張曉寧，馬玉俠

山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014

隔藥灸臍與匹維溴銨對脾虛型腸易激綜合征患者尿液代謝組學(xué)影響的異同*

張曉寧，馬玉俠

山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014

目的：探討隔藥灸臍與匹維溴銨治療脾虛型腸易激綜合征的作用機(jī)理。方法：將脾虛型腸易激綜合征患者24例隨機(jī)分為臍療組、匹維溴銨組各12例。對治療前后2組患者尿樣進(jìn)行代謝組學(xué)處理，并比較2組之間的差異。結(jié)果：2組治療前后尿液代謝譜中兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)變化明顯，其中臍療組變化較為顯著的是氨基酸、組胺、5-羥色胺、膽汁酸、內(nèi)源性大麻素代謝物,這些代謝物涉及到體內(nèi)氨基酸代謝、神經(jīng)遞質(zhì)代謝及內(nèi)源性大麻素代謝等過程；匹維溴銨組除此之外主要涉及花生四烯酸的代謝。結(jié)論：臍療可顯著抑制腸易激綜合征患者的內(nèi)臟高敏性，改善腸道神經(jīng)、免疫、內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)失調(diào)狀況，改善脾虛型腸易激綜合征患者的生存質(zhì)量；治療前后2組患者尿樣代謝產(chǎn)物譜存在潛在的生物標(biāo)記物。

腸易激綜合征，脾虛型；代謝組學(xué)；隔藥灸臍法；神闕

腸易激綜合征(Ir ritable Bowel Syndrome，IBS)是指一種以腹痛或腹部不適伴排便習(xí)慣改變和（或）大便性狀異常的功能性腸病。IBS在世界范圍內(nèi)多發(fā)，亞洲國家IBS患病率約為5%～10%，歐美國家為10%～20%，我國城市患病率約為5%左右[1-2]。本病各年齡段均有發(fā)病，多數(shù)研究顯示女性發(fā)病率高于男性[3]。目前IBS是臨床上最常見的功能性胃腸道疾病之一，嚴(yán)重影響患者的工作、學(xué)習(xí)及生活質(zhì)量。

匹維溴銨是治療IBS的單一首選藥物，安全無副作用；臍療作為中醫(yī)特色外治療法之一，因其操作簡便，針對性強，安全快捷，療效肯定被廣泛應(yīng)用于臨床。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，臍療治療脾虛型IBS在改善胃腸道癥狀、提高生存質(zhì)量等方面優(yōu)于匹維溴銨[4-5]。在此基礎(chǔ)上，本研究擬觀察2種治療方法在尿液代謝組學(xué)機(jī)制上的差異，以期闡明臍療治療脾虛型IBS的作用機(jī)理，為臍療的臨床推廣提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將脾虛型腸易激綜合征患者24例隨機(jī)分為隔藥灸臍組和匹維溴銨組各12例，臍療組平均年齡26.09歲；平均病程31.01月。匹維溴銨組平均年齡24.96歲；平均病程30.67月。2組一般臨床資料相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入、排除標(biāo)準(zhǔn) 參照文獻(xiàn)[5]中的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 實驗儀器與試劑 儀器為Ag ilent6520型四極桿-飛行時間質(zhì)譜（Q-TOF）（包括Ag i lent超高效液相色譜儀，高壓二元梯度泵，DAD檢測器及 M a sshu nter Qu alitati v e A naly s i s So f tware B.02.00版化學(xué)工作站）；乙腈、甲酸均為色譜純試劑（購自美國T edia公司）；代謝組學(xué)檢測由山東省科學(xué)院測試中心完成。

1.4 治療方法

1.4.1 臍療組 隔藥灸臍組藥物主要由白術(shù)、五倍子、丁香、冰片等組成，混合超微粉碎，密封備用。1）溫開水調(diào)和面粉，并揉捏至圓柱狀（其高約2 c m，底面周長約12 c m，直徑約2 c m），在其底面垂直橫切面鑿一小孔（其孔大小與患者臍孔大小相同），在其上部周邊捏起高約1 c m的邊緣部分，此為隔藥灸臍法備用面圈，面圈在放置過程中覆蓋保鮮膜防止水分散失致其干燥；2）在相對安靜的醫(yī)療環(huán)境中，令患者仰臥位，充分暴露臍部，用75%酒精棉球在臍中央及臍周常規(guī)消毒；3）將面圈放置臍上，其中央小孔正對臍孔，在臍孔填滿備用藥末（約8～10 g），然后將艾炷（底面直徑與面圈中央小孔相同，約為1.5 c m，高約2.0 c m，可隨患者臍孔大小在一定范圍內(nèi)適度調(diào)整）置于藥末上；4）點燃艾柱，至艾柱燃盡，方可更換新艾柱，連續(xù)施灸1.5小時，約燃燒6-7壯艾柱，期間患者閉目養(yǎng)神為宜；5）待施灸結(jié)束后，藥末留置臍中24 h，用醫(yī)用膠布固封，忌洗浴，24 h后自行揭下用溫開水清洗臍部。治療時環(huán)境適宜，操作人員固定，并防止其他影響因素。經(jīng)期不治療，月經(jīng)結(jié)束后繼續(xù)治療。2次/周，療程4周，隨訪4周。

1.4.2 匹維溴銨組 口服匹維溴銨（蘇威制藥廠生產(chǎn)，批號：611143）50m g/次，3次/d，療程4周，隨訪4周。

1.5 尿樣樣本的采集和預(yù)處理 于設(shè)定時間點采集患者治療前后尿樣樣本。在治療開始前和結(jié)束后1周內(nèi)各采集樣本1次，女性患者應(yīng)避開經(jīng)期。取尿液10 m L，尿樣置于預(yù)先加入疊氮化鈉水溶液的試管中，-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 尿樣樣本處理 1）尿樣前處理方法：4℃下解凍，取1m L，離心15min（15 000 r/min），取上清液待測；2）液相條件：配有SB-C18反相柱(粒徑1.8μm，3.0mm×l00mm)，流速：0.4 m L/min，進(jìn)樣室溫度：4℃，柱溫：30℃。進(jìn)樣量：20μL；3）質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（E SI源），正離子模式進(jìn)兩針。質(zhì)量掃描范圍：50～1 000D a，毛細(xì)管電壓3 500V，四極桿溫度100℃，F(xiàn) ra g mentor175 V，霧化壓力35p s i g，干燥氣溫度350℃，干燥氣流量10 L/min。采集患者尿樣樣本分別在正離子模式下的離子流色譜圖，得圖譜積分。分析尿樣中內(nèi)源性小分子代謝物成分的變化模式，得到各自的代謝產(chǎn)物譜，比較其差異，建立特征性代謝產(chǎn)物譜。利用譜圖比較以及多元統(tǒng)計分析結(jié)果，得到對分組貢獻(xiàn)最大的一組譜峰，并進(jìn)行確認(rèn)、歸屬，確定譜峰所代表的化合物進(jìn)行分析，找出生物標(biāo)志物，建立與臍療效應(yīng)的作用聯(lián)系。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用多元統(tǒng)計分析軟件SI MC A-P 11.5，采用主成分分析法(PC A)、偏最小二乘判別分析(PL S-DA)等方法，對譜圖積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行分析；相關(guān)代謝通路信息主要來自H MD B、K E GG數(shù)據(jù)庫。

2 結(jié)果

2.1 臍療組治療前后尿樣散點分析圖 臍療組治療前后尿樣散點分析見圖1。

2.2 臍療組尿樣中對分類有重要貢獻(xiàn)的代謝物 以V I P＞0.5作為標(biāo)準(zhǔn)，尿液中共找到366種離子信息，鑒別了13種可能的物質(zhì)，見表1。

圖1 臍療組治療前后尿樣散點分析圖

表1 臍療組尿樣中對分類有重要貢獻(xiàn)代謝物的推斷結(jié)果

2.3 匹維溴銨組治療前后尿樣散點分析圖 匹維溴銨組治療前后尿樣散點分析見圖2。

2.4 匹維溴銨組尿樣中對分類有重要貢獻(xiàn)的代謝物 以V I P＞0.5作為標(biāo)準(zhǔn)，尿樣中共找到215種離子信息，鑒別了3種可能的物質(zhì)，見表2。

圖2 匹維溴銨治療前后尿樣散點分析圖M1(PLSDA)

表2 匹維溴銨組尿樣中對分類有重要貢獻(xiàn)代謝物的推斷結(jié)果

3 討論

IBS的發(fā)病機(jī)制尚未闡明。目前認(rèn)為IBS是以腸道動力異常、內(nèi)臟高敏性為生理病理基礎(chǔ)，多種病因共同作用的結(jié)果。得舒特是全球第一個胃腸道高選擇性鈣離子拮抗劑，是治療IBS的單一首選藥物。前期研究臍療治療IBS療效肯定，本研究從系統(tǒng)生物學(xué)角度研究兩種治療方法在代謝組學(xué)機(jī)制上的差異。尿液代謝研究結(jié)果顯示2組均可以影響兒茶酚胺等神經(jīng)遞質(zhì)的代謝過程，臍療還可調(diào)節(jié)體內(nèi)膽汁酸、內(nèi)源性大麻素、組胺及其他多種氨基酸代謝，匹維溴銨組尿液內(nèi)花生四烯酸的代謝有明顯變化。

作為兒茶酚胺的重要組成部分，去甲腎上腺素作用于不同受體來調(diào)節(jié)消化道功能，是目前公認(rèn)的腸壁內(nèi)最主要、最經(jīng)典的神經(jīng)遞質(zhì)。2組治療后均有兒茶酚胺相關(guān)代謝物中間物的減少，說明兩種治療方法均可減輕內(nèi)臟高敏感性。

匹維溴銨作為鈣離子拮抗劑，可以通過抑制鈣離子的內(nèi)流，促進(jìn)花生四烯酸的代謝，從而增加體內(nèi)代謝產(chǎn)物前列腺素等的含量，另外5-磷酸吡哆醛是參與合成多種神經(jīng)遞質(zhì)（如5-羥色胺、去甲腎上腺素）輔酶的活性形式。匹維溴銨可能通過調(diào)節(jié)體內(nèi)酶的活性和增加前列腺素等的產(chǎn)生，改善或加重胃腸道高敏感性，從而影響腸易激癥狀。

游離型膽汁酸能抑制小腸對水和電解質(zhì)的重吸收，膽汁酸更是一種天然瀉劑。治療后其代謝中間物的降低說明臍療可通過降低膽汁酸的分泌，改善IBS腹瀉癥狀。L-精氨酸是合成N O的前體，N O作為腸神經(jīng)系統(tǒng)一種主要的抑制性遞質(zhì)已得到廣泛認(rèn)可。臍療可能通過影響精氨酸代謝，間接增加N O的含量，緩解腸易激癥狀。組胺是組氨酸的代謝產(chǎn)物，可以影響許多細(xì)胞的反應(yīng)，在過敏與發(fā)炎的調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著重要作用。在小腸內(nèi)，組胺影響體液和電解質(zhì)轉(zhuǎn)運等多種功能，并可直接調(diào)節(jié)腸道的免疫效應(yīng)、內(nèi)分泌和收縮。治療后組胺減少，對IBS患者腸道影響減弱，從而改善IBS患者的各種臨床癥狀。A nandamide是一種內(nèi)源性大麻素，治療后該物質(zhì)的升高，能很好地說明臍療有緩解IBS患者腹痛、解痙、降低內(nèi)臟高敏感性以及調(diào)節(jié)胃腸道分泌等作用。5-羥色胺是一種廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道的神經(jīng)遞質(zhì)，是一種與胃腸道活動密切相關(guān)的腦腸肽，在抑制腹痛過程中扮演重要角色，胃腸道的高敏感性是腹痛的主要病理生理基礎(chǔ)。另有研究發(fā)現(xiàn)[6]，抑制性調(diào)控內(nèi)臟疼痛反應(yīng)的迷走傳入神經(jīng)效應(yīng)可能是由5-羥色胺受體介導(dǎo)的。

綜上所述，2組均可影響兒茶酚胺代謝，通過降低內(nèi)臟敏感性改善患者癥狀。與口服匹維溴銨相比，臍療可以通過多方面綜合調(diào)節(jié)改善腸道神經(jīng)、免疫、內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的失調(diào)狀況，提高脾虛型IBS患者的生存質(zhì)量。

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D ifferencesand Sim ilaritiesof Um bilicalM oxibustion on H erbsand Pinaverium Brom ide Tabletson Metabonom icsof the Patientsof Irritable Bowel Syndrom e of Sp leen Deficiency Pattern

ZHANG Xiaoning,MA Yuxia
School of Acupuncture,Moxibustion and Tuina of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014,China

Objective:To discuss themechanisms of umbilicalmoxibustion on herbs and pinaverium brom ide tablets in treating irritablebowelsyndrome(IBS)of spleen deficiency pattern.Methods:All24 patientswere randomized into umbilical therapy group and pinaverium brom ide tablets group,12 cases each group.Themetabonom ics of urine specimen of the patients in both groupswere detected before and after treating,and the differencesbetween both groups were compared.Results:The neurotransmitters such as catecholamines and others in metabolic spectrum changed notably in both groups before and after treating,compared w ith pinaverium bromide tablets group,the metabolites including amino acid,histam ine,5-hydroxytryptam ine,acid bile and endocannabinoids changed greatly in umbilical therapy group,and they were related to themetabolism of am ino acid,histam ine and endocannabinoids;besides that,pinaverium brom ide tablets could adjust themetabolism of arachidonic acidmainly.Conclusion:Umbilical therapy could significantly inhibitvisceralhypersensitivity of IBS patients,improve the disorders of enteric nerve,immunology,and endocrinology aswellas life quality of IBSpatients;there are potentialbiomarkers in urinarymetabolic spectrum in both groupsbefore and after treating.

irritable bowel syndrome of spleen deficiency pattern;metabonomics;umbilicalmoxibustion on herbs;ShenQue(RN8)

R256

A

1004-6852(2015)07-0001-04

2014-09-02

國家自然科學(xué)基金面上項目（編號 30973789）。

張曉寧（1987—），女，在讀博士研究生。研究方向：針灸經(jīng)典理論與臨床研究。