徐 濤，羅婷婷，朱 珠，黃建梅

（中國(guó)人民解放軍第82醫(yī)院，江蘇淮安223001）

宮頸癌是婦科比較常見的惡性腫瘤，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤首位。宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是與子宮頸浸潤(rùn)癌密切相關(guān)的一組子宮頸病變，約60%CIN I可自然消退，20%CIN II會(huì)發(fā)展為CIN III，5%發(fā)展為浸潤(rùn)癌。CIN反映宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的連續(xù)過(guò)程，篩查發(fā)現(xiàn)CIN，并及時(shí)治療高級(jí)別病變，是預(yù)防宮頸癌行之有效的措施[1]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究表明，CIN的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后與多種基因的變化密切相關(guān)[2]。P63參與腫瘤細(xì)胞的凋亡，共同參與CIN和癌變[3]。Ki67是細(xì)胞增生的相關(guān)蛋白，通常作為腫瘤細(xì)胞增殖的標(biāo)志。本研究采用免疫組織化學(xué)方法，檢查P63和Ki67在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達(dá)，旨在探討二者表達(dá)變化與CIN分級(jí)和宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2013年1月—2015年6月因考慮宮頸疾病行石蠟包埋宮頸組織51例，其中CIN I 7例、CIN II 9例、CIN III 18例（其中宮頸原位癌8例），宮頸癌17例（其中鏡下微小浸潤(rùn)癌5例），均經(jīng)病理組織學(xué)確診?；颊吣挲g27～65歲，平均46歲，所有標(biāo)本為宮頸活檢或LEEP宮頸錐形切除標(biāo)本或手術(shù)切除標(biāo)本（其中正常宮頸組織為子宮良性病變行子宮切除術(shù)的宮頸組織），患者術(shù)前均未行化療或放療。取正常宮頸組織10例作為對(duì)照。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)方法：所有標(biāo)本均采用5%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片。免疫組織化學(xué)采用PV-9000二步法，切片厚4μm，行微波處理，一抗4℃過(guò)夜，DAB顯色，以PBS緩沖液代替第一抗體作陰性對(duì)照，已知的陽(yáng)性組織作為陽(yáng)性對(duì)照。試劑Ki67和P63（均北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.2.2 染色結(jié)果觀察：Ki67陽(yáng)性表達(dá)定位于上皮的基底層為陰性（-），超過(guò)基底層10%～25%為（+），26%～70%為（++），＞70%為（+++）。P63陽(yáng)性表達(dá)局限于基底層和副基底層為陰性（-），超過(guò)副基底層10%～25%為（+），26%～70%為（++），＞70%為（+++）。蛋白表達(dá)程度：弱陽(yáng)性為（+），中等強(qiáng)度為（++），強(qiáng)陽(yáng)性為（+++）[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)數(shù)資料組間差異性比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 P63、Ki67在CIN及宮頸浸潤(rùn)癌表達(dá) P63在不同宮頸組織中的表達(dá)程度比較見表1，Ki67在不同宮頸組織中的表達(dá)程度比較見表2。P63和Ki67在正常宮頸組織中只有1例Ki67低表達(dá)（+），余均不表達(dá)。與正常宮頸組織比較，P63在CIN各組和宮頸癌組中陽(yáng)性率逐漸升高，尤其是其表達(dá)強(qiáng)度，隨著分級(jí)的增加，表達(dá)的程度呈上升趨勢(shì)（P＜0.05）。與CIN II比較，在CIN III和宮頸浸潤(rùn)癌組織中，隨著病情的進(jìn)展，P63陽(yáng)性率表達(dá)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，P63在CIN II組+++陽(yáng)性表達(dá)22.2%，而在宮頸浸潤(rùn)癌中陽(yáng)性表達(dá)41.2%（P＜0.05）。與正常宮頸組織比較，Ki67在CIN各組和宮頸癌組中其表達(dá)的陽(yáng)性率和表達(dá)程度隨分級(jí)的上升而上升。Ki67在CIN II組+++陽(yáng)性表達(dá)22.2%，而在宮頸浸潤(rùn)癌中陽(yáng)性表達(dá)47.1%（P＜0.05）。本研究顯示P63、Ki67在CIN、宮頸癌中均有表達(dá)，宮頸浸潤(rùn)癌中表達(dá)程度最強(qiáng)。

2.2 P63、Ki67在CIN及宮頸浸潤(rùn)癌表達(dá)的相關(guān)性分析 P63、Ki67在CIN I、II、III及宮頸浸潤(rùn)癌陽(yáng)性表達(dá)率均呈逐漸增加趨勢(shì)。P63在CIN I、II、III及宮頸浸潤(rùn)癌陽(yáng)性表達(dá)率分別為42.9%、77.8%、94.4%、100.0%，Ki67的表達(dá)率分別為 57.1%、77.8%、100.0%、100.0%。而P63在CIN各級(jí)及宮頸浸潤(rùn)癌中表達(dá)++以上比例分別為14.3%、44.4%、61.1%、76.5%，Ki67分別為28.6%、33.3%、66.7%、88.2%。兩者之間呈顯著相關(guān)性，R接近于1，P＜0.001。

表1 P63在不同組織中的表達(dá)程度 例（%）

表2 Ki67在不同組織中的表達(dá)程度 例（%）

3 討 論

3.1 P63與宮頸癌 P63是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的p53基因家族新成員，定位于染色體3q27-3q29，編碼6種以上主要異構(gòu)體，分別伴有轉(zhuǎn)錄激酶活性，死亡誘導(dǎo)活性（TAP63）和顯色失活活性，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和細(xì)胞凋亡的過(guò)程。P63是一種核蛋白，具有調(diào)節(jié)皮膚、宮頸、乳腺及泌尿生殖道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育的功能[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，P63在正常宮頸組織中陰性表達(dá)，在CIN及宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)，在CIN中陽(yáng)性表達(dá)程度隨CIN病理分級(jí)的增高而增加，在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，三者間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示P63在CIN和宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到了促進(jìn)作用。

3.2 Ki67與宮頸癌 Ki67抗原是存在于增殖細(xì)胞核的標(biāo)志蛋白，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，參與細(xì)胞周期的調(diào)控，被認(rèn)為是較為理想的檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的抗體[6]。Ki67表達(dá)在多種腫瘤中均有明顯改變，對(duì)惡性腫瘤診斷和預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后具有重要意義。Ki67的高表達(dá)表示細(xì)胞增殖明顯活躍，惡性程度高，預(yù)后差；反之預(yù)后佳。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Ki67只在1例正常組織中低表達(dá)（+），余均不表達(dá)，而在宮頸CIN組織中，陽(yáng)性表達(dá)率隨CIN級(jí)別的升高而升高，在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)。提示宮頸上皮細(xì)胞癌變過(guò)程中細(xì)胞增殖活躍是一個(gè)逐漸增強(qiáng)的過(guò)程，反映CIN發(fā)展為宮頸癌是一個(gè)較為漫長(zhǎng)的過(guò)程，即由CIN（I→II→III）→早期宮頸浸潤(rùn)癌的連續(xù)發(fā)展過(guò)程。

3.3 P63、Ki67表達(dá)的相關(guān)性 本研究顯示，P63在CIN I、II、III及宮頸浸潤(rùn)癌陽(yáng)性表達(dá)率分別為42.9%、77.8%、94.4%、100.0%，Ki67的表達(dá)率分別為57.1%、77.8%、100.0%、100.0%，說(shuō)明隨著病情的發(fā)展，陽(yáng)性表達(dá)率均呈逐漸增加趨勢(shì)。P63在CIN各級(jí)及宮頸浸潤(rùn)癌中表達(dá)“++”以上比例分別為14.3%、44.4%、61.1%、76.5%，Ki67為 28.6%、33.3%、66.7%、88.2%。兩者之間呈顯著相關(guān)性，r接近于1，P＜0.001。P63參與腫瘤細(xì)胞的凋亡，Ki67是細(xì)胞增生的相關(guān)蛋白，通常被作為腫瘤細(xì)胞增殖的標(biāo)志。本研究提示P63、Ki67在抑制細(xì)胞凋亡的同時(shí)引起了細(xì)胞的增殖，從而通過(guò)雙重作用來(lái)促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。

綜上所述，P63、Ki67異常表達(dá)與CIN和宮頸癌顯著相關(guān)，P63、Ki67聯(lián)合檢測(cè)可作為早期診斷宮頸癌前病變和宮頸癌的標(biāo)志物。

[1]謝辛，茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：301-303.

[2]袁冬蘭，錢華，宮頸疾病患者外周血CD4+CD25+CD127+/low Treg細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義［J］.海南醫(yī)學(xué)，2012，23（4）：11-13.

[3]劉芬芳，左云海，龍浪，等.p63與p16在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)與意義［J］.海南醫(yī)學(xué)，2013，24（14）：2042-2043.

[4]齊朝陽(yáng)，陳艷，曾鴻，等.宮頸上皮內(nèi)腫瘤 P16、P53、Ki67、P63的表達(dá)與HPV感染及其臨床意義［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（20）：3638-3640.

[5]王會(huì)娟，劉欣，王麗.Survivin、Ki67和P63在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義［J］.青島醫(yī)藥衛(wèi)生，2013，45（1）：11-14.

[6]文艷紅，張永建，徐洪.消化道類癌43例Ki-67表達(dá)與腫瘤分期相關(guān)性研究［J］.交通醫(yī)學(xué)，2013，27（2）：131-133.