杜 鵑，吳忠紅

(1.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院 園林科技學院，新疆 昌吉 831100；2.新疆農(nóng)業(yè)科學院 農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工所，新疆 烏魯木齊 830091)

0 引言

雪菊[1-2]是生長在海拔3 200 m 以上的雪山之隅及喀喇昆侖山脈的野生蛇目菊，所以又稱昆侖雪菊、天山雪菊，其花期極短、產(chǎn)量極低，是目前新疆唯一與雪蓮齊名、具有獨特功效的稀有高寒植物.長期以來，昆侖雪菊被新疆和田當?shù)鼐用癞敾ú栾嬘?，可治療燥熱煩渴、高血壓、心慌、胃腸不適、食欲不振、痢疾及瘡癤腫毒.近年來，雪菊以其突出的降血壓、降血脂功能，成為茶界新寵，身價暴增，目前在新疆和田、喀什、達坂城開始產(chǎn)業(yè)化種植，已經(jīng)形成20/15 萬hm2種植面積.雪菊中主要的功能性成分是綠原酸、蘆丁，目前對于不同產(chǎn)地、不同海拔雪菊的單體活性成分尚無系統(tǒng)定性和定量的分析，關(guān)于兩者間活性成分的對比也未見報道.探明不同海拔的雪菊在功能成分上的差異，對于實現(xiàn)雪菊的分級加工，開發(fā)具有保健價值的食品添加劑或功能食品，提高雪菊資源的綜合利用率，有著重要的經(jīng)濟價值和社會價值.

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

3 個不同地點的昆侖雪菊樣品分別為新疆和田皮山縣克里陽高原雪菊（生長海拔3 200 m 左右）、新疆喀什高原雪菊（生長海拔2 000 m 左右）、新疆達坂城平原雪菊（生長海拔1 000 m 左右）.50 ℃烘干至恒質(zhì)量，粉碎，過60 目篩，儲藏備用.

綠原酸、蘆丁均由上海金穗生物有限公司提供.

乙醇、氯化鋁、醋酸、醋酸鈉均為分析純，磷酸為優(yōu)級純，甲醇、乙腈為色譜純.

Agilent Technologies 1 200 Seris 高效液相色譜儀：安捷倫科技有限公司；GDYQ-721S 型超聲波輔助快速提取儀：長春吉大小天鵝儀器設(shè)備有限公司；FA2004 電子天平：上海儀器天平廠；722 型可見分光光度計：上海光譜儀器分析有限公司；DHG-9053A 型電熱恒溫鼓風干燥箱：上海精宏實驗設(shè)備有限公司.

1.2 試驗方法

1.2.1 供試樣品溶液的制備

采用超聲波提取法[3-4].將3 種雪菊樣品粉碎，過60 目篩，分別稱取干燥的昆侖雪菊粉各1 g，加50%甲醇水溶液20 mL，超聲波提取30 min，冷卻后用50%甲醇水溶液定容至25 mL，經(jīng)0.22μm的濾膜過濾，濾液供HPLC 分析.

1.2.2 蘆丁標準曲線的繪制

精確稱取120 ℃干燥至恒質(zhì)量的蘆丁對照品105.8 mg，置于100 mL 容量瓶中，用少量甲醇加熱溶解，冷卻后甲醇定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1.058 mg/mL 的蘆丁標準品溶液.分別精確吸取上述蘆丁標準液0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL 于25 mL 的容量瓶中，加入1.5%AlCl38 mL 和醋酸-醋酸鈉的緩沖液(pH 5.5)4 mL，并用50%乙醇水溶液定容至刻度，搖勻，靜置0.5 h.以不加蘆丁為空白對照，在415 nm 波長下測定吸光度，以吸光度值為縱坐標，以顯色液中蘆丁的濃度為橫坐標，用最小二乘法進行回歸，線性方程為A=0.000 638+0.862 3C，R2=0.999 4.結(jié)果表明，蘆丁標準品溶液的質(zhì)量濃度在15.3～59.75 μg/mL 范圍內(nèi)與吸光度的線性關(guān)系良好.

1.2.3 總黃酮含量測定

采用AlCl3分光光度比色法[5-7].取1.0 mL 樣品溶液于10 mL 容量瓶，以不加樣品的溶液做空白，按1.2.2 的條件測定吸光度，參照標準曲線計算濃度，平行測定3 次，取平均值.

1.2.4 色譜條件[8-9]

色 譜 柱：CNW Athena -C18 柱250 mm ×4.6 mm，5 μm；流動相：甲醇-0.4%磷酸（A-B）梯度洗脫；梯度洗脫方法：0～30 min，A-B(30∶50～70∶50)線性 梯 度 洗 脫，30～40 min，A-B（30 ∶70)；柱 流 量：1.0 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長340 nm；進樣量10 μL；外標法.根據(jù)樣品的出峰保留時間比對標樣的保留時間，測定3 個雪菊樣品中綠原酸、蘆丁的含量.

1.2.5 混合對照品儲備液的制備

分別精確稱取綠原酸和蘆丁對照品適量，加甲醇制成混合對照品溶液，得綠原酸質(zhì)量濃度為20 μg/mL，蘆丁質(zhì)量濃度為40 μg/mL 的混合對照品溶液.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地雪菊總黃酮含量的比較

通過比較不同產(chǎn)地的雪菊樣品總黃酮含量可得，3 種不同產(chǎn)地雪菊總黃酮含量具有明顯差異，和田高原雪菊總黃酮含量最高為132.58 μg/mL，喀什高原雪菊為126.63 μg/mL，達坂城平原雪菊總黃酮含量最低僅有99.47 μg/mL.

2.2 不同產(chǎn)地雪菊的綠原酸和蘆丁HPLC 定性和定量分析

由圖1—圖4 可知，在本色譜條件下，不同產(chǎn)地雪菊中綠原酸和蘆丁的色譜峰與其他組分峰得到較好分離，不同產(chǎn)地海拔的雪菊之間的活性成分物質(zhì)圖譜相似，共有峰較多，說明幾種雪菊的活性成分組成基本一樣，差別主要是活性成分含量的多少[10-12].

圖1 綠原酸、蘆丁標準品圖譜Fig.1 Chlorogenic acid，rutin standard chromatagran

圖2 和田高原雪菊綠原酸、蘆丁圖譜Fig.2 Chlorogenic acid and rutin chromatogram of Hotan Coreopsis timctoria

圖3 喀什高原雪菊綠原酸、蘆丁圖譜Fig.3 Chlorogenic acid and rutin chomatogram ofKashgar Coreopsis timctoria

圖4 達坂城平原雪菊綠原酸、蘆丁圖譜Fig.4 Chlorogenic acid and rutin chromatogram of Dabancheng Corepsis timctoria

由表1 可知，不同產(chǎn)地、海拔的雪菊的綠原酸和蘆丁均有差異，其中綠原酸的含量隨海拔升高而降低，達坂城1 000 m 平原雪菊最高0.255%，而高海拔3 000 m 和田產(chǎn)雪菊最低只有0.175%；蘆丁含量的增加趨勢與綠原酸恰好相反，隨生長海拔升高呈增加趨勢，生長在海拔3 000 m 以上的和田雪菊蘆丁含量高達0.645%，而達坂城1 000 m雪菊只有0.475%.說明雪菊中綠原酸、蘆丁等功能性成分含量會受地域、栽培條件（土壤、地形等）、氣候條件（光照、降雨、溫度等）等多種因素的影響.

表1 不同產(chǎn)地的雪菊綠原酸和蘆丁含量比較Table 1 Comparison of chlorogenic acid and rutin content in Coreopsis timctoria of different areas

3 結(jié)論

在所測定的不同產(chǎn)地和海拔的3 種雪菊中，和田高原雪菊的總黃酮含量最高，高達132.58 μg/mL，喀什高原雪菊為126.63 μg/mL，達坂城平原雪菊的總黃酮含量最低，僅有99.47 μg/mL.雪菊中活性成分的組成非常相似，但是含量卻有明顯差異，其中綠原酸的含量隨海拔升高有降低趨勢，蘆丁含量隨海拔增加有升高趨勢.

［1］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會編著.中華本草：維吾爾藥卷［M］.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2005:992.

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