柳 青，劉麗鳳，孫昌友，李慧芳

高效液相色譜法測(cè)定奧扎格雷鈉脂質(zhì)體的包封率

柳 青1，劉麗鳳1，孫昌友1，李慧芳2

目的 建立高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)測(cè)定奧扎格雷鈉脂質(zhì)體包封率的檢測(cè)技術(shù)。方法 采用HPLC，以C18色譜柱分離，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為274 nm測(cè)定。結(jié)果 奧扎格雷在10～100 μg/ml濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，r=0.9997。日內(nèi)、日間RSD均小于0.5%，方法回收率為(100.2±0.42)%，樣品的平均包封率為(94.89±0.44)%。結(jié)論 該測(cè)定方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度高，靈敏度好，適合奧扎格雷鈉脂質(zhì)體的包封率測(cè)定。

奧扎格雷鈉；脂質(zhì)體；包封率；高效液相色譜

奧扎格雷鈉(ozagrel hydroehloride)是一種特異性血栓素合成酶抑制藥，能抑制血栓素A2(TXA2)的生成，具有抗血小板聚集和擴(kuò)張血管的作用[1]。制劑有注射用奧扎格雷鈉及奧扎格雷鈉注射液，主要用于急性血栓性腦梗死和腦梗死所伴隨的運(yùn)動(dòng)障礙，以及改善蛛網(wǎng)膜下腔出血手術(shù)后的腦血管痙攣收縮和并發(fā)腦缺血癥狀的治療[2]。在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，注射用奧扎格雷鈉及奧扎格雷鈉注射液和凍干粉針的含量測(cè)定均采用紫外分光光度法[3]。文獻(xiàn)[4-9]報(bào)道，奧扎格雷鈉注射劑和奧扎格雷片的測(cè)定方法均為反相HPLC。筆者建立了HPLC法測(cè)定奧扎格雷及其脂質(zhì)體包封率的檢測(cè)技術(shù)，它方便簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，能夠滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 1200系列高效液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)Agilent公司)，包括G1315B DAD檢測(cè)器，G1311A四元泵，G1329A標(biāo)準(zhǔn)型自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱。

1.2 試藥 奧扎格雷對(duì)照品(批號(hào)100557-201304，中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度>99.6%)；奧扎格雷鈉脂質(zhì)體(自制，批號(hào)為20110623，20 mg/ml)，乙腈、甲醇均為色譜純(山東禹王實(shí)業(yè)有限公司)，磷酸二氫鉀為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)；柱溫25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)274 nm；流速1 ml/min；進(jìn)樣量20 μl。理論板數(shù)按奧扎格雷峰計(jì)不低于2000，奧扎格雷峰與其他相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度符合要求(R≥1.5)，奧扎格雷峰的拖尾因子<1.5(圖1)。

圖1 奧扎格雷HPLC色譜圖

2.2 線(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取奧扎格雷對(duì)照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取上述貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μl注入色譜儀，記錄色譜圖。以?shī)W扎格雷的濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以?shī)W扎格雷的峰面積為縱坐標(biāo)，其回歸方程為：A=12.379C+6.3358，r=0.9998。結(jié)果表明，奧扎格雷在10～100 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)出良好的線(xiàn)性關(guān)系(圖2)。

2.3 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密配制濃度為50 μg/ml的供試品溶液6份，于0、2、4、8 h分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果表明，奧扎格雷峰面積RSD為0.3%，樣品溶液在8 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密配制濃度為50 μg/ml的供試品溶液3份，平行進(jìn)樣，每份溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積的RSD%為0.4%，方法的日內(nèi)精密度符合試驗(yàn)要求。精密配制濃度為50 μg/ml的供試品溶液3份，平行進(jìn)樣，同一時(shí)間連續(xù)進(jìn)樣6 d，測(cè)定峰面積的RSD%為0.3%，方法的日間精密度符合試驗(yàn)要求。

2.5 回收率試驗(yàn) 精密量取奧扎格雷鈉脂質(zhì)體適量，加入適量四氫呋喃破乳后，加入甲醇制成一定濃度的溶液，加入等量的奧扎格雷對(duì)照品，按上述色譜條件進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)，其平均回收率為100.2%，RSD為0.42%(n=6)，見(jiàn)表1。

圖2 奧扎格雷對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

表1 奧扎格雷鈉脂質(zhì)體檢測(cè)結(jié)果

2.6 奧扎格雷脂質(zhì)體包封率測(cè)定 精密量取奧扎格雷脂質(zhì)體0.5 ml，上預(yù)先處理好的Sephadex-G50凝膠柱，用pH6.5的磷酸鹽緩沖液以0.8 ml/min速度洗脫，收集藥物流出液70～80 ml，用甲醇定容至100 ml，取20 μl進(jìn)樣，計(jì)算溶液中奧扎格雷的含量(W游)；另取0.5 ml奧扎格雷脂質(zhì)體18份，分別加入適量的甲醇、乙醇、水-異丙醇-乙醚(2∶2∶1)、乙醚、乙酸乙酯、四氫呋喃破乳，各做3份，用甲醇定容至100 ml，取20 μl進(jìn)樣，計(jì)算脂質(zhì)體中藥物的總量(W總)。計(jì)算包封率，包封率(%)=(1-W游/W總)×100%。結(jié)果顯示：四氫呋喃效果最好，最終選用四氫呋喃作為破乳溶劑(表2)。

表2 奧扎格雷脂質(zhì)體包封率檢測(cè)結(jié)果 (n=3)

注：四氫呋喃與其他各組比較，P均<0.01

3 討 論

筆者通過(guò)實(shí)驗(yàn)建立了奧扎格雷脂質(zhì)體的包封率檢測(cè)方法。該方法線(xiàn)性范圍寬，精密度、準(zhǔn)確度、回收率都滿(mǎn)足要求，且操作簡(jiǎn)單、方法靈敏，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)奧扎格雷脂質(zhì)體中奧扎格雷的包封率，為質(zhì)量控制提供了可靠的方法。在色譜條件摸索過(guò)程中，對(duì)多種流動(dòng)相體系進(jìn)行篩選，確定以磷酸二氫鉀-甲醇-乙腈體系為最佳，通過(guò)調(diào)整有機(jī)相比例，使主峰與相鄰雜質(zhì)峰得到了分離，最終確定以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)為流動(dòng)相，滿(mǎn)足了實(shí)驗(yàn)需求。

對(duì)包封在脂質(zhì)體中藥物的測(cè)定，需加入一定量破膜溶劑以對(duì)磷脂雙分子層進(jìn)行破壞，讓藥物從載體中完全釋放出來(lái)，從而保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，最終選用四氫呋喃作為破乳溶劑，能夠達(dá)到很好的效果，是符合試驗(yàn)的破乳劑。

該方法與以往的檢測(cè)方法比較，操作簡(jiǎn)單，精密度、準(zhǔn)確度均能達(dá)到藥典要求，且容易實(shí)施，為后期含量測(cè)定和制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供有力的依據(jù)。

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(2014-11-15收稿 2015-03-06修回)

(責(zé)任編輯 武建虎)

Encapsulation efficiency of ozagrel hydroehloride liposome by HPLC

LIU Qing1，LIU Lifeng1, SUN Changyou1，and Li Huifang2.

1.Department of Pharmacy, Shanxi Provincial Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Taiyuan 030006, China；2.Department of Pharmacy, Shanxi Labor Medical School，Taiyuan 030012，China

Objective To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for the encapsulation efficiency of ozagrel hydrochloride liposome. Methods The HPLC was used for determination. A C18 column was used with the mobile phase of 0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution (pH=7.0) - acetonitrile - methanol (80∶15∶5) at the detection wavelength of 274 nm. Results The calibration curve was linear in the concentration range of 10-100 μg/ml,r=0.9997. The inter- and intra- day RSD was less than 0.5 %. The method recoveries were (100.2±0.42) %. The average entrapment efficiency of tartrate indoquinoline liposome was (94.89±0.44)%. Conclusions This method is simple，accurate and can be used to determine the encapsulation efficiency of ozagrel hydroehloride in ozagrel hydrochloride liposome.

ozagrel hydroehloride; liposome; encapsulation efficiency；HPLC

柳 青，本科學(xué)歷，副主任藥師，E-mail：594924223@qq.com

1.030006 太原，武警山西總隊(duì)醫(yī)院藥劑科；2.030012 太原，山西職工醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系

孫昌友，E-mail:scy196410@163.com

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