劉起勝 徐筱紅 劉懷 彭微 曾治中

·論著·

乳腺癌中醫(yī)辨證分型與BCRP表達(dá)的相關(guān)性分析

劉起勝 徐筱紅 劉懷 彭微 曾治中

目的 探討乳腺癌患者的中醫(yī)辨證分型與乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)表達(dá)的相關(guān)性。方法 對(duì)80例乳腺癌患者進(jìn)行術(shù)前中醫(yī)辨證分型, 其中血瘀證23例、肝郁證30例、脾虛證17例、腎陰虛證10例, 對(duì)術(shù)后標(biāo)本進(jìn)行BCRP檢測(cè), 并進(jìn)行分析。結(jié)果 乳腺癌患者術(shù)前辨證為血瘀證者BCRP表達(dá)的陽性率高于其他證型, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 乳腺癌術(shù)前中醫(yī)辨證與腫瘤BCRP表達(dá)有相關(guān)性, 血瘀證者BCRP表達(dá)的陽性率最高, 預(yù)后差。

乳腺癌；中醫(yī)；乳腺癌耐藥蛋白

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤, 且其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì), 現(xiàn)在乳腺癌發(fā)病率已躍居我國(guó)女性癌癥發(fā)病首位［1］。嚴(yán)重危害女性的健康。而中醫(yī)的辨證論治在其綜合治療中起著重要作用。BCRP是與腫瘤多藥耐藥有關(guān)的新的藥物排除泵, 本研究通過研究乳腺癌術(shù)前中醫(yī)辨證與BCRP的關(guān)系,指導(dǎo)乳腺癌的臨床治療?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集篩選湖南省直中醫(yī)醫(yī)院收治的原發(fā)性乳腺癌患者80例為本課題研究對(duì)象, 均為女性, 年齡21～85歲, 平均年齡(47.35±10.79)歲。詳細(xì)采集患者一般情況及癥狀、體征等信息。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 臨床表現(xiàn)：乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變“橘皮樣外觀”、乳頭乳暈異常、腋窩淋巴結(jié)腫大、乳腺觸診有腫塊、X線檢查可見放射狀毛刺的腫塊陰影、B超檢查見癌腫特性、細(xì)胞涂片檢查可見癌細(xì)胞、穿刺或活組織病理檢查發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 病理診斷為原發(fā)性乳腺癌患者；年齡在20～85之間的女性；以前未經(jīng)化療、放療、中藥治療等乳腺癌相關(guān)治療；無智力及精神障礙。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 妊娠或哺乳期婦女；精神病患者；合并其他惡性腫瘤者(非乳腺癌轉(zhuǎn)移)。

1.5 方法

1.5.1 中醫(yī)辨證 中醫(yī)辨證主要根據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》的診斷標(biāo)準(zhǔn), 通過《信息采集表》收集80例乳腺癌患者臨床信息, 綜合乳腺癌患者術(shù)前的臨床表現(xiàn), 對(duì)其進(jìn)行中醫(yī)辨證分型。見表1。

表1 乳腺癌患者辨證分型情況

1.5.2 免疫組織化學(xué)方法 取80例乳腺癌患者術(shù)后標(biāo)本,把標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋, 制成有硬度的組織塊, 組織塊用切片機(jī)3 μm厚連續(xù)切片, 免疫組化采用SP三步法：①脫蠟, 將切片放二甲苯中浸泡, 二甲苯Ⅰ浸泡10 min、二甲苯Ⅱ浸泡10 min。②梯度酒精脫水。③滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3% H2O2孵育10 min, PBS沖洗3次×3 min。④抗原修復(fù)：將0.01 M枸櫞酸鈉緩沖溶液注入塑料盒內(nèi), 放入玻片, 壓力鍋中加熱, 冷卻至室溫后PBS沖洗3次×3 min。⑤DAB顯色,蘇木素復(fù)染。水洗, 返藍(lán)并封固。已知的陽性片作陽性對(duì)照,顯微鏡下觀察。

1.6 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 顯微鏡下觀察, 由病理醫(yī)師判讀BCRP蛋白的表達(dá)結(jié)果, 染色信號(hào)呈細(xì)顆粒狀, 棕黃色, 定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中, 每例切片至少觀察10個(gè)高倍視野, 取平均值定為陽性率, 以腫瘤細(xì)胞陽性率＞25%為陽性。對(duì)實(shí)驗(yàn)過程全程監(jiān)控, 避免不必要的誤差出現(xiàn)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

乳腺癌患者術(shù)前辨證為血瘀證者BCRP表達(dá)的陽性率高于其他證型, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 乳腺癌中醫(yī)辨證與BCRP的關(guān)系(n, %)

3 討論

乳腺癌, 古醫(yī)籍稱“乳巖”。因乳房腫塊堅(jiān)硬如石, 潰爛后如巖石而得名, 中醫(yī)認(rèn)為乳腺癌發(fā)病的病因有：情志因素：七情可致臟腑功能失調(diào), 導(dǎo)致經(jīng)絡(luò)痞澀, 聚結(jié)成核。飲食因素：肥甘厚味損傷脾胃, 運(yùn)化失司, 以致痰凝、血瘀等瘀滯于乳絡(luò)而為病。體質(zhì)因素：有些患者臟腑虛弱有易患乳腺癌的病理體質(zhì)。外因也是一重要因素：“四時(shí)八風(fēng)之客于經(jīng)絡(luò)之中, 為瘤病也。臟腑虧虛、氣血不足為發(fā)病之本；在正氣虛衰的前提下, 同時(shí)邪氣盛實(shí)的基礎(chǔ)上, 導(dǎo)致氣滯、痰凝、血瘀、熱毒等蘊(yùn)滯于乳絡(luò)而成乳巖。

BCRP是1998年分離出的一種新的ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白, 該蛋白含有633個(gè)氨基酸殘基, 其為半轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。因該蛋白首先從乳腺細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn), 故又被稱為乳腺癌耐藥蛋白。BCRP廣泛存在于正常組織中, 其耐藥機(jī)制與P-糖蛋白(P-gp)相似, 通過將藥物轉(zhuǎn)運(yùn)出胞外, 降低胞內(nèi)藥物濃度導(dǎo)致細(xì)胞耐藥。有研究表明［2］, BCRP基因在乳腺癌組織中陽性表達(dá)率、表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織, BCRP 基因表達(dá)水平與患者體內(nèi)雌激素水平及雌激素受體α(ERα)及人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(Her-2) 強(qiáng)度呈正相關(guān), 其過表達(dá)可能在乳腺癌的多藥耐藥中起較重要的作用。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者BCRP 基因表達(dá)水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。石晶等［3］研究表明, BCRP表達(dá)陽性是接受以蒽環(huán)類化療藥為主的輔助化療的乳腺癌患者的預(yù)后不良指標(biāo), 與無病生存期有負(fù)相關(guān)趨勢(shì)。BCRP的表達(dá)可以指導(dǎo)乳腺癌的化療。有研究認(rèn)為BCRP表達(dá)的腫瘤細(xì)胞對(duì)米托蒽醌、阿霉素、柔紅霉素等均產(chǎn)生交叉耐藥, 但是對(duì)長(zhǎng)春堿、紫杉醇和順鉑敏感, 因此可以作為臨床用藥的依據(jù)。

化療是乳腺癌的重要治療方法之一, 然而癌細(xì)胞的多藥耐藥對(duì)腫瘤化療的療效造成了嚴(yán)重影響。目前, 中醫(yī)藥治療乳腺癌已取得良好療效, 也越來越受到重視, 本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌術(shù)前辨證與BCRP的表達(dá)相關(guān)。乳腺癌患者術(shù)前辨證為血瘀證出現(xiàn)BCRP陽性的幾率最高(86.96%)；從研究結(jié)果中可見乳腺癌中血瘀證型患者耐藥性強(qiáng), 其化療效果較差, 預(yù)后較差。這些研究結(jié)果有利于指導(dǎo)臨床醫(yī)生對(duì)各證型預(yù)后的判斷, 可以為乳腺癌患者化療提供參考依據(jù), 并針對(duì)性的進(jìn)行中西醫(yī)結(jié)合治療。

［1］ 楊麗華.乳腺癌中醫(yī)證型和耐藥蛋白BCRP、MRP2、Sorcin等相關(guān)性研究.廈門大學(xué), 2011.

［2］ 王麟, 魏明杰, 金峰, 等.乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白在乳腺癌的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)相關(guān)性.解剖科學(xué)進(jìn)展, 2008, 14(2):133-136.

［3］ 石晶, 滕月娥, 張敬東, 等.乳腺癌組織中ABCG2 和HIF-1α的表達(dá)及臨床意義.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 37(5):697-700.

Analysis of correlation between syndrome differentiation of traditional Chinese medicine and BCRP expression in breast cancer

LIU Qi-sheng, XU Xiao-hong, LIU Huai, et al.
Pathology group, Faculty of Basic Medicine of Hunan College of Traditional Chinese Medicine, Zhuzhou 412012, China

Objective To investigate correlation between syndrome differentiation of traditional Chinese medicine and breast cancer resistance protein (BCRP) expression.Methods There were 80 breast cancer patients received syndrome differentiation of traditional Chinese medicine before surgery, as blood stasis syndrome group with 23 cases, hepatic depression syndrome group with 30 cases, spleen deficiency syndrome group with 17 cases, and renal yin deficiency syndrome group with 10 cases.Detection of BCRP was made on postoperative samples for analysis.Results Patients with blood stasis syndrome by preoperative syndrome differentiation had higher positive rate of BCRP than other types.The difference had statistical significance (P＜0.05).Conclusion Syndrome differentiation of traditional Chinese medicine before breast cancer surgery is correlated with BCRP expression.Patients with blood stasis syndrome have the highest positive rate of BCRP and bad prognosis.

Breast cancer; Traditional Chinese medicine; Breast cancer resistance protein

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.26.001

2015-03-23］

湖南省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2012108)

412012 湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部病理組