唐 映,楊萬章,劉杰文

丹參注射液對腦梗死大鼠外周血NSE及NGF水平的影響

唐 映1,楊萬章2,劉杰文3

目的觀察丹參注射液對腦梗死大鼠外周血神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)及神經(jīng)生長因子(NGF)水平的影響。方法將符合標(biāo)準(zhǔn)模型-大腦中動脈閉塞(MCAO)的24只大鼠分為丹參注射液組、生理鹽水組,另隨機(jī)取12只大鼠為假手術(shù)組。丹參注射液組每天注射丹參注射液2 ml,生理鹽水組每天注射生理鹽水2 ml,假手術(shù)組不用藥。觀察治療前,治療后7 d、14 d,外周血NSE、NGF水平及神經(jīng)功能缺損評分(mNSS)。結(jié)果 丹參注射液組NSE水平7 d、14 d均低于生理鹽水組和假手術(shù)組;NGF水平7 d變化不大,14 d均高于生理鹽水組和假手術(shù)組。mNSS評分較于生理鹽水組明顯下降。結(jié)論 丹參注射液能降低NSE水平,調(diào)高N GF含量,促進(jìn)腦梗死大鼠神經(jīng)功能恢復(fù),其重要機(jī)制考慮與丹參注射液能改善細(xì)胞缺血缺氧狀態(tài),減少神經(jīng)元細(xì)胞的損傷、變性壞死有關(guān),其中外周血NSE、NGF水平對腦梗死預(yù)后判斷有積極的臨床意義。

腦梗死;神經(jīng)元特異性烯醇化酶;神經(jīng)生長因子;丹參注射液

丹參是傳統(tǒng)中藥中公認(rèn)的對腦梗死最有效的藥物之一,具有活血化瘀的作用,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為能夠改善微循環(huán),提供局部血供量、抗氧化、抑制血小板聚集、改變血黏度等作用。丹參注射液不但對血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及腦源性神經(jīng)生長因子(BDNF)有積極作用,還能促進(jìn)雙側(cè)腦室室管膜下區(qū)(SVZ)神經(jīng)細(xì)胞增殖[1,2]。

神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)是參與糖酵解途徑的烯醇化酶,腦神經(jīng)細(xì)胞損害后,NSE從胞質(zhì)釋放至腦脊液,同時通過損傷的血腦屏障進(jìn)入血液循環(huán),腦組織損傷越重,NSE釋放越多。本研究觀察丹參注射液對急性腦梗死大鼠外周血NSE及NGF的影響,探討丹參注射液治療腦梗死的機(jī)制作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選取健康成年雄性SD大鼠60只 (廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供),體重250 g～ 300 g,飼養(yǎng)于正常晝夜環(huán)境中,給予標(biāo)準(zhǔn)飼料和水。

1.2 腦梗死大鼠模型 采用改良頸總動脈線栓法制備大鼠左側(cè)大腦中動脈閉塞模型致局灶性永久性腦缺血梗死模型。大鼠手術(shù)后12 h根據(jù)Zea lLonga 5分制評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評分,丹參注射液組及生理鹽水組均選取1分～3分為實驗對象,假手術(shù)組只剪開頸部中央,暴露頸總動脈和頸內(nèi)動脈,但不予大腦中動脈阻斷。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 剔除因麻醉意外、手術(shù)死亡和未達(dá)標(biāo)的大鼠。將符合標(biāo)準(zhǔn)模型的24只大鼠分為丹參注射液組、生理鹽水組;另隨機(jī)取12只大鼠為假手術(shù)組。

1.4 治療方法 丹參注射液組:入選大鼠12 h后使用丹參注射液(杭州正大青春寶藥業(yè)公司生產(chǎn)批號: 1208181)2 ml腹腔注射,每日1次,連續(xù)14 d。生理鹽水組:入選大鼠12 h后使用生理鹽水2 ml腹腔注射,每日1次,連續(xù)14 d。假手術(shù)組:不使用任何藥物。

1.5 評定指標(biāo)

1.5.1 神經(jīng)功能缺損指標(biāo)評定 采用改良神經(jīng)功能缺損評分(m NSS),分別在模型制備后24 h,治療7 d、14 d后評定。評分0～18分,分?jǐn)?shù)越高,表明神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。

1.5.2 外周血NSE、NGF指標(biāo) 模型制備后24 h 1 d、7 d、14 d,分別在大鼠眼眶后靜脈叢采取靜脈血2 ml,分離出血清后置-80°冰箱保存?zhèn)溆?。NSE、NGF均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測,試劑盒由美國Rapidbio公司提供。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用統(tǒng)計軟件SPSS 16.0進(jìn)行處理,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,滿足正態(tài)性和方差齊性后采用配對t檢驗;不滿足正態(tài)性和方差齊性時采用秩和檢驗。

2 結(jié) 果

丹參注射液能降低腦梗死大鼠外周血NSE水平(見表1),提高血液中NGF水平(見表2)。丹參注射液治療腦梗死SD大鼠,7 d后隨著腦神經(jīng)元細(xì)胞損傷的增加,血清釋放的NSE明顯升高,2周后NSE逐漸下降,同時血液中NGF含量較前升高,明顯優(yōu)于對照組。丹參注射液組神經(jīng)功能缺損評分顯著下。

表1 3組血清NSE濃度比較(±s)μg/L

表1 3組血清NSE濃度比較(±s)μg/L

1 d 7 d 14 d丹參注射液組12 9.03±0.27 12.86±0.391)2)10.71±0.19組別n生理鹽水組 12 8.94±0.26 15.73±0.581)2)13.79±0.231)2)假手術(shù)組 12 9.04±0.47 8.97±0.155 9.01±0.02與假手術(shù)組比較;1)P<0.01;與生理鹽水組比較,2)P< 0.01。

表2 3組血清NGF濃度比較(±s)ng/ml

表2 3組血清NGF濃度比較(±s)ng/ml

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表3 3組神經(jīng)功能缺損評分比較(±s)分

表3 3組神經(jīng)功能缺損評分比較(±s)分

1 d 7 d 14 d丹參注射液組12 10.49±0.76 6.47±1.271)4.43±0.721)2)組別n生理鹽水組12 10.20±1.03 8.93±0.66 7.09±0.822)與生理鹽水組比較,P<0.05;與本組治療7 d時比較,2) P<0.05

3 討 論

腦梗死(ACI)是由于腦組織局部供血動脈血流的突然減少或停止,造成該血管供血區(qū)的腦組織缺血、缺氧,腦組織壞死、軟化。NSE存在于神經(jīng)組織和神經(jīng)內(nèi)分泌組織中,在缺血缺氧24 h內(nèi),NSE彌散至細(xì)胞間隙,導(dǎo)致NSE應(yīng)激性升高,顱內(nèi)水腫范圍擴(kuò)大,顱內(nèi)壓增高,NSE高水平持續(xù),2周后才開始下降。NSE可作為判斷腦梗死患者病情嚴(yán)重程度、臨床轉(zhuǎn)歸及預(yù)后的重要生化指標(biāo)[3]。腦梗死大鼠血清NSE濃度在起病1 d、3 d、7 d均顯著升高,經(jīng)神經(jīng)節(jié)苷脂治療后其表達(dá)水平明顯下降[4]。Chabok等[5]認(rèn)為NSE是腦損傷的早期生物標(biāo)記物,甚至頭顱CT上無明顯改變時,血漿中的NSE水平已明顯升高。在缺血性卒中中,NSE水平與梗死體積及神經(jīng)功能缺損評分有關(guān),NSE能夠作為評價ACI患者預(yù)后的有效指標(biāo)[6-8]。

NGF是一種可促進(jìn)與維持神經(jīng)生長、分化的特殊蛋白,Lu jan等[9]與de Laporte等[10]對脊髓損傷大鼠神經(jīng)的NGF總RNA分析發(fā)現(xiàn),脊髓損傷4 d后,其受傷區(qū)域NGF受體RNA的表達(dá)量明顯升高,脊髓損傷后7 d達(dá)高峰,脊髓損傷后28 d,其表達(dá)量仍然高于正常水平,證實脊髓受傷后局部NGF增高與其髓內(nèi)神經(jīng)損傷有一定相關(guān)性,這提示神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)上調(diào)可能是限制神經(jīng)細(xì)胞凋亡過程的內(nèi)在機(jī)制。電針夾脊穴治療后,損傷段脊髓組織中的NGF含量多,使受損脊髓神經(jīng)元及其神經(jīng)通路得到明顯修復(fù)[11]。烏芪通絡(luò)膠囊使大鼠坐骨神經(jīng)細(xì)胞中NGFm RNA的量顯著增高,也證實NGF提高能增強(qiáng)神經(jīng)功能修復(fù)[12]。NGF含量的改變及腦缺血的病理變化與腦缺血區(qū)神經(jīng)元變性、壞死密切相關(guān)[13]。運動訓(xùn)練能促進(jìn)SD大鼠腦組織NGF含量增加,從而較快使大鼠運動功能恢復(fù)[14]。丹參能降低血黏度,改善細(xì)胞缺血缺氧狀態(tài),促進(jìn)血管側(cè)支循環(huán)的建立。丹參注射液能改善腦梗死SD大鼠神經(jīng)功能,NSS、m NSS評分下降,上調(diào)腦組織VEGF水平,促進(jìn)SVZ內(nèi)NSCs增殖。

本研究證實丹參注射液不但能降低腦梗死大鼠外周血NSE水平,同時能提高血液中NGF水平。丹參注射液治療腦梗死SD大鼠,7 d后隨著腦神經(jīng)元細(xì)胞損傷的增加,血清釋放的NSE明顯升高,2周后NSE逐漸下降,同時血液中NGF含量較前升高,明顯優(yōu)于對照組,考慮丹參注射液通過改善細(xì)胞缺血缺氧狀態(tài),推遲和減少腦部神經(jīng)元細(xì)胞的損傷、變性壞死,縮小腦神經(jīng)細(xì)胞壞死范圍,挽救瀕死神經(jīng)細(xì)胞,減少NSE的釋放;提高神經(jīng)細(xì)胞周圍NGF營養(yǎng)因子的含量,保證缺血灶區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的營養(yǎng),支持神經(jīng)元的營養(yǎng)存活,加速神經(jīng)細(xì)胞的生長和修復(fù),NGF的上調(diào)也抑制了細(xì)胞凋亡的發(fā)生,促進(jìn)大鼠神經(jīng)運動功能的進(jìn)一步恢復(fù), m NSS評分明顯下降。

外周血NSE及NGF檢測簡單易行,且能較敏感推斷病情發(fā)展和預(yù)測病后恢復(fù)。

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Effect of Danshen Injection on the Levels of Blood NSE and NGF in Rats with Cerebral Infarction

Tang Ying,Yang Wanzhang,Liu Jiewen
The Ninth Peop le’s Hospita l of Shenzhen,Shenzhen 518116,Guangdong,China

ObjectiveTo observe the e ffect of Danshen in jection(DSI)on the levels of blood neuron-specific enolase(NSE)and nerve grow th factor(NGF)in rats with cerebral infarction(CI).MethodsTwenty-four with the standard m ode l-m idd le cerebra lartery occlusion(MCAO)were divided into DSIgroup,saline group and the other 12 rats were randomly selected for the shamgroup. DSIgroup were injected with DSI 2 mldaily,saline group were injected with saline 2 ml daily and shamgroup withoutmedicine.The levels of blood NSE,NGF,and neurological deficits scores m NSS were observed before treatment,after 7 days,14 days.ResultsThe leve ls of blood NSE in DSIgroup a fter 7 days,14 days were lower than that in sa line group and shamgroup.The leve ls of blood NGF in DSIgroup a fter 7 days,14 days were higher than that in sa line group and shamgroup.The m NSS scores in DSIgroup were lower than that in saline group.Conc lusionDSIcan reduce the levels of b lood NSE,increase the NGF,and promote the recovery in rats with acute cerebral infarction.

cerebral infarction;neuron-specific enolase;nerve grow th factor;Danshen injection

R743 R289

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2015.05.013

1672-1349(2015)05-0597-03

2014-11-09)

(本文編輯 王雅潔)

廣東省中醫(yī)藥管理局資助課題項目(No.20132021)

1.深圳市第九人民醫(yī)院龍崗中心醫(yī)院(深圳518116), E-m ail:fengqin361@163.com;2.深圳市第六人民醫(yī)院南山區(qū)人民醫(yī)院;3.深圳市第五人民醫(yī)院羅湖區(qū)人民醫(yī)院