賈福懷，陶 剛，葉賢祺，王彩霞

(寧波御坊堂生物科技有限公司，浙江 寧波 315012)

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復(fù)方中藥口服液對小鼠抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)研究

賈福懷，陶 剛*，葉賢祺，王彩霞

(寧波御坊堂生物科技有限公司，浙江 寧波 315012)

目的：觀察由黃精、黃芪、西洋參、發(fā)酵蟲草菌粉(蝙蝠蛾擬青霉菌粉)、馬鹿茸為主要原料制備的復(fù)方中藥口服液對受試小鼠的抗疲勞作用。方法：設(shè)低、中、高3個(gè)劑量組，經(jīng)口給予樣品，每天1次，連續(xù)30天，觀察負(fù)重游泳時(shí)間，進(jìn)行血清尿素氮測定、肝糖原測定、血乳酸測定。結(jié)果：受試物中、高劑量組可明顯延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間(P<0.05)；中、高劑量組可明顯降低小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量(P<0.01)；中、高劑量組可明顯降低小鼠游泳后血乳酸含量(P<0.05)，低、中、高劑量組均能明顯降低血乳酸曲線下面積(P<0.01)。結(jié)論：此復(fù)方中藥口服液具有明顯的抗疲勞作用，且中、高劑量組抗疲勞效果更加明顯。

中藥口服液；抗疲勞；藥理實(shí)驗(yàn)

隨著生活節(jié)奏的加快，越來越多的人在日常生活中處于疲勞狀態(tài)，近幾年甚至出現(xiàn)了因過度疲勞而猝死的事件。據(jù)WHO調(diào)查，全球有35%以上的人處于疲勞狀態(tài)，其中中年男性疲勞狀態(tài)達(dá)60%，這個(gè)數(shù)據(jù)依然呈上升趨勢[1]。為緩解疲勞，除養(yǎng)成良好作息習(xí)慣及適當(dāng)鍛煉以外，最有效的方法就是服用抗疲勞保健食品。為此，我們基于中藥抗疲勞理論及機(jī)體能量供應(yīng)理論，研發(fā)出一種具有抗疲勞功能的復(fù)方中藥口服液保健食品。該口服液是以黃精、黃芪、西洋參、發(fā)酵蟲草菌粉(蝙蝠蛾擬青霉菌粉)、馬鹿茸等為主要原輔料，含有黃精多糖、黃芪多糖、蟲草多糖、黃芪皂苷、人參皂甙、腺苷等活性成分。研究表明，上述活性成分具有明顯的抗疲勞功能[2-12]。為進(jìn)一步研究復(fù)方中藥口服液的抗疲勞效果及抗疲勞機(jī)理，本研究參考衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》，綜合分析了復(fù)方中藥口服液對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、運(yùn)動前肝糖原含量變化、運(yùn)動后小鼠血清尿素氮含量、血乳酸含量變化等指標(biāo)的影響。研究的內(nèi)容可為復(fù)方中藥保健食品的研發(fā)及多種活性成分協(xié)同抗疲勞機(jī)理研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 材料

1.1 樣品

供試復(fù)方功能制劑為本公司研發(fā)部研制。主要原料為黃精(批號20130815)、黃芪(批號20130815)、西洋參(批號20130815)、發(fā)酵蟲草菌粉(蝙蝠蛾擬青霉菌粉)(批號20121204)和馬鹿茸(批號20130815)，棕色液體，推薦用量為60mL/人/d。

1.2 動物

實(shí)驗(yàn)用清潔級雌性ICR小鼠，體重18～22g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK(滬)2012-0002。實(shí)驗(yàn)動物飼料由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為GB 14924.1-2001。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度20～24℃，相對濕度40%～70%，實(shí)驗(yàn)動物房使用許可證號為SYXK(浙)2008-0106。小鼠試驗(yàn)前在動物房環(huán)境中適應(yīng)3天。

1.3 儀器與試劑

游泳箱、電子天平、鉛皮、721分光光度計(jì)、離心機(jī)、混運(yùn)器、恒溫水浴箱、電熱水箱、手術(shù)器械等。血清尿素氮測定試劑盒、肝糖原測定試劑盒、血乳酸測定試劑盒(試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號為20120821)。

2 方法

2.1 劑量選擇

將小鼠隨機(jī)分為4組，每組40只，分別為復(fù)方功能口服液低劑量組(0.42mL/kg)、中劑量組(0.83mL/kg)、高劑量組(2.50mL/kg)和陰性對照組(蒸餾水)。低、中、高劑量分別相當(dāng)于人體推薦量的5倍、10倍、30倍。采取灌胃法，經(jīng)口給予樣品，陰性對照組給予同等容積的蒸餾水，每天1次，連續(xù)30天。

2.2 負(fù)重游泳試驗(yàn)

按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)給藥30天，末次給予樣品30min后，將小鼠放入水中游泳，水深不低于30cm,水溫(25±1.0)℃，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛塊，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間。

2.3 血清尿素氮測定

按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)給藥30天，于末次給予樣品30min后，將小鼠放入30 ℃水中不負(fù)重游泳90min，取出，休息60min后摘眼球采血，離心取血清，按試劑盒使用步驟測小鼠血清中尿素氮含量。

2.4 肝糖原測定

按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)給藥30天，于末次給予樣品30min后，立即處死。精確稱取肝臟后按照使用步驟測定肝糖原。

2.5 血液中乳酸含量測定

按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)給藥30天，于末次給予樣品30min后第1次采血，在30℃的水中不負(fù)重游泳10min后立即進(jìn)行第2次采血，休息20min后進(jìn)行第3次采血。將上述3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血樣，按試劑盒使用步驟測定血乳酸含量，計(jì)算血乳酸曲線下面積。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)

樣品濃縮液對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間影響的試驗(yàn)結(jié)果見表1。各劑量組的小鼠負(fù)重游泳時(shí)間均高于陰性對照組。與對照組相比，高劑量組游泳時(shí)間延長28.96%，中劑量組游泳時(shí)間延長32.50%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組游泳時(shí)間延長22.01%，但與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說明中劑量和高劑量的復(fù)方中藥口服液具有緩解疲勞的作用。

表1 樣品濃縮液對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

注：*表示與陰性對照組相比，P<0.05。

3.2 小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量測定試驗(yàn)

樣品濃縮液對小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量影響的試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，低、中、高劑量組都可以降低小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量。與陰性對照組相比，高劑量組血清尿素氮含量降低了16.64%，高劑量組血清尿素氮含量降低了15.80%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組血清尿素氮含量降低了4.68%，但無顯著性差異(P>0.05)。

表2 樣品濃縮液對小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量的影響

注：**表示與陰性對照組相比，P<0.01。

3.3 小鼠肝糖原含量測定試驗(yàn)

樣品濃縮液對小鼠肝糖原含量影響的試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可知，各劑量組小鼠的肝糖原含量略低于陰性對照組，但無顯著性差異(P>0.05)，說明本中藥口服液對肝糖原的儲備無促進(jìn)作用[13]。

表3 樣品濃縮液對小鼠肝糖原含量的影響試驗(yàn)

3.4 小鼠運(yùn)動后血乳酸含量測定試驗(yàn)

濃縮液對小鼠運(yùn)動后血乳酸含量的影響試驗(yàn)結(jié)果見表4。由表4可知，與陰性對照組相比，低、中、高劑量組均能降低小鼠游泳后血乳酸含量，且降低效果隨著給藥劑量增加有逐漸增強(qiáng)的趨勢，但低劑量組無顯著性差異，而中、高劑量組血乳酸含量降低有顯著性差異(P<0.05)。此外，低、中、高劑量組均能明顯降低小鼠血乳酸曲線下面積，3組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

4 討論

運(yùn)動耐力的提升是提高機(jī)體抗疲勞效果最直接的表現(xiàn)，而小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)作為反映運(yùn)動耐力的重要指標(biāo)，如果結(jié)果具有顯著性差異，則說明樣品具有抗疲勞功能。尿素氮是蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的最終產(chǎn)物，機(jī)體在劇烈運(yùn)動時(shí)，蛋白質(zhì)和氨基酸的分解代謝增強(qiáng)，使血液中尿素氮含量增加而導(dǎo)致疲勞；因此，運(yùn)動后體內(nèi)尿素氮含量與耐力運(yùn)動之間有顯著關(guān)系，可作為另一個(gè)疲勞程度評價(jià)指標(biāo)[14]。乳酸是碳水化合物發(fā)生糖酵解的最終產(chǎn)物，而碳水化合物是機(jī)體劇烈運(yùn)動時(shí)最主要的能量來源，因此機(jī)體劇烈運(yùn)動后乳酸的含量會增高。由于乳酸的積累是機(jī)體產(chǎn)生生理性疲勞的重要原因，所以乳酸含量同樣可作為判斷疲勞程度的重要指標(biāo)[15]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，本研究的復(fù)方中藥口服液有延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，減少血清尿素氮濃度，減少血乳酸曲線下面積的作用，尤其是中、高劑量組效果更為明顯。

表4 樣品濃縮液對小鼠運(yùn)動后血乳酸含量的影響試驗(yàn)

注:*表示與陰性對照組相比，P<0.05；**表示與陰性對照組相比，P<0.01。

復(fù)方中藥口服液的主要原料是黃精、黃芪、西洋參、發(fā)酵蟲草菌粉(蝙蝠蛾擬青霉菌粉)、馬鹿茸，所含的黃精多糖、黃芪多糖、皂苷、腺苷等具有明顯的抗疲勞作用。經(jīng)標(biāo)志性成分含量測定，復(fù)方中藥口服液中粗多糖含量為12.530mg/mL，總皂苷含量為1.720mg/mL，腺苷含量為0.059mg/mL。經(jīng)過小鼠抗疲勞功能試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組和對照組的肝糖原含量變化差異不大，說明本復(fù)方中藥口服液不是通過促進(jìn)肝糖原的儲備來提高機(jī)體抗疲勞能力。而血清尿素氮濃度明顯降低，說明本復(fù)方中藥口服液可擬制疲勞小鼠血清尿素氮的產(chǎn)生。尿素氮含量的降低表明機(jī)體運(yùn)動過程中蛋白質(zhì)參與供能比例減少，脂肪和糖原的供能比例相對增加，因此其抗疲勞機(jī)理可能是在機(jī)體運(yùn)動供能過程中擬制氨基酸、蛋白質(zhì)的代謝，而促進(jìn)糖原、脂肪在運(yùn)動中的供能。此外，血乳酸含量測定試驗(yàn)顯示，血乳酸曲線面積明顯降低，說明本復(fù)方中藥口服液可加速乳酸的清除來降低機(jī)體疲勞感，而且，小鼠運(yùn)動后的血乳酸含量也明顯降低，說明本口服液除加速乳酸的清除以外，還可能通過擬制乳酸來達(dá)到機(jī)體抗疲勞的目的。

本試驗(yàn)經(jīng)口給予小鼠不同劑量的復(fù)方中藥口服液，結(jié)果表明受試物中、高劑量組均能明顯延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，差異具有顯著性(P<0.05)；中、高劑量組均能明顯降低小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量，差異具有顯著性(P<0.01)；中、高劑量組均能明顯降低小鼠游泳后血乳酸含量；低、中、高三劑量組均能明顯降低血乳酸曲線下面積，差異具有顯著性(P<0.01)。因此得出供試樣品具有緩解體力疲勞的作用，可以作為保健食品開發(fā)利用。

[1] 張穎捷,杜萬紅. 國內(nèi)外抗疲勞研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué), 2012(7):1112-1116.

[2] 石娟,趙煜,雷楊,等. 黃精粗多糖抗疲勞抗氧化作用的研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2011(6):1409-1410.

[3] 劉詩瓊,秦曉群,李世勝. 黃精多糖對小鼠抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國當(dāng)代醫(yī)藥,2009(10):31-35.

[4] 王曦,許曉燕,鄭林用,等. 乳酸菌發(fā)酵黃芪的抗疲勞保健功能研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2011(6):1422-1424.

[5] 朱華野,樸龍. 黃芪提取物抗炎、鎮(zhèn)痛、耐缺氧及抗疲勞作用的研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007(5):1156-1157.

[6] 袁紅,張淑芳,賈紹輝,等. 黃芪生物活性及其在保健食品中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2014(15):330-334.

[7] 許宇輝,梁慧春,溫泉,等. 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體對小鼠體力疲勞及缺氧的影響[J]. 軍事醫(yī)學(xué),2014(10):784-790.

[8] 賁松彬,張?jiān)?孫冬梅,等. 蟲草多糖蘋果果醋的保健功能評價(jià)[J]. 食品科學(xué),2014(7):232-237.

[9] 許宇輝,梁慧春,楊征. 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體抗小鼠力竭疲勞作用[J]. 中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2014(3):351-357.

[10] 張睿,趙玉紅,王忠政. 鹿茸水提物對小鼠抗疲勞功能的影響[J]. 食品工業(yè)科技,2011(4):365-367.

[11] 羅翔丹,潘風(fēng)光,張鐵華,等. 鹿茸多肽對小鼠耐缺氧和抗疲勞能力的影響[J]. 食品科學(xué),2008(4):386-388.

[12] 侯瀟,高建,李春雨,等. 馬鹿角蛋白酶解物的抗氧化、抗疲勞和免疫活性[J]. 食品科學(xué),2013(9):305-309.

[13] 鄭哲君,李曉莉,王朔. 抗疲勞功能食品的研究進(jìn)展[J]. 食品科技,2006,31(2): 4-7.

[14] 陳玉滿,蔡德雷,陳江. 紅景天抗疲勞作用研究[J]. 浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2006(4):12-13.

[15] 張穎捷,杜萬紅. 國內(nèi)外抗疲勞研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2012(7):1112-1116.

(責(zé)任編輯：余 婷)

Effects of Oral Liquid of Chinese Tranditional Medicine on Anti-fatigue in Mice

Jia Fuhuai,Tao Gang*,Ye Xianqi,Wang Caixia

(Ningbo Yufangtang biological technology co.,Ltd,Ningbo 315012,China)

Objective:To observe the anti-fatigue effects of the oral liquid of chinese tranditional medicine,some experiments were done in mice. Methods:High,medium and low three dose groups were seted,the samples were administered through the rice mouth,once a day,30 consecutive days.Measured the loaded-swimming time,serum urea nitrogen,hepatic glycogen and blood lactic acid after exercise. Results:The medium and high dose groups can significantly extend the loaded-swimming time(P<0.05),significantly lowered serum urea nitrogen in mice after exercise(P<0.01),obviously decrease blood lactic acid after exercise(P<0.05). the low,medium and high dose groups significantly reduced the curve area of blood lactate(P<0.05).Conclusion:The oral liquid of chinese tranditional medicine have the effects of anti-fatigue. The anti-fatigue effects of medium and high dose groups is more obvious.

Oral Liquid of Chinese Tranditional Medicine;Anti-fatigue；Pharmacological Experiments

2015-05-17

賈福懷(1963-)，男，寧波御坊堂生物科技有限公司高級工程師，研究方向?yàn)橹兴幃a(chǎn)品開發(fā)。

陶剛(1984-)，男，寧波御坊堂生物科技有限公司工程師，研究方向?yàn)楸＝∈称烽_發(fā)。

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0007-03

10.11954/ytctyy.201519004