張 睿，譚 巖＊，邸 軍，劉樹軍

（1.吉林省人民醫(yī)院，吉林長春130021；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院；3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院）

幽門螺旋桿菌抗原在多種慢性腎小球腎炎患者腎組織中表達(dá)情況分析

張 睿1，2，譚 巖1，2＊，邸 軍1，劉樹軍3

（1.吉林省人民醫(yī)院，吉林長春130021；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院；3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院）

目前已公認(rèn)幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）是慢性胃炎、消化性潰瘍的重要致病因子，同時(shí)，Hp感染與胃腸外疾病關(guān)系的研究也日益受到重視。本文主要是探討Hp感染與多種慢性腎小球腎炎發(fā)生的關(guān)系。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象

收集2009年8月－2011年8月本科病房共首次經(jīng)臨床和病理確診的膜性腎?。∕N）36例、系膜增殖性腎炎（MSPGN）35例、IgA腎?。↖gAN）46例、膜增生性腎炎（MPGN）1例、局灶節(jié)段性腎小球硬化（FSGS）10例患者作為研究對(duì)象。所有病例活檢前4周內(nèi)未服用過抑制或根除Hp的藥物，腎臟體積大小正常，血肌酐＜115μmol／L。各種腎病患者中MN組男17例，女19例，平均（42.41±13.43）歲；MSPGN組男16例，女19例，平均（39.52±9.03）歲；IgAN組男19例，女27例，平均（38.92± 12.64）歲；MPGN組女1例，45歲；FSGS組男4例，女6例，平均（40.35±16.31）歲。各組間在年齡、性別等方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 主要材料

兔抗人Hp多克隆抗體、DAB顯色劑（丹麥Dakopatts公司）；FITC標(biāo)記的兔抗人多克隆Hp－IgG抗體（美國Abcam公司）。

1.3 方法

①取經(jīng)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)和組織學(xué)HE染色證實(shí)存在胃Hp感染患者的胃竇部黏膜組織作為陽性對(duì)照標(biāo)本。②B超引導(dǎo)下腎穿刺于右腎下極取腎組織，冰凍切片，厚度1μm。③間接免疫熒光、間接免疫組化按常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行。④數(shù)據(jù)處理：計(jì)量資料以ˉx±s表示，計(jì)數(shù)資料以率表示。樣本均數(shù)檢驗(yàn)用t檢驗(yàn)，樣本率檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS軟件，P＜0.05或P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陽性對(duì)照標(biāo)本間接免疫熒光示胃腺腔內(nèi)及部分腺上皮細(xì)胞呈綠色熒光強(qiáng)陽性（3＋）。間接免疫組化示胃腺腔內(nèi)及部分腺上皮細(xì)胞呈棕黃色陽性。

2.2 腎活檢標(biāo)本

2.2.1 間接免疫熒光和間接免疫組化方法檢測所有36例MN、35例MSPGN、46例IgAN、1例MPGN、10例FSGS腎活檢標(biāo)本，腎小球毛細(xì)血管壁未檢出Hp抗原，腎小球內(nèi)的其他部位亦無陽性發(fā)現(xiàn)。24例MN的腎小管上皮細(xì)胞、管型或腎小動(dòng)脈壁可見陽性標(biāo)記，分別顯示黃綠色熒光（強(qiáng)度為2＋）和棕黃色染色，其中2例管型陽性，2例腎小動(dòng)脈壁陽性；2例MSPGN和2例IgAN腎小管上皮細(xì)胞可見陽性標(biāo)記，分別顯示黃綠色熒光（強(qiáng)度為1＋）和棕黃色染色；4例FSGS腎小管上皮細(xì)胞可見陽性標(biāo)記，分別顯示黃綠色熒光（強(qiáng)度為2＋）和棕黃色染色，其中1例腎小動(dòng)脈壁陽性；1例MPGN腎小管上皮細(xì)胞可見陽性標(biāo)記，分別顯示黃綠色熒光（強(qiáng)度為2＋）和棕黃色染色，具體情況見表1。

表1 間接免疫熒光、免疫組化法檢測各組腎炎患者腎組織Hp抗原表達(dá)結(jié)果

免疫熒光結(jié)果見下圖1－11。

圖1 膜性腎?。∕N）

圖2 局灶節(jié)段性腎小球硬化（FSGS）

圖3 系膜增生性腎炎（MSPGN）

圖4 IgA腎病（IgAN）

圖5 膜增生性腎小球腎炎（MPGN）

免疫組化結(jié)果見下圖：

圖6 MN（SP，×200）

圖7 FSGS（SP，×200）

圖8 IgAN（SP，×200）

圖9 MSPGN（SP，×200）

圖10 MPGN（SP，×200）

圖11 胃粘膜陽性對(duì)照（SP，×400）

2.2.2 將膜性腎病、IgA腎病、系膜增生性腎炎三組進(jìn)行比較：各組腎炎患者腎組織Hp抗原表達(dá)陽性率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2＝52.187；P＜0.001）；兩兩比較：膜性腎病組分別與IgA腎病組、系膜增生性腎炎組比較，腎組織Hp抗原表達(dá)陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），IgA腎病組與系膜增生性腎炎組比較，腎組織Hp抗原表達(dá)陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；由于局灶節(jié)段性腎小球硬化癥（FSGS）、膜增生性腎小球腎炎（MPGN）樣本量少，無法計(jì)算其與其他組間Hp抗原表達(dá)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討論

1983年澳大利亞學(xué)者Warren和Marshall研究發(fā)現(xiàn)人胃粘膜中的幽門螺桿菌（Hp）是慢性胃炎和消化性潰瘍的關(guān)鍵致病因素。隨后隨著對(duì)Hp的進(jìn)一步研究，人們發(fā)現(xiàn)它不僅是慢性胃炎、消化性潰瘍等胃內(nèi)疾病的關(guān)鍵，還發(fā)現(xiàn)它與許多胃外疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密不可分的關(guān)系。如冠心病、高血壓、胰腺相關(guān)疾病、肝膽疾病、腦血管疾病、過敏性紫癜、蕁麻疹等，尤其是1997年Nagshima等［1］研究提示Hp可能參與了MN的發(fā)生，其機(jī)制可能與Hp介導(dǎo)的異常免疫反應(yīng)有關(guān)，但這種抗原究竟是Hp循環(huán)抗原還是Hp類似抗原仍不明了。Ko等［2］推測部分腎病的發(fā)病可能與Hp介導(dǎo)免疫反應(yīng)有關(guān)。但侯菲等［3］卻得出了相反研究結(jié)果，認(rèn)為Hp感染與膜性腎病無關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，應(yīng)用兩種標(biāo)記技術(shù)顯示MN組、FSGS組、MPGN組在各組腎炎患者中腎組織Hp抗原陽性率最高這與先前研究［6］的兩組Hp－IgG抗體血清學(xué)檢測結(jié)果是一致的，但各組均未發(fā)現(xiàn)多克隆抗Hp抗體與受試者的腎小球毛細(xì)血管壁起反應(yīng)，而只在部分患者的腎小管、管型和腎小動(dòng)脈壁發(fā)現(xiàn)陽性反應(yīng)，但交叉反應(yīng)是否與部分腎病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)尚不能定論。Hp抗原表達(dá)陽性率在MN組、IgAN組、MSPGN組三組間有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這似乎從另一個(gè)角度說明Hp感染與MN有關(guān)。而且在FSGS組、MPGN組患者的腎小管上皮細(xì)胞也都發(fā)現(xiàn)明顯的陽性反應(yīng)，雖然無法確認(rèn)其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但需要更大的樣本量來驗(yàn)證。

目前推測Hp感染與腎病發(fā)生的關(guān)系可能為Hp介導(dǎo)的異常免疫反應(yīng)所致，如產(chǎn)生循環(huán)抗原或Hp類似抗原等［1，4，5］。但?zgür TANRIVERDI［7］提出糖尿病腎病合并Hp感染者比不合并Hp感染者尿蛋白明顯增加，考慮Hp感染對(duì)腎病的進(jìn)展有促進(jìn)作用。因此Hp感染在腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展中是其始發(fā)因素還是進(jìn)展因素還需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。Hp感染參與腎病發(fā)生的確切機(jī)制還需要進(jìn)行更深入的研究來確認(rèn)，Hp感染在腎病的發(fā)生中的具體地位也需要大規(guī)模的臨床研究來證明?？傊?，Hp感染的意義以及與腎病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系需進(jìn)一步深入研究。

［1］Nagshima R，MaMa K，Yuda F，et al.Helicobacter pyloIi antigen in the glomemli of patients with membranous nephropathy.Vircbows Arch，1997，431：232.

［2］Ko GH，Park HB，Shin MK，et al.Monoelonal antibodies against Helicobaeter pylori crossreact with humantissue［J］.Helieobaeter，1997，2：210.

［3］侯 菲，王 彥，楊 林，等.幽門螺桿菌抗原與膜性腎病關(guān)系的探討［J］.中華腎臟病雜志，2005，21（1）：53.

［4］Gasbarrini A，F(xiàn)ranceschi F.Autoimmune diseases and Helicobacter pylori infection［J］.Biomed Pharmacother，1999，53：223.

［5］Yokoyama H，Yoshimoto K，Wada T.Membranous nephropathy［J］.Nippon Rinsho，2004，62：1856.

［6］張 睿，譚 巖，等.慢性腎小球腎炎合并幽門螺旋桿菌的臨床分析［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2013，17（01）：141.

［7］?zgür TANRIVERDI.Association of Helicobacter pylori infection with microalbuminuria in type 2diabetic patients［J］.Turk J Gastroenterol，2011，22：569.

2014－05－20）

1007－4287（2015）02－0266－03

吉林省科技廳科研項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)為200905194

＊通訊作者