張琦，牛文彥，李曉亮，蘇桂新，孫續(xù)國(guó)

(1天津醫(yī)科大學(xué)，天津300070；2天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院)

急性腦梗死患者血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF的變化及意義

張琦1,2，牛文彥1，李曉亮1，蘇桂新1，孫續(xù)國(guó)1

(1天津醫(yī)科大學(xué)，天津300070；2天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院)

目的 探討血漿生物標(biāo)志物檢查診斷急性腦梗死患者的特異性和敏感度，以輔助臨床診斷和病情隨訪。方法 分別測(cè)定150例急性腦梗死患者(觀察組)和50例健康查體者(對(duì)照組)的血漿同型半胱氨酸(Hcy)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)及血管性假血友病因子(vWF)水平。結(jié)果 觀察組血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平均顯著高于對(duì)照組(P均<0.05)。根據(jù)ROC曲線得出當(dāng)Hcy臨界值為9.11 μmol/L時(shí)診斷急性腦梗死的敏感性為95.2%、特異性為76%，eNOS臨界值為437.30 μmol/L時(shí)診斷的敏感性為79%、特異性為96%，sTM臨界值為7.43 μmol/L時(shí)診斷的敏感性為75.2%、特異性為96%，hs-CRP臨界值為3.38 mg/L時(shí)診斷的敏感性為81.9%、特異性為90%，vWF臨界值為194.85 ng/mL時(shí)診斷的敏感性為75.2%、特異性為80%。結(jié)論 血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平可作為急性腦梗死診斷的輔助指標(biāo)。

腦梗死，急性；同型半胱氨酸；一氧化氮合酶；C反應(yīng)蛋白質(zhì)；血栓調(diào)節(jié)蛋白；血管性假血友病因子

研究顯示，血漿同型半胱氨酸(Hcy)濃度升高是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]，高水平Hcy可激活炎癥細(xì)胞表達(dá)炎癥因子促進(jìn)血栓形成，導(dǎo)致腦梗死的發(fā)生[3，4]；內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性可反映血漿NO水平，可間接作為內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度評(píng)價(jià)指標(biāo)，提示血栓形成或輔助診斷心腦血管梗死[5]；血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)是血管內(nèi)皮細(xì)胞合成并位于細(xì)胞表面的凝血酶受體，血漿可溶性TM(sTM)可作為反映血管內(nèi)皮損傷的敏感指標(biāo)[6]；血清超敏C反應(yīng)蛋白(CRP)是急性炎癥標(biāo)志物，與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和演變相關(guān)[7]；血管性假血友病因子(vWF)是血管內(nèi)皮細(xì)胞下層黏附的糖蛋白，內(nèi)皮細(xì)胞損傷后釋放vWF，參與血小板黏附和聚集過(guò)程，是反映血管內(nèi)皮功能異常的特異性標(biāo)志物。上述生物標(biāo)志物對(duì)系統(tǒng)分析急性腦梗死具有重要臨床意義。本研究通過(guò)檢測(cè)急性腦梗死患者血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP及vWF水平，繪制ROC曲線分析上述指標(biāo)用于診斷急性腦梗死的特異性和敏感性，為臨床診斷及隨訪病情提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年4月～2014年4月天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的急性腦梗死患者150例(觀察組)，男71例、女79例，年齡48～82(67.39±8.25)歲。均符合1995年中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四次全國(guó)腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的《各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)》[8]，并經(jīng)頭顱CT和(或)MRI檢查確診。患者于發(fā)病72 h內(nèi)入院，神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分16～30分。另?yè)窠】挡轶w者50例作為對(duì)照組，男25例、女25例，年齡45～76(63.21±11.45)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 采集受試者靜脈血2 mL，枸櫞酸鈉抗凝，離心分離血漿。Hcy測(cè)定采用循環(huán)酶法，使用日本HITACHI7180全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，試劑由臺(tái)塑公司提供。sTM和eNOS測(cè)定采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心(ELISA)法，使用芬蘭雷勃公司Multiskan MK3酶標(biāo)儀、Wellwash4 MK2洗板機(jī)檢測(cè)，試劑由深圳晶美生物工程有限公司提供。hs-CRP測(cè)定采用免疫比濁法，使用美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司的IMMAGE 800雙光徑免疫濁度分析儀檢測(cè)，試劑由美國(guó)貝克曼公司提供。vWF檢測(cè)采用酶標(biāo)法，使用法國(guó)STAGO公司STA-compact全自動(dòng)血凝儀檢測(cè)，試劑由STAGO公司提供。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿生物標(biāo)志物水平比較 見(jiàn)表1。

表1 兩組血漿生物標(biāo)志物水平比較±s)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

2.2 ROC曲線分析 將兩組血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平錄入SPSS軟件，進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)后，以指標(biāo)的敏感度為縱軸、1-特異度為橫軸繪制ROC曲線，見(jiàn)圖1。血漿Hcy、eNDS、GTM、hs-CRP、vWF的ROC曲線下面積分別為0.938、0.873、0.879、0.922、0.786。其中Hcy與hs-CRP的曲線下面積大于0.9，與0.5相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示用于診斷急性腦梗死的準(zhǔn)確性較高。sTM、eNOS和vWF的曲線下面積分別為0.879、0.873和0.786，在0.7到0.9之間，提示用于診斷急性腦梗死的準(zhǔn)確性中等。

圖1 血漿Hcy、eNOS、s-TM、hs-CRP、vWF 診斷急性腦梗死的ROC曲線

2.3 各血漿生物標(biāo)志物評(píng)價(jià)指標(biāo)分析 見(jiàn)表2。

表2 各血漿生物標(biāo)志物的評(píng)價(jià)指標(biāo)分析

3 討論

血管內(nèi)皮損傷標(biāo)志物在急性腦梗死早期診斷中具有重要意義。本研究顯示，急性腦梗死患者血漿Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP及vWF水平明顯高于健康對(duì)照者，提示這五個(gè)標(biāo)志物可用于輔助檢查急性腦梗死。進(jìn)一步繪制這五項(xiàng)生物標(biāo)志物的ROC曲線，結(jié)果顯示，Hcy的ROC曲線最接近于理想診斷指標(biāo)曲線，其ROC曲線下面積為0.938。據(jù)報(bào)道，血漿Hcy水平每增加5 μmol/L，血管疾病發(fā)生的危險(xiǎn)增加50%，是腦卒中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[9]。目前缺少確定臨界值，本實(shí)驗(yàn)臨界值為9.11 μmol/L時(shí)，靈敏度為95.2%、特異度為76%。hs-CRP的ROC曲線下面積為0.922，大于0.9，認(rèn)為其診斷的準(zhǔn)確性較高。最近報(bào)道，hs-CRP能夠更早期、靈敏地反映炎癥水平，可用于臨床輔助檢查急性腦梗死。本研究顯示，急性腦梗死患者血漿eNOS水平顯著高于健康對(duì)照組，在臨界值為437.30 μmol/L時(shí)其靈敏度為79%、特異度為96%。ROC曲線下面積為0.873，在0.7到0.9之間，認(rèn)為其準(zhǔn)確性中等，臨床上尚未有報(bào)道eNOS診斷急性腦梗死檢測(cè)參考范圍，本文提出高于437.30μmol/L為診斷臨界值。vWF在急性腦梗死發(fā)病早期參與腦梗死的病理生理過(guò)程，可反映血管內(nèi)皮損傷程度，有早期診斷及判斷預(yù)后的潛能[10]。急性腦梗死患者vWF水平顯著高于健康對(duì)照組，在臨界值為194.85 ng/mL時(shí)其靈敏度為75.2%、特異度為80%，陽(yáng)性似然比88.8%，陰性似然比為60.6%，ROC曲線下面積為0.786，認(rèn)為其診斷的準(zhǔn)確性中等。血漿sTM水平能夠反映血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，可用于早期輔助檢查急性腦梗死[11]。本研究中急性腦梗死患者血漿sTM水平顯著高于健康對(duì)照組，在臨界值7.43 μmol/L時(shí)靈敏度為75.2%、特異度為96%。ROC曲線下面積為0.879，在0.7到0.9之間，其準(zhǔn)確性中等，目前臨床上尚未確定sTM輔助診斷急性腦梗死參考范圍，本研究提出高于7.43 μmol/L為檢查臨界值。

綜上所述，五項(xiàng)生物標(biāo)志物中Hcy作為急性腦梗死的輔助檢查指標(biāo)準(zhǔn)確性最高，hs-CRP準(zhǔn)確性僅次于Hcy，eNOS、s-TM及vWF輔助檢查準(zhǔn)確性中等。

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ROC curve analysis of plasma biomarkers as Hcy, eNOS, sTM, hs-CRP and vWF for patients with acute cerebral infarction

ZHANGQi1,NIUWen-yan,LIXiao-liang,SUGui-xin,SUNXu-guo

(1TianjinMedicalUniversity,Tianjin300070,China)

Objective To explore the specificity and sensitivity of plasma biomarkers in patients with acute cerebral infarction for clinical auxiliary diagnosis and a follow-up. Methods A total of 150 cases of acute cerebral infarction patients (observed group), 50 cases of healthy controls (control group) were included. Circular enzymatic and ELISA method and immune turbidimetric method were respectively used o determine the plasma homocysteine (Hcy), endothelial nitric oxide synthase (eNOS), soluble thrombus regulatory proteins (sTM), hypersensitive c-reactive protein (hs-CRP) and von willebrand factor (vWF) level. Results The plasma levels of those biomarkers as Hcy, eNOS. sTM, hs-CRP and vWF were significantly higher in observed group than those in healthy control group(P<0.05). Aarea under the ROC curve were respectively 0.938, 0.873, 0.879, 0.922 and 0.786. According to the ROC curve, when the Hcy critical value was 9.11 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 95.2%, the specificity was 76%. When the eNOS critical value was 437.30 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 79%, the specificity was 96%.When the sTM critical value was 7.43 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 75.2%, the specificity was 96%. When the hs-CRP threshold was 3.38 mg/L, the diagnostic sensitivity was 81.9%, the specificity was 90%; when the vWF critical value was 194.85 ng/mL, the diagnostic sensitivity was 75.2%, the specificity was 80%. Conclusion The levels of Hcy, eNOS, sTM, hs-CRP and vWF in plasma may be auxiliary biomarkers for the diagnosis of acute cerebral infarction.

cerebral infarction, acute; Hcy; NOS; CRP; TM; vWF

張琦(1985-)，女，技師，研究方向?yàn)榕R床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。E-mail：102.8@163.com

牛文彥(1965-)，女，教授，研究方向?yàn)榕R床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)及免疫學(xué)?，F(xiàn)主持4項(xiàng)國(guó)家自然基金，1項(xiàng)教育部博士點(diǎn)專項(xiàng)基金，3項(xiàng)科委重點(diǎn)項(xiàng)目。E-mail：wniu@tijmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.006

R743.33

A

1002-266X(2015)01-0017-03

2014-07-30)