度小于沒(méi)食子酸消耗的速度.上述結(jié)果可能和沒(méi)食子酸在堿性條件下不穩(wěn)定而產(chǎn)生紅棓酚等物質(zhì)有關(guān)[15]。4結(jié)論鞣云實(shí)素是存在于多種藥用植物中的活性成分，其有較重要的藥效學(xué)功效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果所顯示鞣云實(shí)素在不同的PH值條件下的含量變化提示鞣云實(shí)素的酯鍵或苷鍵在酸性條件下可能更容易斷裂產(chǎn)生沒(méi)食子酸。進(jìn)一步研究并分析鞣云實(shí)素的理化特性，可為進(jìn)一步研究含鞣云實(shí)素的中藥加工工藝、質(zhì)控、養(yǎng)護(hù)及藥效學(xué)提供一定的參考.參考文獻(xiàn)：[l]陳玉武，蜜柑草抗癌有效成份研究Ⅱ.多酚類成分的分離與 鑒定[J].中草藥，1997，28（4）：198 -202.[2]萬(wàn)振先.葉下珠化學(xué)成分的研究[J].中草藥，1997，28（3）：134 - 135.[3]沙東旭，葉下珠化學(xué)成分的研究[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，17（3）：176 - 178.[4]陳玉武，蜜柑草抗癌有效成份研究Ⅱ.多酚類成分的分離與鑒定[J].中草藥，1997，28（4）：198 -202.[5] Kumaran A，et al. 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