萬明香　張麗艷　何順志

【摘要】目的：研究黔產(chǎn)八角蓮屬藥材不同種質(zhì)資源間總黃酮含量的差異。方法：用紫外分光光度法測定四份八角蓮屬藥材種質(zhì)資源根、莖和葉的總黃酮含量。結(jié)果：黔產(chǎn)八角蓮屬藥材種質(zhì)資源間總黃酮含量的差異較大。川八角蓮的總黃酮含量最高，為264%；貴州八角蓮次之；八角蓮樣品的最低，僅有103%；八角蓮屬藥材不同部位中總黃酮含量高低的分布規(guī)律為根>葉>莖。結(jié)論：川八角蓮根樣品的總黃酮含量最高，可作為人工栽培時(shí)的原種利用，研究結(jié)果為川八角蓮的種質(zhì)資源篩選和人工栽培提供了試驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】貴州；八角蓮屬；種質(zhì)資源；總黃酮含量

【中圖分類號】R284【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2015）03-0016-02

Abstract：Objective To study the differences of total flavone content in Guizhou Dysosma among different germplasm resources.Method The total flavone is extracted from Guizhou Dysosma by UV.With rutin as standard substance，the content of total flavone in root，stem and leaf of four Dysosma germplasm resources harvested in Guizhou was determined by UN.In addition，with naringin as standard substance.Result There was significant difference about the content of total flavone in Guizhou Dysosma among different germplasm resources. Morespecifically，the content of total flavone in Dysosma samples was the highest at 264%，followed by Dysosma samples at 103%，and the least in Dysosma versipellis samples.Moreover，the content of total flavone in different parts of Dysosma followed atrend of root>leaf>stem.Conclusion Dysosma harvested from Dysosma County could be used as the original species for artificial cultivation because of the highest content of total flavone。

Keywords：Guizhou；Dysosma；Germplasm resources；Total flavone content

黔產(chǎn)八角蓮屬藥材主要為八角蓮[Dysosma versipellis （Hance） MCheng ex Ying]、貴州八角蓮[Dmajorensis （Gagnep）Ying]、川八角蓮[Dveitchii （Hemslet Wils） Fu ex Ying]和小八角蓮[Ddifformis （Hemslet Wils） THWang ex Ying]。具化痰散結(jié)、祛瘀止痛、清熱解毒的功效，主要用于咳嗽、咽喉腫痛、瘰疬、疔瘡、毒蛇咬傷、跌打損傷等證[1-5]。特別用于治療食道癌、子宮癌?；瘜W(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)其根和根莖中含有抗癌成份鬼臼毒素、脫氧鬼臼毒素、金絲桃苷、槲皮素等，具有極其廣闊的開發(fā)前景。

近年來，由于八角蓮屬藥材顯著的藥用價(jià)值而遭到人為嚴(yán)重破壞，導(dǎo)致該屬植物數(shù)量日趨減少。其中，八角蓮Dysosma versipellis為瀕危植物，在第一批國家珍稀瀕危保護(hù)植物名錄中被列為三級保護(hù)植物。八角蓮屬藥材通常以根入藥，而大量的莖葉沒有得到充分利用，因此有必要對八角蓮屬藥材地上部分與地下部分總黃酮含量進(jìn)行對比研究，以期為充分利用八角蓮屬藥材自然資源提供科學(xué)依據(jù)

1材料與方法

11材料

111研究材料主要對貴州龍里、荔波、貞豐和赫章等縣市的八角蓮屬藥材資源進(jìn)行了野外考察和樣品收集，收集的八角蓮屬藥材樣品由貴陽中醫(yī)學(xué)院生藥教研室何順志教授鑒定，分別為貴州八角蓮Dysosma majorensis （Gagnep）Ying、八角蓮Dversipellis （Hance） MCheng ex Ying、小八角蓮Ddifformis （Hemslet Wils） THWang ex Ying和川八角蓮Dveitchii （Hemslet Wils） Fu ex Ying。

112儀器島津UV-2501PC分光光度計(jì)；FA2004分析天平；植物粉碎機(jī)，均購自上海精科公司。

113試劑蘆?。ㄅ?080-9705，中國藥品生物制品檢定所），其余試劑均為分析純。

12八角蓮屬藥材總黃酮含量的測定

121最大吸收波長的選擇[6]將標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液以60%乙醇、01mol/L三氯化鋁溶液、01mol/L醋酸鉀溶液為顯色劑，以試劑為空白對照，在250nm～500nm進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液在417nm處均有最大吸收，故選定417nm為測定波長。

122對照品溶液的制備精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品357mg，置于25ml容量瓶中，加60%的乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得對照品溶液（1428μg/ml）。

123線性關(guān)系精密吸取000、100、200、300、400、500ml蘆丁對照品溶液分別置于25ml容量瓶中，加60%乙醇至50ml，再分別加入30ml的01mol/L三氯化鋁溶液，50ml的01mol/L醋酸鉀溶液，加60%乙醇至刻度，搖勻，放置40min。以第1份作空白，在417nm測定吸光度。并以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：y=31863x+00104； r=09999。結(jié)果表明，蘆丁在014mg～071mg范圍內(nèi)含量與吸光度有良好的線形關(guān)系。

124精密度試驗(yàn)取對照品溶液3ml，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下測定方法，重復(fù)測定5次，結(jié)果得以蘆丁計(jì)的總黃酮的RSD為010%。

125重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取貴州八角蓮樣品05g，共5份，按樣品測定方法進(jìn)行測定，結(jié)果得以蘆丁計(jì)的總黃酮平均含量RSD為284%

126穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取同一批樣品05g，按樣品測定方法進(jìn)行測定，顯色40min后，每隔20min測定1次，持續(xù)80min，總黃酮平均含量的RSD為266%，表明顯色40min后，80min內(nèi)測定基本穩(wěn)定。

127加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的貴州八角蓮樣品025g，平行6份，含量為243%，分別精密加入蘆丁對照品溶液，按樣品測定項(xiàng)下方法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2結(jié)果與分析

21貴州八角蓮屬藥材資源現(xiàn)狀根據(jù)貴州的地理環(huán)境和氣候特點(diǎn)確定黔東南、黔西、黔北、黔南4條調(diào)查路線并選擇施秉、荔波、遵義、龍里、貞豐和赫章等具有代表性的地區(qū)進(jìn)行調(diào)查，實(shí)地調(diào)查結(jié)果表明，八角蓮屬植物中八角蓮主要分布于黔東南的施秉九龍山、云臺山，遵義的金鼎山、婁山關(guān)，黔南的荔波、三都、獨(dú)山、平塘等地；貴州八角蓮主要分布于龍里、遵義、道真、桐梓等地；小八角蓮主要分布于黔西南的安龍仙鶴坪自然保護(hù)區(qū)、貞豐龍頭大山等地；川八角蓮分布于納雍唇仁、赫章韭菜坪等地。在貴州八角蓮屬植物中四種藥用植物資源蘊(yùn)藏量大小為：八角蓮>貴州八角蓮>小八角蓮>川八角蓮。但過度采挖、全民藥用資源保護(hù)意識和法制觀念薄弱、毀林開荒、過度放牧以及城市建設(shè)破壞了生態(tài)環(huán)境和資源分布，導(dǎo)致八角蓮屬植物的蘊(yùn)藏量很少，需要重點(diǎn)保護(hù)。

22不同產(chǎn)地及不同部位八角蓮屬藥材總黃酮含量的種質(zhì)資源差異

221不同來源八角蓮屬藥材總黃酮含量由表2可知，川八角蓮總黃酮含量最高，為264%，貴州八角蓮其次，八角蓮總黃酮含量最低；總黃酮含量從高到低分別為：赫章川八角蓮>龍里貴州八角蓮>貞豐小八角蓮>荔波八角蓮。

222貴州產(chǎn)八角蓮屬藥材不同部位的總黃酮含量差異同樣由表2可知，總黃酮含量為：根>葉>莖。

3討論

對采自貴州各縣市八角蓮屬藥材種質(zhì)資源總黃酮含量的測定結(jié)果表明，八角蓮屬藥材種質(zhì)資源間總黃酮含量差異較大，以赫章川八角蓮的種質(zhì)資源最好，荔波八角蓮的種質(zhì)資源最差，因此在該區(qū)進(jìn)行人工栽培時(shí)可直接利用赫章川八角蓮為種質(zhì)來源。

對八角蓮屬藥材不同部位總黃酮的測定結(jié)果表明，八角蓮屬藥材總黃酮有效成分含量在根中含量最高，葉次之，莖最低。通常八角蓮屬藥材是以根入藥，由于八角蓮屬植物地下部分，生長緩慢，根莖呈結(jié)節(jié)狀，一年長一節(jié)，數(shù)年才能入藥用，而地上部分每年均可采收。因此從總黃酮成分和資源的保護(hù)、合理利用及可持續(xù)發(fā)展的角度出發(fā)，利用地上部分為好，可使八角蓮屬藥材資源實(shí)現(xiàn)可持續(xù)利用和發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1]中華本草編委會.中華本草[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1908：304.

[2]雷震，楊光義，葉方，等.UPLC法測定八角蓮藥材中鬼臼毒素的含量[J].中國藥師，2013，16（4）：548-519.

[3]蔣向輝，余朝文.侗藥八角蓮藥用民族植物學(xué)研究[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2011，17（10）：44-46.

[4]張杰，周春山，劉韶，等.小八角蓮中鬼臼毒素的提取工藝研究[J].中藥材，2007，30（1）：103-104.

[5]游春，楊耀文.川八角蓮的生藥學(xué)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2005，26（3）：45-46.

[6]張麗艷，楊玉琴，高言明，等.貴州不同產(chǎn)地、不同物候期頭花蓼中總黃酮的動(dòng)態(tài)變化研究[J].中國中藥雜志，2003，28（9）：889-890.

（收稿日期：20141103）