王小龍，李華麗

(平頂山市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 平頂山 467000)

RP-HPLC測(cè)定鼻康膠囊中歐前胡素的含量

王小龍，李華麗

(平頂山市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 平頂山 467000)

目的：建立鼻康膠囊中歐前胡素的含量測(cè)定方法。方法：采用反相高效液相色譜法測(cè)定含量。色譜柱為Ultimate XB C18柱，流動(dòng)相為甲醇-水(66∶34)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)300 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果：歐前胡素在3.64～36.40 mg/L范圍內(nèi)與峰面積成良好的線性，線性回歸方程Y=1 399.32X-1 611.46 (r=0.999 9)；平均加樣回收率為99.2%，RSD=0.82%(n=6)。結(jié)論：本法靈敏、準(zhǔn)確、專屬性高、重復(fù)性好，可作為鼻康膠囊中歐前胡素的含量測(cè)定方法。

鼻康膠囊/藥效學(xué)；歐前胡素； 含量測(cè)定；反相高效液相色譜法

鼻康膠囊是經(jīng)河南省食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的純中藥復(fù)方醫(yī)院制劑(批件號(hào)2004Z00940)，由白芷、防風(fēng)、辛夷、桔梗、蒼耳子、板藍(lán)根、蘆根、甘草等藥物組成，具有清熱解毒、疏風(fēng)通竅的功效，用于急慢性鼻炎、副鼻竇炎。鼻康膠囊的原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測(cè)定項(xiàng)。白芷為方中君藥，具有疏風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功效，歐前胡素是白芷中主要活性成分[1]。為更好地控制藥品質(zhì)量，我們參考文獻(xiàn)方法[2-3]采用反相高效液相法對(duì)鼻康膠囊中歐前胡素的含量進(jìn)行了測(cè)定。

1 藥品、試劑與儀器

鼻康膠囊，每粒0.3g, 自制，批號(hào)20130710, 20130713，20130716。歐前胡素對(duì)照品，購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100826-201211；水為樂百氏純凈水；甲醇為色譜純；其余試劑為分析純。 LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AVP檢測(cè)器，CS-Light色譜工作站，日本島津公司產(chǎn)品；AG285電子分析天平，梅特格托利多儀器 (上海有限公司)產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Ultimate XB C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(66∶34)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)300 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。理論踏板數(shù)按歐前胡素計(jì)算應(yīng)不低于4 000；歐前胡素與樣品中的其他成分峰的分離度大于2.0。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取歐前胡素對(duì)照品9.1 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液(含歐前胡素182 mg/L)；再精密量取貯備液3 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品溶液(含歐前胡素21.84 mg/L)。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)45 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備

除白芷以外，其余各藥按處方比例依工藝制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備缺白芷陰性對(duì)照品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL，依法進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間，可檢出相對(duì)應(yīng)的色譜峰，缺白芷陰性對(duì)照品溶液在與歐前胡素對(duì)照品相同的保留時(shí)間處無相應(yīng)的色譜峰檢出，方中除白芷外的其他藥物對(duì)測(cè)定無干擾，見圖1。

A.對(duì)照品；B.供試品；C.缺白芷陰性對(duì)照品圖1 歐前胡素含量測(cè)定的HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取上述對(duì)照品貯備液1，2，3，4，5 mL，分別置50，50，50，25，25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為3.64，7.28，10.92，29.12，36.40 mg/L的對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL,注入色譜儀，按2.1項(xiàng)下檢測(cè)條件檢測(cè)，記錄色譜圖峰面積。以吸收峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，歐前胡素進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程Y=1 399.32X-1 611.46,r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明：歐前胡素在3.64～36.40 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測(cè)定其峰面積。結(jié)果：歐前胡素峰面積的RSD值為0.31%(n=6)。結(jié)果表明：精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品供試品溶液，進(jìn)樣10μL，分別在0，3，6，9，12 h進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果：歐前胡素峰面積的RSD值為1.3%。結(jié)果表明：供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(20130710)，按2.2.2項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，測(cè)得歐前胡素的峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果：歐前胡素含量的RSD值為1.23%。結(jié)果表明：此法重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知?dú)W前胡素含量的樣品(批號(hào)20130713)約3 g,共取6份，分別加入歐前胡素對(duì)照品質(zhì)量濃度為21.84 mg/L的甲醇溶液5.0 mL，以下按供試品制備方法制備供試品溶液。并按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗(yàn)

2.9 樣品測(cè)定

取3個(gè)批次的樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定歐前胡素含量。3批樣品(批號(hào)20130710, 2013713，2013716)中歐前胡素的含量分別為0.056 7，0.055 9，0.056 1 mg/粒。

3 討 論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取歐前胡素對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描(200～400 nm)，對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行了考察，結(jié)果在220，260，300 nm處均有強(qiáng)吸收，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，供試品色譜中歐前胡素峰在300 nm附近無干擾峰，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為300 nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇

在實(shí)驗(yàn)過程中曾經(jīng)選用多個(gè)流動(dòng)相，如不同比例的甲醇-水，乙腈-水，甲醇-水-乙酸胺等，結(jié)果以本文所選流動(dòng)相甲醇-水(66∶34)的峰形及分離效果最好，可使樣品中歐前胡素與相鄰的色譜峰分離，分離度大于2.0。

3.3 提取溶劑及時(shí)間的選擇

在實(shí)驗(yàn)中曾采用甲醇、乙醇和三氯甲烷超聲(功率300 W，頻率50 kHz)15，30，45，60 min提?。?00 mL/L乙醇加熱回流30,60,90 min提取，制備供試品溶液，分別測(cè)定其含量。結(jié)果表明:經(jīng)甲醇提取的樣品含量高于300 mL/L 乙醇，故選擇甲醇為提取溶劑。有關(guān)時(shí)間選擇：實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)超聲45 min時(shí)，歐前胡素的含量基本不再增加，說明歐前胡素此時(shí)已經(jīng)基本提取完全，因此將樣品提取時(shí)間確定為45 min。

本實(shí)驗(yàn)采用RP-HPLC法測(cè)定鼻康膠囊中歐前胡素的含量，具有靈敏度高、專屬性高、重復(fù)性好、分離度好的優(yōu)點(diǎn)，可作為鼻康膠囊含量的質(zhì)量評(píng)價(jià)依據(jù)。

[1]陰建，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用：一卷[M].北京：學(xué)苑出版社，1995:257.

[2]中國藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典:一部[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2010: 97，1127.

[3]顧武軍，陳宗良，吳海霞.HPLC法測(cè)定腫痛安膠囊中歐前胡素的含量[J].中國藥師，2012，15(10)：1511-1513.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)08-0064-03 ·藥學(xué)研究·

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10.3969/j.issn.1001-6910.2015.08.31

2015-04-14；

2015-05-15