蔣 瑩，劉芳蘭

(江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，江西 上饒 334000)

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白藜蘆醇對(duì)大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎抑制作用及機(jī)制研究

蔣 瑩，劉芳蘭

(江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，江西 上饒 334000)

目的：研究白藜蘆醇(RES)對(duì)大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)的作用及其機(jī)制。方法：建立牛Ⅱ型膠原蛋白大鼠CIA模型，測(cè)定大鼠足爪炎癥腫脹度，HE染色對(duì)關(guān)節(jié)組織進(jìn)行檢查，ELISA法檢測(cè)血清中炎癥因子IL-6、TNF-α水平。結(jié)果：灌胃給予RES能減輕CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎癥狀，降低血清中IL-6、TNF-α水平，且呈現(xiàn)劑量依賴性趨勢(shì)(P<0.05或P<0.01)；HE檢查發(fā)現(xiàn)RES可改善局部關(guān)節(jié)炎癥狀。結(jié)論：RES對(duì)CIA大鼠具有治療作用，該機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)CIA大鼠異常免疫功能有關(guān)。

膠原性關(guān)節(jié)炎；白藜蘆醇；炎癥；免疫功能

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是以慢性、對(duì)稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，尚未明確病因的全身性炎癥性自身免疫炎性疾病[1]。目前，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療以迅速緩解疼痛癥狀為主，但其副作用較強(qiáng)，有一定的局限性。我國傳統(tǒng)中藥具有毒副作用小等特點(diǎn)，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療方面有廣泛的應(yīng)用前景。白藜蘆醇(RES)是一種多酚類化合物，其生物學(xué)功能主要有抗腫瘤、抗菌消炎、抗氧化、抗自由基等。目前針對(duì)RES的研究熱點(diǎn)之一是其抗炎作用。本文研究RES對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是否具有治療作用，初步探討其作用機(jī)制。

1 材料與儀器

白藜蘆醇(純度>80%，湖南省洪江華光生物有限責(zé)任公司，批號(hào)：20130205)；BCA蛋白定量試劑盒(Pierce公司)；牛II型膠原、大鼠TNF-α、IL-6 ELISA檢測(cè)試劑盒(Sigma公司)；弗氏不完全佐劑(美國Sigma公司)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康雄性4月齡SD大鼠，體重250～275g,由江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境飼養(yǎng)，許可證號(hào)SCXK(贛)2012-0016。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方案

將SD大鼠隨機(jī)分為6組：正常組，CIA模型組，RES低劑量組(20mg·kg-1)、中劑量組(40mg·kg-1)、高劑量組80mg·kg-1)和陽性對(duì)照組(布洛芬10mg·kg-1)。各用藥組于致炎后第21～35天灌胃給藥，每天1次，正常組和CIA模型組灌胃給予等容量的0.5%羧甲基纖維素鈉。

2.2 大鼠CIA模型制備與評(píng)價(jià)[3]

牛II膠原500μg溶于0.05mol·L-1醋酸0.2mL中，與等體積弗氏完全佐劑混合充分，注射至大鼠尾根部皮下。初次致敏后第21天，再次大鼠尾根部皮下注射同體積試劑。每日觀察關(guān)節(jié)皮下結(jié)節(jié)、紅腫程度等情況。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：4分：全部足爪腫脹；3分：踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹；2分：足趾和趾關(guān)節(jié)有腫脹；1分：趾關(guān)節(jié)有紅腫；0分：無紅腫。

2.3 足爪容積測(cè)定及病理檢查

足爪儀測(cè)定致炎前每只小鼠左后足容積，自第21 天起，每4天測(cè)定1次相應(yīng)足容積，腫脹度=(Vt-Vn)/Vn×100%，Vn指模型前足容積，Vt指模型后足容積。第35天處死小鼠后，剪取左踝關(guān)節(jié)制病例切片待查。

2.4 血清中炎性因子的檢測(cè)

第1次免疫后35天麻醉大鼠，眼底靜脈叢取血，分離取血清，并按照ELISA試劑盒說明操作，檢測(cè)血清中IL-6、TNF-α水平。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 RES對(duì)大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響

RES可劑量依賴性地抑制CIA大鼠繼發(fā)性足腫脹，其足爪腫脹度明顯輕于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，見表1。

3.2 病理切片觀察

常規(guī)HE染色病理切片顯微鏡檢發(fā)現(xiàn)：健康對(duì)照組滑膜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)完整，關(guān)節(jié)軟骨表面完整，腔內(nèi)無滲出液，滑膜組織正常；CIA模型組大鼠鏡下可見滑膜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞，關(guān)節(jié)間隙狹窄，可見炎性細(xì)胞浸潤，并且伴有血管翳形成。CIA陽性對(duì)照組可見滑膜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)較完整，關(guān)節(jié)間隙清晰。見圖1。

表1 RES對(duì)大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

A:健康對(duì)照組；B:CIA模型組；C:CIA陽性藥物組

3.3 RES對(duì)炎性因子表達(dá)的影響

經(jīng)ELISA法檢測(cè)，相較于正常組，CIA模型組炎性因子IL-6、TNF-α的表達(dá)明顯增加，而RES給藥組可呈劑量依賴性地抑制促炎因子的表達(dá)，見表2。

表2 各組大鼠血清炎性因子水平

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

4 討論

本研究觀察了RES對(duì)各實(shí)驗(yàn)組大鼠體重的影響。經(jīng)RES治療35天后，正常對(duì)照組、CIA模型組、CIA陽性對(duì)照組、及RES高、中、低劑量組大鼠平均體重比較發(fā)現(xiàn)：各實(shí)驗(yàn)組兩兩比較平均體重均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，表明RES對(duì)SD大鼠無明顯毒副作用。此外，已經(jīng)出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥狀的CIA大鼠使用RES處理35天，其關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足爪容積及滑膜組織病理評(píng)分與模型組比較明顯下降，與陽性對(duì)照藥物布洛芬比較，下降稍緩，提示RES對(duì)CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎有抑制作用，其作用強(qiáng)度不及布洛芬。本研究首次通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型顯示RES對(duì)CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎有抑制作用，機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)CIA大鼠異常免疫功能有關(guān)。

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

2015-04-24

蔣瑩(1985-)，女，江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校助理實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)樯韺W(xué)。

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0014-02

10.11954/ytctyy.201519007