葉章發(fā) 王龍 桂遠望

苦味酸速率法肌酐測定的線性范圍及其臨床應(yīng)用評價

葉章發(fā) 王龍 桂遠望

目的 觀察分析苦味酸速率法肌酐測定的線性范圍。方法 使用低、高值定值血清, 配制不同肌酐濃度的標本, 進行測定。結(jié)果 肌酐濃度在66.0～512.0 μmol/L范圍內(nèi)檢測, 線性方程：Y=0.8571X+22.953,相關(guān)系數(shù)r=0.9973。結(jié)論 苦味酸速率法肌酐測定線性范圍較小, 臨床應(yīng)用需采取措施加以校正。

苦味酸速率法；肌酐測定；線性范圍

苦味酸速率法肌酐測定在臨床實驗室具有一定范圍的應(yīng)用, 觀察分析其測定的線性范圍及相關(guān)問題, 以期與使用者共同探討。

1 資料與方法

1.1 實驗標本 英國產(chǎn)RANDOX(Human-Sera分析用人血清基質(zhì))定值凍干質(zhì)量控制血清。

1.2 儀器 OLYMPUS(奧林帕斯)AU-2700全自動生化分析儀。

1.3 試劑 國內(nèi)某品牌苦味酸速率法肌酐測定試劑盒, R1試劑：0.32 mol/L氫氧化鈉, R2試劑：53.0 mmol/L苦味酸,肌酐標準品濃度：132.6 μmol/L。

1.4 方法 取RANDOX(Human-Sera分析用人血清基質(zhì))定值凍干質(zhì)量控制血清, 同一批號的低值血清(肌酐定值濃度：66.0 μmol/L)3瓶, 同一批號的高值血清(肌酐定值濃度：512.0 μmol/L)3瓶 ；嚴格依照產(chǎn)品說明書使用去離子純凈水5.00 ml, 溶解各瓶凍干血清；待其充分溶解后, 混勻, 備用。分別將備用的每瓶低、高值血清依照不同比例, 進行配制,形成6個系列18份實驗標本。按照由低值向高值的順序,上機進行肌酐實驗檢測, 具體見表1。其中, 肌酐理論(定)值在400.0 μmol/L以上的標本, 使用生理鹽水稀釋后, 再次上機進行測定。上機主要技術(shù)參數(shù)：標本30 μl, R1試劑150 μl R2試劑150 μl, 主波長520 nm, 次波長700 nm, 反應(yīng)時間13～15。

1.5 統(tǒng)計要求 a值在(1±0.10)范圍內(nèi), 相關(guān)系數(shù)r≥0.975,截距b小于檢測上限濃度的5%。

2 結(jié)果

肌酐濃度理論值在66.0～512.0 μmol/L范圍內(nèi)檢測, 其線性方程：Y=0.8571X+22.953,回歸系數(shù)a=0.8571,截距b=22.953,相關(guān)系數(shù)r=0.9973。

表1 苦味酸速率法肌酐測定結(jié)果

3 討論

肌酐測定方法有傳統(tǒng)的化學法和近年來發(fā)展起來的酶學檢測方法。化學法是利用肌酐與苦味酸在堿性條件下發(fā)生反應(yīng), 生成橘紅色化合物, 進行肌酐濃度測定。其不足之處在于該反應(yīng)并非僅對肌酐特異, 還有許多化合物如蛋白質(zhì)、葡萄糖、抗壞血酸、丙酮、乙酰乙酸、丙酮酸, 胍和頭孢菌類抗生素等［1］, 均可與苦味酸反應(yīng)生成色原, 干擾檢測結(jié)果?？辔端崴俾史▌t是根據(jù)肌酐與非肌酐物質(zhì)在堿性條件下, 與苦味酸試劑反應(yīng)的動力學特性, 利用所謂“窗口期”期, 控制樣品在25～60 s之間與堿性苦味酸試劑發(fā)生反應(yīng), 以減少或避免快速反應(yīng)假肌酐物質(zhì)(在樣品與堿性苦味酸混合后迅速出現(xiàn)反應(yīng), 并在20 s內(nèi)完成, 生成非肌酐有色化合物)、慢速反應(yīng)假肌酐物質(zhì)(樣品和堿性苦味酸混合后80～100 s才開始反應(yīng))的干擾, 這樣可以有效提高測定的特異性。有文獻報道由于方法學之間存在變異, 肌酐測定的結(jié)果并不完全一致, 苦味酸法測定結(jié)果與真值有偏差, 當肌酐＜100 μmol/ L, 結(jié)果假陽性偏高5%～10%；當肌酐＞200 μmol/L時, 偏低10%～15%［2］。這與作者使用英國產(chǎn)RANDOX(Human-Sera分析用人血清基質(zhì))定值凍干質(zhì)量控制血清進行肌酐測定, 觀察分析其線性范圍時的測定數(shù)據(jù)基本吻合。而且, 隨著檢測標本肌酐濃度的不斷增高, 其測定數(shù)據(jù)比實際濃度值降低程度愈增大。從實驗數(shù)據(jù)分析, 肌酐理論值在66.0～512.0 μmol/L濃度區(qū)間進行檢測時, 其線性方程：Y=0.8571X+22.953,回歸系數(shù)a=0.8571,相關(guān)系數(shù)r=0.9973, 截距b=22.953；其中a＜0.90, 其統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)不符合線性范圍的一般要求。如果降低檢測濃度,使其在肌酐理論值為66.0～423.0 μmol/L內(nèi)檢測, 其線性方程：Y=0.9103X+13.120, a=0.9103, r=0.9998, b=13.120, 統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)指標符合線性范圍的一般要求。因此可以得出, 該法檢測線性范圍相對較小, 為了滿足臨床一般要求、提高檢測數(shù)據(jù)的可靠性,建議肌酐測定時, 當其實際檢測值＞400.0 μmol/L時, 應(yīng)使用生理鹽水將標本稀釋后再進行測定。一般將其稀釋后實際測定值為130.0 μmol/L左右, 再根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出肌酐結(jié)果報告值。作者將肌酐理論值在400.0 μmol/L以上的實驗標本,使用生理鹽水稀釋后, 進行測定, 其換算報告值與理論值基本無異。

苦味酸速率法測定在方法學上存在不足之處, 而且其測定試劑的酸堿性對儀器管道有腐蝕作用, 影響生化儀器的壽命, 易產(chǎn)生交叉污染［3］。但由于其試劑成本低廉、易于保存、檢測數(shù)據(jù)重復(fù)性好、高值樣本稀釋后檢測結(jié)果能夠滿足臨床需求、可以在半自動生化分析儀及全自動生化分析儀上使用等特點, 依然在臨床實驗室有一定范圍的使用。肌酐的酶法分析是解決肌酐測定中非特異性干擾的根本途徑, 臨床實驗室一般使用肌酐酶偶聯(lián)肌氨酸氧化酶法進行測定。此法干擾和影響較少, 速度快, 適用于自動分析, 近年已被普遍采用［4］。另外, 從方法學上講, 酶法測定的線性范圍遠遠大于化學法。而酶法試劑成本較高, 對其在臨床實驗室廣泛應(yīng)用有一定影響。至于苦味酸與肌酐測定的相關(guān)性問題, 有文獻報道, 肌酐濃度處于一個較低或中等的水平下, 由于受到干擾物質(zhì)的影響, 苦味酸法測定偏高, 在肌酐濃度較高時, 由于受到線性范圍的影響, 苦味酸法測定結(jié)果偏低, 精密度方面兩種方法學的測定情況都較好［5］。當血清肌酐水平越高或越低時, 兩法測定結(jié)果的差異越大［6］。這與作者在臨床實際工作中發(fā)現(xiàn)的情況基本吻合。作者將尿毒癥患者的血清標本,依照上述要求稀釋后, 使用苦味酸速率法進行測定, 經(jīng)換算后的結(jié)果與酶法直接測定結(jié)果基本一致。患者血清標本稀釋后, 一方面相關(guān)干擾物濃度相對降低, 對實驗影響基本可以忽略, 另一方面, 樣本稀釋后, 肌酐濃度降低, 使其能夠與苦味酸試劑充分反應(yīng)。

2010年7月, 衛(wèi)生部(現(xiàn)衛(wèi)計委)下發(fā)通知, 要求各省區(qū)市醫(yī)療機構(gòu)之間, 要于2010年底實現(xiàn)醫(yī)學影像資料互認和常規(guī)臨床檢驗項目結(jié)果互認。在實際工作中, 同一檢驗項目的檢測結(jié)果, 可能因為使用檢測方法的不同, 檢測數(shù)據(jù)出現(xiàn)較大差異。雖然按照臨床實驗室管理辦法相關(guān)要求, 實驗室實行嚴格的質(zhì)量管理, 而且每項檢測結(jié)果后面都注明參考值具體范圍。但不同方法檢測出來的不同數(shù)據(jù)很有可能影響臨床醫(yī)生對于檢驗結(jié)果的精準把握。檢驗項目方法學上的統(tǒng)一, 是值得探討的實際問題。作者建議, 二級以上醫(yī)院或者使用大型全自動生化分析儀的臨床實驗室, 應(yīng)該使用肌酐酶法檢測試劑。基層醫(yī)院的臨床實驗室在使用苦味酸法進行肌酐檢測時, 應(yīng)對其不足之處有充分了解, 必要時采取相應(yīng)的措施加以校正, 以保障實驗檢測數(shù)據(jù)的可靠性。

［1］ 葉應(yīng)嫵, 王毓三, 申子瑜．全國臨床檢驗操作規(guī)程．第3版．北京:人民衛(wèi)生出版社, 2006:465-466．

［2］ 徐國賓, 李志艷.應(yīng)重視實驗室檢查在慢性腎病早期診斷中的應(yīng)用.中華檢驗醫(yī)學雜志, 2006, 11(29):961-965.

［3］ 周碧燕, 李友邕, 覃政等．血清肌酐常規(guī)測定方法和臨床應(yīng)用的研究進展.化學試劑, 2011, 33(8):718-722．

［4］ 全國衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)資格考試委員會.臨床醫(yī)學檢驗與技術(shù)(中級).北京：人民衛(wèi)生出版社, 2012:402-403．

［5］ 吳進軍.兩種肌酐測定方法性能的比較．醫(yī)藥前沿, 2014(17): 147-148．

［6］ 李麗紅, 張國軍.酶法與苦味酸法測定肌酐差異的Meta分析.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版), 2013, 7(7):142-145．

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.213

2014-12-19］

464000 信陽職業(yè)技術(shù)學院附屬醫(yī)院