孫成賀　曲正義　張瑞等

摘要：對比研究活性炭、氧化鎂、氫氧化鈣、大孔樹脂AB-8、D301R、D280、D900、HP-20、脫色一號等脫色劑，以期從中篩選出適合西洋參果的最佳脫色劑。采用高效液相色譜法測定西洋參果中人參皂苷Re，用紫外-可見分光光度法檢測西洋參果溶液的吸光度，檢測波長540 nm，分別計算人參皂苷的保留率、樣品脫色率。結果表明，按樹脂 ∶西洋參果液質量比1 ∶4計算，D301R型陰離子大孔樹脂脫色率為93.5%，人參皂苷Re的保留率為86.3%，表明脫色效果優(yōu)于其他脫色劑，具有較高的皂苷保留率，認為D301R型陰離子大孔樹脂非常適用于西洋參果溶液脫色。

關鍵詞：西洋參果；人參皂苷；色素；脫色；大孔樹脂

中圖分類號： S567.5+30.1 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）03-0248-03

西洋參果為西洋參（Panax quinquefolium L.）的成熟果實，在8—9月果實為鮮紅色。人參皂苷是其主要化學成分，西洋參果總皂苷含量為9.05%，果中皂苷含量遠高于主側根部位含量[1]，具有很高的開發(fā)價值。植物色素廣泛分布于植物根、莖、葉、花、果實中，根據(jù)極性不同可分為脂溶性色素和水溶性色素，脂溶性色素有葉綠素、葉黃素、胡蘿卜素等，水溶性色素有花青素[2]。在植物提取物生產(chǎn)過程中，脫色處理為非常重要的一步，否則將嚴重影響產(chǎn)品的外觀和質量，需要采用物理化學方法去除色素，如蔗糖磷酸鈣法脫色等[3]。目前除色素的方法主要有吸附法、化學方法、大孔樹脂吸附法，其中吸附法脫色劑有很多種，如活性白土、凹凸棒土、活性炭、沸石等，其中最常用的是活性炭脫色[4]；化學脫色的原理是利用氧化還原反應，在酸性或堿性介質中通過親電作用和親核作用破壞發(fā)色基團[5]。大孔樹脂為人工合成的具有多空隙結構的聚合物，廣泛應用于植物中皂苷、黃酮、生物堿的提取，以及天然色素提取和植物產(chǎn)品脫色素工藝中，依據(jù)其連接基團極性的不同，可以分為離子交換樹脂和大孔吸附樹脂，離子交換樹脂又可分為陰離子型離子交換樹脂、陽離子型離子交換樹脂。本試驗對幾種脫色方法的不同吸附材料進行比較，以期從中篩選出更適合西洋參果脫色處理的吸附劑。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 試驗儀器 液相色譜儀，日本島津10AvP；LC-10AtvP型液相色譜泵；SIL-10AdvP型自動進樣器；CTO-AvP型色譜柱恒溫箱；CLASS-vP 色譜工作站；紫外-可見分光光度計，日本島津UV2450；UVprob工作站；電子天平，上海英展機電有限公司；調速多用振蕩器，國華HY-2；旋轉蒸發(fā)儀，上海申生R2003KE。

1.1.2 試驗試劑 鹽酸、氫氧化鈉、甲醇、氧化鎂、氫氧化鈣，分析純；乙腈，色譜純；超純水。

1.1.3 試驗材料 西洋參果購于長春市樂山西洋參生產(chǎn)基地，經(jīng)中國農業(yè)科學院特產(chǎn)研究所姚春林老師現(xiàn)場鑒定，為西洋參（Panax quinquefolium L.）果實。

人參皂苷Re，中國藥品生物制品檢定所（批號：110754-201123）；陰離子樹脂D301R，天津市光復精細化工研究所；陰離子樹脂D280，南開大學化學廠；樹脂AB-8、001×7、D900、脫色一號（其中001×7為陽離子大孔樹脂，D009、脫色一號為陰離子大孔樹脂），滄州市寶恩科技有限公司；HP-20，國產(chǎn)；活性炭，天津市天達精細化工廠。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品前處理 取7.000 kg除去種子后的西洋參果果渣，按照料液比1 g ∶6 mL加入甲醇提取12 h，過濾；提取3次，合并濾液，旋轉蒸發(fā)儀回收至浸膏狀，溶解于3.0 L蒸餾水中作為供試品溶液。

1.2.2 樣品溶液脫色 先用3%HCl將大孔樹脂AB-8、D301R、D280、D900、HP-20、脫色一號處理3～4 h，再用蒸餾水沖洗至中性，用3% NaOH處理3～4 h，最后用蒸餾水沖洗至中性；陽離子大孔樹脂001×7的處理過程相反。

分別稱取1.0、2.0、3.0、5.0、8.0 g處理好的樹脂裝入三角瓶中，分別加入20 mL樣品溶液，搖床振搖2 h，靜止過夜12 h，濾紙過濾后作為待測液。

分別稱取1.0、2.0、3.0、5.0、8.0 g活性炭、輕質氧化鎂、氫氧化鈣裝入三角瓶中，加入20 mL樣品溶液，水浴溫度 50 ℃，脫色2 h，濾紙過濾后作為待測液。

1.2.3 脫色率測定 將西洋參果溶液在波長400～800 nm下進行全波長掃描，采樣間隔0.5 nm，掃描速度為快速，以蒸餾水作空白對照。脫色率的計算公式為：

脫色率=[SX（]脫色前吸光度-脫色后吸光度[]脫色前吸光度[SX）]×100%。

1.2.4 人參皂苷Re測定 對照品溶液的制備：精確稱取356 mg人參皂苷Re，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，搖勻，備用。

色譜條件：采用大連伊利特Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相A為乙腈，流動相B為水，流速1.0 mL/min，檢測波長203 nm，柱溫30 ℃。洗脫條件見表1。

分別進樣5、10、15、20、30 μL，繪制色譜圖對峰面積積分，以色譜峰面積為橫坐標、人參皂苷Re質量為縱坐標繪制標準曲線。

穩(wěn)定性試驗：樣品原溶液分別在制備后0、4、8、12、24 h進樣檢測，以測得的人參皂苷Re峰面積計算。

精密度試驗：對照品溶液連續(xù)進樣10 μL，重復進樣6次，以測定的人參皂苷Re峰面積計算。

重復性試驗：樣品原溶液平行制備6份供試樣品，分別計算人參皂苷Re的峰面積。

加標回收率試驗：取2 g西洋參果渣，加入10 mL甲醇，靜置過夜，過濾，反復提取3次后合并濾液，旋轉蒸發(fā)儀濃縮，甲醇定容至10 mL容量瓶中，加入2 mL人參皂苷Re標準對照品溶液，進樣10 μL；測定6次，計算色譜峰面積、回收率。endprint

樣品溶液進樣10 μL，測定樣品溶液中人參皂苷Re的峰面積，帶入回歸曲線計算Re的含量。人參皂苷Re保留率的計算公式如下：

人參皂苷Re保留率=[SX（]吸附后人參皂苷Re含量吸附前人參皂苷Re含量[SX）]×100%。

2 結果與分析

2.1 不同波長下西洋參果溶液的光譜掃描結果

不同波長下西洋參果溶液的光譜掃描結果見圖1，可以看出，西洋參果溶液在540 nm有特征吸收波長。

3 結論

在考察人參和西洋參產(chǎn)品質量時，常以人參皂苷含量進行比較，人參皂苷的測定方法有香草醛-硫酸比色法[6]和高效液相色譜測定法[7-10]。由于西洋參果中色素成分含量較高，在用香草醛-硫酸比色法測定時，色素分子會對吸光度檢測產(chǎn)生干擾，使結果偏高，因此本試驗選用高效液相色譜法檢測人參皂苷含量。

從精密度試驗、穩(wěn)定性試驗和重現(xiàn)性試驗結果看出，此方法可以作為西洋參果和西洋參產(chǎn)品中人參皂苷Re的測定方法。試驗中分別對洗脫系統(tǒng)乙腈水和甲醇水進行比較，結果表明，乙腈水洗脫系統(tǒng)更適合人參皂苷Re的檢測，同時對方法進行了優(yōu)化，使得分離度更好。

從脫色結果和皂苷保留率看，弱極性陰離子樹脂脫色能力最好，與文獻記述一致，其中AB-8和HP-20的脫色效果非常好，但是同時會將皂苷吸附，不適合皂苷脫色處理，更適合于皂苷吸附和富集。

參考文獻：

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