李美艷 聶尚燕 呼君瑜 陳輝 馬利輝 焦茹 趙紅 韓新彥

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，目前已經(jīng)出版的最新的女性生殖器官腫瘤WHO分類為2003版［1］，其將子宮內(nèi)膜癌分為Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型即雌激素依賴型，占子宮內(nèi)膜癌的大多數(shù);Ⅱ型為非雌激素依賴型。研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌的死亡率和癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator，uPA)是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜系統(tǒng)合成的一種絲氨酸蛋白水解酶，它可降解細(xì)胞外基質(zhì)，從而有利于腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移細(xì)胞癌基因的激活。uPA和ER在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌中是否存在相關(guān)性，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文通過(guò)檢測(cè)Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌中uPA和ER的表達(dá)及其相互關(guān)系，探討二者對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2004年6月至2014年6月在邯鄲市中心醫(yī)院住院治療的患者130例，年齡30～75歲，平均年齡49.03歲，中位年齡49.99歲，95%CI(44.50，54.20)歲。其中Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌50例(子宮內(nèi)膜癌組)，不典型增生子宮內(nèi)膜50例(癌前病變組)，正常增殖期子宮內(nèi)膜30例(正常組)，正常增殖期子宮內(nèi)膜及不典型增生的子宮內(nèi)膜均來(lái)自于診刮及手術(shù)切除子宮的內(nèi)膜標(biāo)本。子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病理分期按2009年FIGO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例，高分化(G1)22例，中分化(G2)18例，低分化(G3)10例，肌層浸潤(rùn)深度＜1/2肌層31例，≥1/2肌層19例，伴有淋巴轉(zhuǎn)移10例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移40例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或激素治療，無(wú)手術(shù)禁忌，且臨床資料完整。由2位病理醫(yī)生復(fù)習(xí)病理切片，并選取包含腫瘤組織的石蠟標(biāo)本備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組織化學(xué)SP法，染色步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作。

1.3 試劑 uPA一抗為鼠抗人單克隆抗體(即用型)(福州邁新生物技術(shù)有限公司)，ER為兔抗人單克隆抗體(北京中杉金橋公司)，SP廣譜超敏試劑盒、PBS緩沖液、DAB酶底物顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) ER定于細(xì)胞核，陽(yáng)性呈棕黃色或棕褐色顆粒。uPA陽(yáng)性反應(yīng)主要定位于細(xì)胞質(zhì)。先按染色強(qiáng)度打分:0分為無(wú)色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，鏡下選擇10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算其平均陽(yáng)性百分率，根據(jù)平均陽(yáng)性百分率分為:0分為無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，1分為陽(yáng)性細(xì)胞≤10%，2分為陽(yáng)性細(xì)胞11% ～50%，3分為陽(yáng)性細(xì)胞51% ～75%，4分為陽(yáng)性細(xì)胞＞75%;染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積≥3分為免疫反應(yīng)陽(yáng)性。見(jiàn)圖1、2。

圖1 uPA蛋白在低分化子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)(SP×200)

圖2 ER蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(SP×200)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)和Fisher精確概率法;兩者相關(guān)性用非參數(shù)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 uPA、ER蛋白在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 由uPA和ER蛋白的組織表達(dá)可見(jiàn)，在子宮內(nèi)膜癌中uPA蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常組和癌前病變組(P＜0.05)。而子宮內(nèi)膜癌中ER的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常組及癌前病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 uPA蛋白和ER蛋白在不同內(nèi)膜組織中的表達(dá)例

2.2 uPA、ER蛋白與子宮內(nèi)膜癌臨床參數(shù)的關(guān)系ER及uPA蛋白的表達(dá)均與手術(shù)病理分期，肌層浸潤(rùn)深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)(P＜0.05)，與年齡無(wú)關(guān)(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 uPA和ER蛋白與子宮內(nèi)膜癌臨床參數(shù)關(guān)系

2.3 uPA和ER蛋白在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的關(guān)系uPA蛋白和ER蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.293，P=0.039)。見(jiàn)表3。

表3 ER和uPA蛋白表達(dá)的關(guān)系 例

3 討論

惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多環(huán)節(jié)的過(guò)程，其中腫瘤細(xì)胞分泌的蛋白水解酶對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜水解作用是腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的分子基礎(chǔ)和先決條件［2，3］。uPA 是一種絲氨酸蛋白酶，由腫瘤細(xì)胞或其他細(xì)胞分泌，它與腫瘤細(xì)胞膜上特異性受體結(jié)合并激活呈雙鏈uPA，活性u(píng)PA能使纖溶酶原激活成纖溶酶，后者可降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移［4］。多個(gè)文獻(xiàn)報(bào)道，在腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，表達(dá)水平越高，患者的預(yù)后越差，復(fù)發(fā)和死亡率也越高，其表達(dá)水平可作為評(píng)價(jià)腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后情況的一個(gè)獨(dú)立指標(biāo)［5-7］。本研究結(jié)果顯示:uPA的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高(13.33%、40.00%、54.00%)，且其在癌癥組及非癌癥組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示其在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生中起到一定的作用。另在子宮內(nèi)膜癌組中，手術(shù)病理分期越晚，肌層浸潤(rùn)深度越深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越早，uPA的陽(yáng)性表達(dá)率越高，提示患者的預(yù)后越差，此結(jié)果在結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等多種腫瘤的研究中均證實(shí)［8］。

正常子宮內(nèi)膜的生長(zhǎng)和維持依靠卵巢周期性分泌雌激素的刺激，雌激素必須與細(xì)胞內(nèi)的雌激素受體(ER)結(jié)合才能發(fā)揮作用。在正常子宮內(nèi)膜中，ER、PR多呈陽(yáng)性表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞癌變，受體的產(chǎn)生和作用受損，當(dāng)其癌變到一定水平時(shí)，女性生殖系統(tǒng)組織的性激素受體就會(huì)減少甚至消失［9-11］。且多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)從正常子宮內(nèi)膜到子宮內(nèi)膜癌的變化過(guò)程中，隨著病理分級(jí)、臨床分期的增高，ER、PR含量逐漸減少，ER、PR的缺乏是子宮內(nèi)膜癌惡性程度增高的表現(xiàn)，與子宮內(nèi)膜癌的治療及預(yù)后密切相關(guān)［12］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:uPA蛋白的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌變過(guò)程中逐漸升高，而ER表達(dá)逐漸降低，兩者的表達(dá)均與FIGO分期，肌層浸潤(rùn)深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，且二者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，二者可能共同參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等過(guò)程。由此可推斷，臨床上對(duì)于同一患者，uPA表達(dá)越高，則ER表達(dá)越低，則手術(shù)病理分期越晚，肌層浸潤(rùn)深度越深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越早，患者預(yù)后越差，復(fù)發(fā)和死亡率也越高。

本研究結(jié)果顯示雌激素陰性者uPA的表達(dá)明顯升高，因此uPA可能為雌激素依賴型子宮內(nèi)膜癌的臨床診斷、監(jiān)測(cè)提供新的靶點(diǎn)，為早期控制子宮內(nèi)膜癌患者的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，對(duì)于術(shù)后高危患者的子宮內(nèi)膜癌的治療效果提供一條新路徑。

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