蔣立等

摘要[目的]研究不同益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔腸道免疫能力的影響。[方法]選擇80只體重相近的35日齡的健康斷奶獺兔，按公母各半隨機(jī)分為4個(gè)組（I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組），分別飼喂添加0、0.1、0.2和0.4 g/kg水平益生素的飼糧，預(yù)試期7 d，試驗(yàn)期60 d。試驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定腹瀉率及十二指腸、回腸與直腸的pH和SIgA含量。[結(jié)果]在飼料中添加益生素對(duì)斷奶獺兔的腹瀉率、平均日增重與料重比均有影響顯著（P<0.05）；其中Ⅲ組的日增重最高、料重比及腹瀉率最低，Ⅲ組的日增重比I組升高10.96%，Ⅲ組料重比和腹瀉率分別比I組降低7.37%及59.44%；腸道環(huán)境pH隨益生素添加水平的升高先降低后回升，但只有Ⅱ與Ⅲ組的盲腸環(huán)境pH發(fā)生了顯著變化（P<0.05），與I組相比分別低了3.03%與4.43%；回腸與十二指腸的SIgA含量不受益生素添加水平的影響（P>0.05），Ⅳ組的空?qǐng)鯯IgA含量較I組高8.84%（P<0.05）。[結(jié)論]斷奶獺兔基礎(chǔ)日糧中添加適宜的益生素可以降低腹瀉率，影響其腸道環(huán)境與提高腸道免疫屏障，最佳添加水平為0.2 g/kg。

關(guān)鍵詞斷奶獺兔；腹瀉；腸道環(huán)境pH；腸道SIgA；益生素

中圖分類號(hào)S816.71文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2015）29-066-02

斷奶獺兔往往因斷奶應(yīng)激造成機(jī)體免疫力與腸道免疫功能受損而發(fā)生腹瀉，而兔屬于單胃草食性動(dòng)物，其消化道特別發(fā)達(dá)，因此增強(qiáng)腸道免疫功能對(duì)于抵抗腹瀉的發(fā)生十分重要。斷奶后，幼兔開始采食固體飼料，胃腸道發(fā)生從吸食乳汁到采食飼料的轉(zhuǎn)變，這種日糧形式上的改變會(huì)引起腸道菌群與腸道環(huán)境pH的變化，而腸道環(huán)境pH影響著腸道菌群數(shù)量、種類、組成比例及分布，從而影響對(duì)腹瀉抵抗的能力。常萬波研究發(fā)現(xiàn)適當(dāng)提高斷奶獺兔日糧NDF含量不僅降低了其腹瀉率、盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量及pH，還增加了腸道 IgA的數(shù)量。Vaerman研究發(fā)現(xiàn)腸黏膜IgA漿細(xì)胞分泌的SIgA是動(dòng)物機(jī)體分泌量最大的免疫球蛋白，對(duì)于實(shí)現(xiàn)腸道的免疫功能起著關(guān)鍵作用。大量研究表明，添加益生素可以調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群平衡、增強(qiáng)免疫力與降低腹瀉。但是，目前關(guān)于日糧添加益生素的水平對(duì)獺兔腸道免疫力影響的報(bào)道較少。為此，筆者研究了不同的益生素添加水平對(duì)斷奶仔獺兔的腹瀉率、腸道pH和腸道SIgA含量的影響，旨在為科學(xué)添加益生素來預(yù)防斷奶腹瀉提供參考與理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物飼糧

將80只斷奶商品仔獺兔（35日齡、健康、公母各半、體重約695.72 g，購(gòu)自四川金富農(nóng)業(yè)有限公司）按單因素隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組4組，各組飼糧的益生素添加水平分別為0 、0.1、0.2、0.4/kg，其基礎(chǔ)日糧的營(yíng)養(yǎng)水平為：消化能11.48 MJ/kg、粗蛋白1850%、 粗纖維11.46%、鈣0.93%、磷0.55%；益生素由50%的地衣芽胞桿菌與50%的枯草芽孢桿菌組成，活性為200×108 個(gè)/g。

1.2飼養(yǎng)管理

自由采食與飲水，每天飼喂3次；預(yù)試期7 d，試驗(yàn)期為60 d，于西南科技大學(xué)校內(nèi)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行單籠飼養(yǎng)，每籠1只。采用自然采光與通風(fēng)，常規(guī)免疫、飼養(yǎng)管理及生長(zhǎng)情況的測(cè)定與記錄。

1.3測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1腹瀉率。按照以下公式計(jì)算腹瀉率：腹瀉率（%）=每組腹瀉兔數(shù)量×腹瀉天數(shù)/（每組兔總數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）。

1.3.2腸道環(huán)境的pH。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)空腹稱重；心臟空氣注射致死；打開腹腔剝離腸道，結(jié)扎十二指腸、空腸、回腸和盲腸后，使用pHS3C型酸度計(jì)迅速在各腸段上3個(gè)不同位點(diǎn)插入1 cm深，測(cè)定pH。

1.3.3腸道粘膜SIgA濃度。

測(cè)定腸道pH后，立刻剪取十二指腸、空腸和回腸中上段約5 cm，用PBS洗凈腸道內(nèi)容物后刮取粘膜存于-70 ℃冰箱中，供測(cè)定SIgA濃度。參考付超輝的方法，使用南京建成科技有限公司的兔SIgA酶聯(lián)免疫檢測(cè)Kit進(jìn)行測(cè)定。

1.4數(shù)據(jù)處理

使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析與多重比較分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2結(jié)果與分析

2.1益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔腹瀉率與飼料轉(zhuǎn)化率的影響

從表1可以看出，飼糧益生素添加水平對(duì)腹瀉率、料重比與平均日增重均有顯著的影響（P<0.05）。Ⅲ組斷奶獺兔的日增重最高，腹瀉率及料重比最低，Ⅲ組日增重比I組升高10.96%，Ⅲ組腹瀉率和料重比較I組分別降低59.44%及737%。根據(jù)腹瀉率與飼料轉(zhuǎn)化率可知，0.2 g/kg的益生素添加水平最適斷奶獺兔的生長(zhǎng)。

2.2益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔腸道環(huán)境pH的影響從表2可以看出，隨著日糧益生素添加水平的升高，腸道環(huán)境pH均呈現(xiàn)出先降低后又回升的趨勢(shì)，但十二指腸與空腸環(huán)境的pH未發(fā)生顯著變化（P>0.05）；此時(shí)，各組十二指腸、空腸和回腸的pH均依次升高，而小腸pH均高于盲腸。I組、Ⅱ組與Ⅳ組回腸環(huán)境pH無顯著差異（P>0.05），Ⅲ組回腸環(huán)境pH比I組顯著降低3.31%（P<0.05）。添加01和0.2 g/kg的益生素后，盲腸環(huán)境pH分別顯著降低303%和4.43%，而添加0.4 g/kg的益生素未能顯著改變其pH，同時(shí)Ⅱ組與Ⅲ組盲腸環(huán)境pH差異不顯著（P>0.05）。

2.3益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔腸道免疫屏障的影響從表3可以看出，日糧益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔回腸與十二指腸的SIgA含量沒有明顯影響，但卻表現(xiàn)出隨添加水平的上升而升高的趨勢(shì)。對(duì)于空腸SIgA含量，只有IV組才表現(xiàn)出顯著的升高趨勢(shì)（P>0.05），比I組高8.84%；而Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組間差異不顯著（P<0.05）。由此可見，益生素添加水平為0.4 g/kg時(shí)，斷奶獺兔腸道免疫屏障功能較強(qiáng)。3討論

3.1益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔腹瀉率的影響

該試驗(yàn)結(jié)果表明添加益生素能降低斷奶獺兔的腹瀉率，并且當(dāng)益生素添加水平達(dá)到一定值后，雖然仍能降低腹瀉率，但降低幅度卻在減小，說明對(duì)腹瀉的抵抗能力在減弱，與郭肖蘭等對(duì)獺兔的研究結(jié)果相似，但不同的是該試驗(yàn)中腹瀉率在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組間存在顯著差異（P<0.05）。研究表明，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌還能通過提高蛋雞、肉雞及斷奶仔豬等動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率而減少腹瀉。該試驗(yàn)中所用的益生素是由50%的地衣芽胞桿菌與50%的枯草芽孢桿菌組成。同時(shí)，芽孢桿菌為需氧菌，當(dāng)其未超過最佳數(shù)量時(shí)，消耗大量氧氣后致使胃腸內(nèi)氧氣濃度大大減少，這樣大腸桿菌和沙門氏菌等有害需氧菌的繁殖就會(huì)受到抑制，從而使乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌處于優(yōu)勢(shì)菌群地位，因而能較強(qiáng)地抵抗腹瀉的發(fā)生；但是，當(dāng)芽孢桿菌超過最佳數(shù)量時(shí)，消耗的氧氣過度，消化道環(huán)境中的氧氣就不足以進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的充分消化與吸收，反而不利于抵抗腹瀉，這可能是益生素添加到達(dá)一定水平后腹瀉率降低幅度減少的原因之一。Qiu等對(duì)益生素作用的研究也證實(shí)益生素添加水平過高會(huì)引起動(dòng)物腹瀉。

3.2益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔腸道環(huán)境pH的影響

該試驗(yàn)結(jié)果表明斷奶獺兔小腸環(huán)境pH高于盲腸，這一現(xiàn)象并不受益生素添加水平的改變，這與周夢(mèng)蕊研究乳酸菌對(duì)斷奶獺兔腸道微生態(tài)的研究結(jié)果相似。已有研究表明，斷奶仔豬與肉牛的十二指腸、空腸和回腸pH值依次升高，該試驗(yàn)也得到相同的結(jié)果。該試驗(yàn)中日糧添加益生素會(huì)降低斷奶獺兔腸道環(huán)境pH，與芽胞桿菌制劑可以降低斷奶仔豬胃腸道pH的試驗(yàn)結(jié)果相同；但是，周夢(mèng)蕊研究發(fā)現(xiàn)35日齡的斷奶獺兔日糧中添加乳酸菌后，80日齡與110日齡的腸道環(huán)境pH是升高的，二者不同的原因可能是添加的益生素種類不同。盲腸內(nèi)較低的pH 有利于動(dòng)物的腸道健康，該試驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了中、高水平的益生素不僅顯著降低了斷奶獺兔盲腸的pH，而且也明顯降低了獺兔的腹瀉率；但是，較高水平的益生素處理盲腸的pH降低幅度與腹瀉率降低幅度同時(shí)減小。同樣，孫小琴等研究表明日糧添加檸檬酸對(duì)蛋雞消化道pH的降低作用逐漸減小。在獺兔對(duì)飼糧的消化中，其盲腸起著特別重要的作用，因?yàn)槊つc特別發(fā)達(dá)，其長(zhǎng)度與體長(zhǎng)接近；未被胃和小腸消化吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)會(huì)進(jìn)入盲腸進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸（VFA），不僅影響其pH，而且還抑制盲腸內(nèi)的大腸桿菌等有害菌的繁殖，而對(duì)腹瀉達(dá)到一定的抵抗作用。

3.3益生素添加水平對(duì)斷奶獺兔腸道免疫屏障的影響

該試驗(yàn)結(jié)果表明斷奶獺兔十二指腸、空腸、回腸分泌的SIgA量均呈現(xiàn)出隨日糧益生素添加水平的增加而上升的趨勢(shì)。已有研究發(fā)現(xiàn)，添加維生素E也能提高吉戎兔小腸中SIgA的含量，從而提高其腸道的免疫功能。小腸黏膜SIgA是腸道免疫屏障最典型的指標(biāo)，它能夠識(shí)別并與細(xì)菌的抗原決定簇相結(jié)合，阻止抗原與致病微生物入侵到腸腔內(nèi)而促進(jìn)腸道健康。已有研究表明，斷奶家兔日糧添加適量的谷氨酰胺、ADF、半乳甘露寡糖等均能顯著促進(jìn)小腸黏膜SIgA的分泌與提高其SIgA的含量而增強(qiáng)腸道黏膜免疫功能。研究表明，腸道粘膜SIgA主要通過對(duì)有害菌群增殖的抑制，而減少腹瀉率。該試驗(yàn)中0.4 g/kg益生素添加組斷奶獺兔空腸的SIgA含量顯著增加，同時(shí)其腹瀉率也顯著降低，表明益生素能刺激腸黏膜分泌更多的SIgA，其機(jī)理可能是益生素能影響?zhàn)つっ庖呖乖⑻岣咂渫返幕罨cSIgA的表達(dá)，主要通過維持腸道菌群平衡而促使有益菌生長(zhǎng)而實(shí)現(xiàn)的。益生菌灌注小鼠誘導(dǎo)激活腸黏膜免疫的試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)小腸中IgA數(shù)量和固有層中Toll樣受體2（TLR-2）基因表達(dá)水平等明顯升高。

4結(jié)論

在斷奶獺兔日糧中添加適宜水平的益生素能有效降低腹瀉率與提高腸道的免疫力，在該試驗(yàn)條件下最適添加水平為0.2 g/kg。

參考文獻(xiàn)

[1] RODRIGUEZ A，SMITH H W.The identification of the antimicrobial factors of the stomach contents of suckling rabbits [J].Biochem J，1966，100：79-82.

[2] 常萬波.日糧不同能量水平對(duì)獺兔胃腸道內(nèi)環(huán)境、免疫性能以及IFN-γ和RLA-A3表達(dá)量的影響[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013.

[3] VAERMAN J P，LANQENDRIES A，PABST R，et al.Contribution of serum IgA to intestinal lymph IgA，and vice versa，in minipigs[J].Veterinary immunology and immunopathology，1997，58：301-08.

[4] 付朝輝.日糧谷氨酰胺添加水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔生產(chǎn)性能、代謝性能及腸道黏膜屏障的影響[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[5] 郭肖蘭，任戰(zhàn)軍.益生素對(duì)斷奶獺兔生長(zhǎng)性能、消化率及腹瀉率的影響[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，22（4）：27-31.

[6] QIU R，CROOM J，ALI R H，et al.Direct fed microbial supplementation repartitions host energy to the immune system[J].Journal of animal science，2012，90（8）：2639-2651.

[7] 周夢(mèng)蕊.乳酸菌對(duì)斷奶獺兔腸道微生態(tài)的影響[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2013.

[8] 辛娜，張乃鋒，刁其玉，等.芽孢桿菌制劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、胃腸道發(fā)育的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，43（6）：901-908.

[9] 周韶，李樹聰.不同精料水平對(duì)肉牛瘤胃和小腸pH值的影響[J].飼料工業(yè)，2003，24（5）：27-28.

[10] 孫小琴，龔月生，段玉蘭.檸檬酸對(duì)蛋雞消化道內(nèi)容物 pH和盲腸菌群的影響[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007，35（4）：41-44.

[11] 王振東，堵光瑩，彭易柱.維生素E對(duì)健康吉戎兔小腸中slgA質(zhì)量濃度的影響[J].飼料研究，2012（10）：11-13.

[12] MANTIS N J，ROL N，CORTHASY B.Secretory IgAs complex roles in immunity and mucosal homeostasis in the gut[J].Mucosal immunology，2011，4（6）：603-611.

[13] SIRISINHA S.The pleiotropic role of vitamin A in regulating mucosal immunity[J].Asian Pac J Allergy Immunol，2015，33（2）：71-89.

[14] GALDEANO C M，PERDION G.The probiotic bacterium Lactobacillus casei induces activation of the gut mucosal immune system through innate immunity[J].Clinical and vaccine immunology，2006，13（2）：219-226.