郝家明，刁志宏，黎永新，楊志勇，李明友

（1.中國(guó)人民解放軍第187中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南 ?？?71157；2.廣東省第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州510317)

BV致病菌群分布狀況及BV快速檢測(cè)試劑盒診斷細(xì)菌性陰道病的價(jià)值

郝家明1，刁志宏2，黎永新2，楊志勇2，李明友2

（1.中國(guó)人民解放軍第187中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南 ?？?71157；2.廣東省第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州510317)

目的評(píng)價(jià)快速檢測(cè)試劑診斷細(xì)菌性陰道病(BV)的價(jià)值，并分析BV致病菌群的分布狀況。方法使用BV快速檢測(cè)試劑檢測(cè)108例疑似BV患者的陰道分泌物，以Amsel為金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；同時(shí)進(jìn)行病原菌培養(yǎng)，分析其致病菌群情況。結(jié)果BV快速檢測(cè)試劑的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)期值和陰性預(yù)期值分別為97.3%、95.8%、92.3%和98.6%，與金標(biāo)準(zhǔn)符合率高達(dá)96.3%(Kappa系數(shù)=0.879，P=0.001)；細(xì)菌培養(yǎng)檢出病原菌77例，23例(21.3%)發(fā)生合并感染，以假絲酵母菌合并其他病原菌體感染為多見(jiàn)。結(jié)論BV快速檢測(cè)試劑診斷BV具有較高的特異性和敏感性，但BV致病菌群呈現(xiàn)出多樣性，不能忽視需氧性菌所致BV的存在。

細(xì)菌性陰道病；陰道加德納菌；陰道菌群

細(xì)菌性陰道病(Bacterial vaginosis，BV)是目前臨床上婦科最常見(jiàn)的感染性疾病之一[1]，其典型病理特征為陰道微生態(tài)失調(diào)，正常菌群比例改變[2-4]，表現(xiàn)為產(chǎn)H2O2乳酸桿菌數(shù)量減少，而類桿菌、支原體等厭氧菌、加德納菌等數(shù)量過(guò)度增加。如不及時(shí)治療，易于發(fā)生泌尿系感染、不良妊娠及盆腔炎等婦科疾病，故而其早期明確診斷至關(guān)重要。唾液酸酶由陰道菌群中的厭氧菌產(chǎn)生，最新研究證實(shí)其活性升高可反映陰道內(nèi)厭氧菌過(guò)度生長(zhǎng)，與BV的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。BV快速檢測(cè)試劑對(duì)活性唾液酸酶具有高度特異性，本研究以Amsel法為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)其診斷效能進(jìn)行評(píng)估，同時(shí)進(jìn)行陰道菌群病原菌培養(yǎng)，分析BV的致病菌群特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1～6月期間在廣東省第二人民醫(yī)院婦科門診接受診治疑似為BV的女性患者108例，患者年齡20～55歲，平均(33.6±4.2)歲。所有受檢者均未使用過(guò)灌注療法或陰道乳劑；排除72 h內(nèi)有性生活史者，妊娠期和行經(jīng)期女性。

1.2 檢測(cè)試劑和儀器 BV細(xì)菌性陰道病快速檢測(cè)試劑由廣東珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：YZB/粵0395-2008)。血液瓊脂培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、雙糖鐵瓊脂等常規(guī)試劑購(gòu)自鄭州安圖綠科生物工程有限公司。儀器采用美國(guó)BD公司的Phoenix100細(xì)菌鑒定系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1 樣本收集 外陰消毒后，用兩支棉拭子(無(wú)菌生理鹽水浸濕)于陰道深部或后穹隆取材并立即送檢。一支行BV細(xì)菌性陰道病快速檢測(cè)、Amsel法檢測(cè)及陰道分泌物常規(guī)檢查；另一支行細(xì)菌培養(yǎng)和菌種分析。樣本陰道分泌物常規(guī)檢查按衛(wèi)生部《臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第三版進(jìn)行。BV細(xì)菌性陰道病快速檢測(cè)按試劑使用說(shuō)明書操作，以陰陽(yáng)性判定結(jié)果。

1.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)方法 分別將檢材接種于血瓊脂、巧克力及麥康凱平板，35℃孵育24～48 h后，可疑菌落涂片，行革蘭染色、選擇性氧化酶試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)后選擇合適的ATB鑒定板條或使用美國(guó)BD公司的Phoenix100細(xì)菌鑒定系統(tǒng)行細(xì)菌鑒定。

1.3.3 Amsel法 以Amsel法作為確診BV的金標(biāo)準(zhǔn)：(1)陰道分泌物稀薄奶樣；(2)陰道pH＞4.5；(3)胺試驗(yàn)陽(yáng)性；(4)線索細(xì)胞陽(yáng)性；以上4項(xiàng)有3項(xiàng)陽(yáng)性即為BV陽(yáng)性。

1.3.4 陰道加德納菌的鑒定 按文獻(xiàn)[5]將標(biāo)本劃種于含有50ml/L人血瓊脂平板上，在37℃、50ml/L CO2環(huán)境中生長(zhǎng)良好，形成針尖大小、圓形、光滑、半透明、形似露滴狀的菌落，有狹窄的β溶血環(huán)，48 h后菌落直徑增大。挑取典型菌落作氧化酶、觸酶試驗(yàn)陰性，進(jìn)一步作葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等發(fā)酵試驗(yàn)產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵肌醇和棉子糖，能水解馬尿酸和淀粉，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分率表示，兩種方法之間的比較采用Kappa一致性檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法的BV檢測(cè)結(jié)果比較108例樣本中，Amsel法檢測(cè)陽(yáng)性39例，陽(yáng)性率為36.1%，BV細(xì)菌快速檢測(cè)試劑檢測(cè)陽(yáng)性37例，陽(yáng)性率為34.3%。以Amsel法為金標(biāo)準(zhǔn)，BV細(xì)菌快速檢測(cè)試劑特異性為95.8%(68/71)，敏感性為97.3%(36/37)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為92.3%(36/39)，陰性預(yù)測(cè)值為98.6%(68/69)，兩種方法符合率為96.3%[(36+68)/108]，Kappa=0.879，P=0.001，P=0.001，見(jiàn)表1。

表1108例患者的兩種方法BV檢測(cè)結(jié)果比較（例）

2.2 病原菌培養(yǎng)結(jié)果108例標(biāo)本中，檢出病原菌77例(71.3%)，其中，假絲酵母菌31例(28.7%)，大腸埃希氏菌20例(18.5%)，陰道加德納菌16例(14.8%)，金黃色葡萄球菌8例(7.4%)，變形桿菌7例(6.5%)，枸緣酸桿菌和糞腸球菌各4例(3.7%)，克雷伯氏菌和淋病奈瑟氏菌各3例(2.8%)，不動(dòng)桿菌1例(0.9%)。此外，經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)23例(21.3%)發(fā)生合并感染，并以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見(jiàn)，其中合并陰道毛滴蟲(6例)，大腸埃希桿菌(3例)，加德納菌(3例)、克雷伯氏菌(1例)；其次加德納菌合并陰道毛滴蟲(4例)、大腸埃希氏菌(1例)；少數(shù)合并金黃色葡萄球菌、糞腸球菌或淋病奈氏菌感染。

3 討論

Amsel法是目前診斷BV唯一公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”[6-7]，但此法操作繁瑣、取材較多、難度大、費(fèi)用高，最大的缺陷是結(jié)果以主觀判斷為主[8]。正常情況下婦女陰道內(nèi)存在二十多種微生物，其相互制約、相互協(xié)調(diào)，共同維持陰道微生態(tài)相對(duì)平衡。當(dāng)某種或某幾種微生物異常增多時(shí)，產(chǎn)H2O2的乳酸桿菌減少甚至消失，大量致病性厭氧菌取代了正常乳酸桿菌，粘附在上皮細(xì)胞表面使細(xì)胞溶解，是發(fā)生BV的主要原因。BV快速診斷試劑盒的檢測(cè)原理是試劑與病原菌產(chǎn)生的唾液酸酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成唾液酸，再加入顯色劑即可診斷BV。本研究對(duì)所有樣本同時(shí)采用Amsel法和BV快速檢驗(yàn)法進(jìn)行診斷，經(jīng)Kappa一致性檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)兩種方法的診斷結(jié)果具有良好的一致性。BV快速檢驗(yàn)法取得了較高敏感性和特異性，且具有操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、易于掌握、結(jié)果直觀、試劑可室溫保存等優(yōu)點(diǎn)。

本研究在樣本收集過(guò)程中，未能進(jìn)行沙眼衣原體、解脲支原體感染的檢驗(yàn)，而其他細(xì)菌、真菌、陰道毛滴蟲感染狀況與文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。但本研究還發(fā)現(xiàn)，BV患者存在相當(dāng)一部分混合感染，本組病例的混合感染率為21.3%，以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見(jiàn)，除合并其他細(xì)菌外，也可能合并陰道毛滴蟲、真菌等其他病原體。提示細(xì)菌性陰道病大多為非單一性感染，病原體可能顯示多態(tài)性。原因可能是BV病原菌可產(chǎn)生高水平磷脂酶A、唾液酸酶、黏蛋白酶等[9-10]，上述酶對(duì)陰道保護(hù)性黏液層具有較強(qiáng)的溶解作用，破壞了陰道的自我保護(hù)機(jī)制，增加了致病性病原體的附著力；而琥珀酸的產(chǎn)生又可抑制趨化效應(yīng)，阻止中性粒細(xì)胞向病原體聚集，使其他致病性病原體能夠逃避免疫攻擊，大量繁殖。二者共同作用，進(jìn)一步加重BV的感染和炎癥癥狀。本研究發(fā)現(xiàn)，部分金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)陽(yáng)性病例采用BV快速試劑盒為陰性，可能是因?yàn)锽V感染過(guò)程中尚未形成產(chǎn)生唾液酸酶的優(yōu)勢(shì)菌，唾液酸酶產(chǎn)量未達(dá)到檢測(cè)限；也有部分BV快速診斷試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的病例金標(biāo)準(zhǔn)診斷為陰性，可能是因?yàn)槠渌贁?shù)產(chǎn)唾液酸酶的細(xì)菌導(dǎo)致了假陽(yáng)性反應(yīng)。

值得注意的是，BV并非完全由厭氧菌引發(fā)，不能忽視需氧菌導(dǎo)致BV的可能，本組病例細(xì)菌培養(yǎng)也發(fā)現(xiàn)了金黃色葡萄球菌、糞腸球菌等需氧菌或兼性厭氧菌。Shamim等[11]研究需氧菌致病陰道炎(Aerobe vaginosis，AV)的致病細(xì)菌和抗生素的敏感性發(fā)現(xiàn)，該病的主要致病菌為金黃色葡萄球菌(40%)、E.coli(13%)，糞腸球菌(20%)和B族鏈球菌(6%)。這些細(xì)菌對(duì)青霉素類和磺胺類抗生素的敏感性均在90%以上，為AV的診斷和治療提供了詳實(shí)的微生物學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。因此Gilbert提出的AV的診斷，主要采用經(jīng)Tempera等[12]修改的綜合診斷方法，其中，AV評(píng)分為必備指標(biāo)，需綜合陰道分泌物中乳酸桿菌分級(jí)、白細(xì)胞數(shù)量以及中毒白細(xì)胞所占比例、背景菌落數(shù)等指標(biāo)。需氧性細(xì)菌所致陰道炎也不容忽視。

[1]朱園園,沈佐君,萬(wàn)士林,等.一種檢測(cè)細(xì)菌性陰道病方法的建立及臨床評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,24(5):350-354.

[2]王昌壁,唐 燕,許 慧,等.細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測(cè)定試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道病的診斷價(jià)值[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(16):2740-2742.

[3]張 婷,許 飛,臧 嘉,等.細(xì)菌性陰道病快速診斷法的應(yīng)用觀察[J].山東醫(yī)藥,2010,50(26):51-52.

[4]胡正強(qiáng),岳新愛(ài),彭 英,等.兩種唾液酸酶試劑診斷細(xì)菌性陰道病的性能評(píng)價(jià)[J].中國(guó)婦幼保健,2014,29(36):6074-6076.

[5]劉 銳,沈佐君,萬(wàn)士林,等.檢測(cè)細(xì)菌性陰道病干化學(xué)法的建立及評(píng)價(jià)[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,47(6):738-740.

[6]史從寧,王雅杰,趙運(yùn)轉(zhuǎn),等.基因芯片技術(shù)在陰道分泌物常規(guī)檢測(cè)中的應(yīng)用研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2014,17(15):1776-1777,1783.

[7]陳艷玲.快速檢測(cè)法在細(xì)菌性陰道病診療中的價(jià)值評(píng)價(jià)[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,10(13):1033,1036.

[8]王婷玉.細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測(cè)定試劑盒對(duì)非特異細(xì)菌性陰道炎的診斷價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(6):648-649.

[9]范亞娜,屠秀菊.BV聯(lián)合測(cè)定試劑盒檢測(cè)在細(xì)菌性陰道病診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)婦幼保健,2012,27(1):159.

[10]Smayevsky J,Canigiac LF,Lanza A,et al.Vaginal micron flora associated with bacterial vaginosis in nonpregnant women:reliability of sialidase detection[J].Infect Obstet Gynecol,2001,9(1):17-22.

[11]Shamim M,Mumtaz A,Irum A,et al.Aerobic vaginal pathogens and their sensitivity pattern[J].Ayub Med Coll Abbottabad,2008,20(1):113-117.

[12]Tempera G,Bonfiglio G,Cammarata E,et al.Microbiological clincal characteristics and validation of topical therapy with kannmycin in aerobic vaginosis:a Pilot study[J].Int J Antimicrob Agents,2004,24(1):85-88.

R711.73

B

1003—6350（2015）22—3412—02

2014-11-28)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1236

郝家明。E-mail：haojm@sina.com