李舫 王光鋒 朱明恩 王彩霞

摘 ?要：為了解山東省肉仔雞“肺水腫”流行病學(xué)情況，本研究采用臨床癥狀觀察與實驗室診斷相結(jié)合的方法對山東各地36家肉雞養(yǎng)殖場共95份病例進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明，檢測的36個規(guī)?；u場63.9%存在“肺水腫”感染;檢出陽性病例53份，總感染率為55.8%;“肺水腫”感染地區(qū)差異不大，冬春季節(jié)多發(fā)，25～32日齡為發(fā)病高峰。結(jié)果提示，山東省大部分肉雞養(yǎng)殖場中存在“肺水腫”感染，應(yīng)采取相應(yīng)的防治措施對該病進(jìn)行控制。

關(guān)鍵詞：肉仔雞;肺水腫;流行病學(xué)調(diào)查;防治

中圖分類號：S858.31 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ? ? 文章編號：1673-1085（2015）03-0017-03

肉仔雞“肺水腫”是近幾年在肉雞群中流行的一種呼吸道疾病。發(fā)病雞體溫升高、食欲減退、流淚、呼吸困難。剖檢變化表現(xiàn)為肺臟水腫、出血，發(fā)病稍長的肝臟、肺臟表面有黃白色纖維蛋白滲出。目前已證實引起肉仔雞肺水腫的原因為H9N2禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）與大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli）混合感染所致[1]。該病發(fā)病率較高，給肉雞飼養(yǎng)場造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解山東省肉仔雞“肺水腫”的發(fā)病情況和流行規(guī)律，分析流行因素及存在的問題，為相關(guān)防治措施的制定提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)及科學(xué)依據(jù)，同時應(yīng)用研究結(jié)果指導(dǎo)肉雞養(yǎng)殖場（戶）采取針對性防疫方法與措施，減少其經(jīng)濟(jì)損失，本研究對山東省濰坊、淄博、青島等地區(qū)肉仔雞“肺水腫”進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，同時制定了相應(yīng)的防治措施。

1 ?材料和方法

1.1 ?樣品采集 ?2012年7月～2014年6月從山東各地的36家肉雞養(yǎng)殖場收集95份疑似肉仔雞“肺水腫”病料，并了解記錄發(fā)病雞群所在地區(qū)、日齡、發(fā)病季節(jié)、免疫方式和管理等情況。

1.2 ?菌株和毒株 ?大腸桿菌（Escherichia coli）標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922購自國家獸醫(yī)微生物菌種保藏中心;禽流感H9亞型滅活疫苗（A/chicken/Shandong/6/96株）購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 ?主要試劑 ?普通營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、細(xì)菌微量生化鑒定管購自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;TRIzol reagent購于Invitrogen公司;RT-PCR試劑盒購自北京天恩澤基因有限公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.4 ?藥敏試紙 ?紅霉素、環(huán)丙沙星、青霉素等15種藥敏試紙片購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.5 ?大腸桿菌的檢測 ?將采集的肺臟病料，無菌條件下在營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂上分別劃線分離，37℃培養(yǎng)18～24h，觀察細(xì)菌的生長情況。根據(jù)細(xì)菌分離結(jié)果，將分離菌株的純培養(yǎng)物分別作靛基質(zhì)試驗、甲基紅試驗、VP試驗、枸櫞酸鹽利用試驗，逐一鑒定篩選[2]。用大腸桿菌參考菌株ATCC25922 作對照。

1.6 ?H9N2禽流感病毒的檢測 ?利用RT-PCR方法檢測樣品病毒RNA，針對H9N2禽流感病毒HA、NA基因設(shè)計引物，具體反應(yīng)體系、反應(yīng)程序參照文獻(xiàn)[1]進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后，取PCR產(chǎn)物電泳檢測。以禽流感H9亞型滅活疫苗（A/chicken/Shandong/6/96株）作為陽性對照。

1.7 ?藥敏試驗 ?以接種環(huán)挑取適量大腸細(xì)菌培養(yǎng)物，在營養(yǎng)瓊脂平板上密集均勻劃線。用無菌鑷子夾取各種抗菌藥物紙片貼在培養(yǎng)基表面。倒置于37℃溫箱培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果并測量抑菌圈大小。判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑大于15mm為高度敏感;抑菌圈直徑在10～15mm之間為中度敏感;抑菌圈直徑小于10mm為耐藥[3]。

2 ?結(jié)果

2.1 ?病原檢出結(jié)果 ?對95份病料進(jìn)行了大腸桿菌和H9N2禽流感病毒的檢測，檢出大腸桿菌60份，H9N2禽流感病毒56份，大腸桿菌和H9N2禽流感病毒共感染的53份，陽性率為55.8%，見表1。

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2.2 ?山東部分地區(qū)“肺水腫”總體感染狀況 ?表2數(shù)據(jù)顯示，36個肉雞場63.9%（23/36）存在“肺水腫”，95份樣品的總體陽性率為55.8%（53/95），不同地區(qū)的總體陽性率差異不顯著，魯東地區(qū)集約化養(yǎng)殖程度較高，陽性率略低于其他地區(qū)，見表2。

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2.3不同日齡“肺水腫”感染情況 ?調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在感染“肺水腫”的53份病例中，25～32日齡的肉雞感染“肺水腫”的比率最高，為39.6%;其次為33～40日齡肉仔雞，感染率為26.4%;而8日齡以下的仔雞感染率最低，僅為1.9%，見表3。

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2.4 ?不同季節(jié)“肺水腫”感染情況 ?由表4可以看出，在感染“肺水腫”的53份病例中，1～3月份和11～12月份是該病的高發(fā)期，其中2月份“肺水腫”的感染率最高，為17.0%，見表4。

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2.5 ?藥敏試驗結(jié)果 ?試驗結(jié)果顯示，60株大腸桿菌分離株對15種藥物均出現(xiàn)不同程度的耐藥性，平均耐藥率為61.7%，且多重耐藥現(xiàn)象比較普遍，81.7%以上的分離菌株對7種以上抗生素具有耐藥作用，這說明山東地區(qū)肉雞大腸桿菌的耐藥性相當(dāng)嚴(yán)重。其中對頭孢哌酮、阿米卡星、大觀霉素敏感度較高，高敏以上菌株占51.7%～70%，耐藥率為5%～10%;對左氟沙星、氧氟沙星、卡那霉素敏感度次之，中敏以上菌株占53.3%～65%，耐藥率為35%～46.7%;對多粘菌素、頭孢曲松、妥布霉素、諾氟沙星、頭孢噻吩、青霉素、環(huán)丙沙星、氨芐西林、頭孢唑啉敏感度最低，高敏以上菌株低于3.3%，耐藥率高于53.3%，見表5。

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3 ?肉仔雞“肺水腫”的防治措施

3.1 ?加強飼養(yǎng)管理 ?改善環(huán)境衛(wèi)生，注意雞舍通風(fēng)換氣，可根據(jù)情況進(jìn)行間歇式通風(fēng);注意舍內(nèi)的空氣濕度，可以通過噴霧保持空氣濕潤，降低空氣中有害物質(zhì);給雞群提供全價優(yōu)質(zhì)飼料，保證充足的維生素、礦物質(zhì)和電解質(zhì)，增強機(jī)體抵抗力，提高呼吸道粘膜免疫功能，防止繼發(fā)感染的發(fā)生。

3.2 ?建立生物安全體系 ?健全各種消毒制度和設(shè)施，進(jìn)行帶雞消毒，對用具、食槽、水槽、接觸病雞的人員及污染場地嚴(yán)格消毒，雞糞要定期做無害化處理，病死雞做深埋或焚燒處理。同時要做好切斷傳染源的工作，嚴(yán)格控制外來人員進(jìn)入雞舍，對于進(jìn)出雞場的車輛要徹底消毒。

3.3 ?做好免疫接種 ?與其他病毒性疾病一樣，接種疫苗是預(yù)防H9N2亞型禽流感發(fā)生與傳播的最有效手段之一。在肉雞10日齡左右給予禽流感油乳苗皮下注射0.3ml[4]，并且定期對雞群進(jìn)行實驗室禽流感的抗體檢測，使雞群保持較高的抗體水平。

3.4 ?科學(xué)用藥 ?對于該病的防治，關(guān)鍵在于控制其繼發(fā)感染大腸桿菌。在發(fā)病早期，可以投服一些抗病毒藥物，如黃芪多糖，并以疏通呼吸道、平喘、止咳、化痰、增強機(jī)體抵抗力為主;發(fā)病中期以防止支氣管阻塞和繼發(fā)感染為主，可通過藥敏試驗選擇敏感藥物如頭孢哌酮、阿米卡星等對癥治療。用藥時遵循以下原則：正確診斷，對癥下藥;根據(jù)抗菌藥自身特性和疾病特點來選擇給藥途徑;正確掌握用量和療程;最好能依據(jù)藥敏試驗結(jié)果來選擇藥物;盡量避免使用影響免疫反應(yīng)和生產(chǎn)性能的藥物等[5]。

4 ?討論

本次調(diào)查結(jié)果表明，山東省肉仔雞“肺水腫”的總體感染率為63.9%，在調(diào)查的36個肉雞養(yǎng)殖場中有23個養(yǎng)殖場檢測結(jié)果為陽性。該病發(fā)病率有一定的日齡和季節(jié)差異，25～32日齡肉雞患該病的幾率最高，約為39.6%，而1～8日齡以下肉雞發(fā)病率最低，僅為1.9%，這可能與雛雞體內(nèi)母源抗體水平較高有關(guān)。冬春季節(jié)發(fā)病率高，可能由于冬春季節(jié)氣候多變，肉雞養(yǎng)殖以保溫為主，飼養(yǎng)密度過高，通風(fēng)不良，舍內(nèi)空氣含塵量大，氨氣、硫化氫等有害氣體濃度過高，這些不利環(huán)境因素?fù)p傷上呼吸道粘膜，使機(jī)體對H9亞型AIV的感染更為敏感，然后繼發(fā)感染大腸桿菌。

使用抗菌藥物是治療大腸桿菌病的主要方法，但是在治療大腸桿菌病的同時，產(chǎn)生了各種耐藥菌株。劉聚祥等[6]用氟苯尼考、氧氟沙星等12種抗菌藥物對從東北、河北、山東、華東等地分離的21株雞致病性大腸桿菌進(jìn)行藥敏檢測，結(jié)果表明：21株菌均為多重耐藥菌株，說明雞致病性大腸桿菌的耐藥性日益增強，耐藥譜越來越廣。該研究通過藥敏試驗對臨床上常用的15種藥物進(jìn)行了篩選，亦發(fā)現(xiàn)分離菌株均出現(xiàn)不同程度的耐藥性，且多重耐藥現(xiàn)象比較普遍，說明山東地區(qū)肉雞大腸桿菌的耐藥性相當(dāng)嚴(yán)重。其中對頭孢哌酮、阿米卡星、大觀霉素敏感度較高，高敏以上菌株占51.7%～70%，耐藥率為5%～10%，為治療大腸桿菌病的首選藥物。

通過對山東省肉仔雞“肺水腫”病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)“肺水腫”的發(fā)病率與肉雞的飼養(yǎng)管理水平、日齡、季節(jié)、免疫等都有關(guān)，因此在預(yù)防“肺水腫”疾病中要考慮各種影響其發(fā)病的因素，采取綜合的防治措施。日常要實行科學(xué)的飼養(yǎng)管理，建立良好的生物安全體系，健全各種消毒制度和設(shè)施;要完善并強化免疫制度，搞好定期預(yù)防接種;通過藥敏試驗篩選敏感有效藥物，進(jìn)行對癥治療，以防止繼發(fā)感染的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

[1] ?王光鋒，李舫，李汝春，等.肉仔雞“肺水腫”病原的分離與鑒定[J].中國家禽，2014，36（19）：53-56.

[2] ?中華人民共和國衛(wèi)生部.食品微生物學(xué)檢驗大腸埃希氏菌計數(shù)[S].北京，2012.

[3] ?蔡寶祥.動物傳染病診斷學(xué)[M ].4版. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：46-47.

[4] ?沙明利，任晚霞，齊洪艷.淺談雞呼吸道疾病的病因及防治[J].家禽科學(xué)，2010，4：28-29.

[5] ?王雪玲.雞大腸桿菌病防治研究進(jìn)展[J].河南畜牧獸醫(yī)，2012，33（8）：5-6.

[6] ?劉聚祥，李宏娟，李占雷，等.我國部分地區(qū)雞致病性大腸桿菌的耐藥性檢測與分析[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2007，30（5）：94-98.