唐中生,吳春朋,謝高宇,陸 瑩,羅亞非

(貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

甘草多糖對(duì)臍血源單核細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞過程中NF-kBp65表達(dá)的影響*

唐中生,吳春朋,謝高宇,陸 瑩,羅亞非

(貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

目的 觀察臍血源單核細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞(DC)的過程中，核轉(zhuǎn)錄因子-kB p65(NF-kB p65)的表達(dá)以及GPS對(duì)單核細(xì)胞分化為DC的影響。方法 無菌條件下采集臍血，非連續(xù)密度梯度離心獲取臍血單核細(xì)胞；用含粒單細(xì)胞刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、脂多糖(LPS)和GPS的RPMI-1640培養(yǎng)液分別對(duì)細(xì)胞因子組、GPS組、聯(lián)合培養(yǎng)組的單核細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)；應(yīng)用倒置相差顯微鏡、瑞氏染色和CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定單核細(xì)胞和DC。動(dòng)態(tài)觀察單核細(xì)胞分化為DC過程中不同時(shí)間點(diǎn)的NF-kB p65的表達(dá)，并進(jìn)行圖像和SPSS軟件分析。結(jié)果 CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫細(xì)胞化學(xué)法證實(shí)所獲單核細(xì)胞和DC符合各自的形態(tài)和表型特征。在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)7d時(shí)，單核細(xì)胞分化成未成熟DC(imDC)；在含GM-CSF、IL-4和LPS的RPMI-1640培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)5d時(shí)，imDC分化為成熟DC(mDC)，兩者的細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65表達(dá)具有顯著性差異(P<0.05)。單純用只含GPS的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)單核細(xì)胞至7d時(shí)，可見其細(xì)胞核呈NF-kBp65陽性，已分化為imDC，繼續(xù)培養(yǎng)5d，則分化為DC。用含GM-CSF、IL-4和甘草多糖的RPMI-1640培養(yǎng)液聯(lián)合培養(yǎng)7d時(shí)，則該單核細(xì)胞分化為imDC；加入LPS后繼續(xù)培養(yǎng)5d，imDC的細(xì)胞核呈NF-kBp65強(qiáng)陽性，免疫細(xì)胞化學(xué)法證實(shí)imDC已經(jīng)分化為DC。聯(lián)合培養(yǎng)組細(xì)胞的表型表達(dá)均強(qiáng)于細(xì)胞因子組和GPS組(P<0.05)。結(jié)論 臍血來源單核細(xì)胞分化為imDC和mDC過程中，細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65表達(dá)逐漸增強(qiáng)。單純用GPS(400μg/mL)可以刺激單核細(xì)胞分化為imDC和mDC，效果遜于細(xì)胞因子GM-CSF、IL-4和LPS共同培養(yǎng)。

樹突狀細(xì)胞；細(xì)胞表面抗原；核轉(zhuǎn)錄因子-kB p65；甘草多糖；免疫細(xì)胞化學(xué)；臍血

樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)是哺乳動(dòng)物體內(nèi)功能最強(qiáng)也是唯一能激活幼稚T細(xì)胞的專職APC，它能攝取各類抗原，在機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫調(diào)控中均起著重要作用。DC基因表達(dá)的特殊變化是其成熟過程中的先決條件，但是，目前對(duì)于DC特定基因的調(diào)節(jié)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)還知之甚少。研究發(fā)現(xiàn)，核轉(zhuǎn)錄因子-KB(NF-kB)作為一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)著多種基因的表達(dá)，并參與免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等多種生物學(xué)進(jìn)程。NF-KB系統(tǒng)是由NF-KB家族及其抑制物(inhibition KB，IKB)家族共同組成的復(fù)雜體系，通常N-KB是以最常見的P50/RelA(P65)異源二聚體形式與抑制蛋白IKBs形成三聚體，以非活性形式存在于胞質(zhì)中，只有在受到某些活化因素的刺激時(shí)才被激活，從三聚體中解離出來并易位于胞核，與相應(yīng)的靶基因結(jié)合并調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。有研究表明，人外周血單核細(xì)胞分化為imDC和mDC的過程中，細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p50表達(dá)逐漸增強(qiáng)[1]，而外周血單核細(xì)胞分化為imDC和mDC的過程中，細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65的表達(dá)未見報(bào)道。前期研究結(jié)果初步表明[2]，甘草多糖(Glyeyrrhiza Polysaeeharide，GPS)可促進(jìn)臍血單個(gè)核細(xì)胞來源DC的分化和成熟，增強(qiáng)DC的免疫學(xué)活性，尤以400μg/mL最佳。本實(shí)驗(yàn)中，我們擬探討在甘草多糖(GPS)的作用下，臍血來源單核細(xì)胞分化為DC過程中，細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65蛋白的表達(dá)變化以及GPS對(duì)單核細(xì)胞分化過程的影響，進(jìn)一步探討DC的成熟、分化及其功能之間的關(guān)系。

材料和方法

1.1 材料和試劑

1.1.1 臍血 新鮮無菌臍血(肝素抗凝)80mL，由學(xué)院一附院產(chǎn)科提供。

1.1.2 藥物 甘草多糖(純度>90%)購自美國泛華醫(yī)藥公司北京代表處。真空干燥的甘草多糖用含雙抗、不含血清的RPMI-1640培養(yǎng)液于每次實(shí)驗(yàn)前配制成所需濃度的工作液，經(jīng)0.45μm濾膜過濾除菌。

1.1.3 試劑 RPMI-1640培養(yǎng)液(GIBCO公司)，淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll，D=1.077)，上海試劑二廠;胎牛血清(FCS)，(HyClone公司);粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、脂多糖(LPS)，均為英國Protechec公司產(chǎn)品;即用型二步法非生物素檢測(cè)試劑盒(PV9000)、DAB顯色試劑盒、磷酸鹽緩沖液(PBS，0.01mol/LpH7.2～7.4)均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.1.4 儀器 超凈工作臺(tái)，蘇州安泰空氣技術(shù)公司；CO2培養(yǎng)箱，美國Forma公司；電控恒溫水浴箱，北京長安科學(xué)儀器廠；LD4-2A型離心機(jī)，上海醫(yī)用分析儀器廠；電子天平，德國OHAUS公司；倒置相差顯微鏡，日本NIKON公司；50 cm2，150 cm2塑料培養(yǎng)瓶，美國GIBCO公司產(chǎn)品；病理圖像分析系統(tǒng)，Motic Med CMIAS；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(550型)BIO-RAD。

1.2 方法

1.2.1 單核細(xì)胞的獲得 無菌新鮮臍血60 mL，加入1倍體積的RPMI-1640培養(yǎng)液，稀釋，混勻。取50 mL試管，分別加入15 mL淋巴細(xì)胞分離液，將30 mL的稀釋血小心鋪于淋巴細(xì)胞分離液上，20℃、2000 rpm，離心20 min。小心吸取離心管分層液界面上的白膜層，獲取單個(gè)核細(xì)胞，移入錐形離心管。重復(fù)2次。用含血清的1640將50 mL離心管中的細(xì)胞懸起來，混勻。平均滴加到兩個(gè)75 cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，收集90 min和3 h的貼壁細(xì)胞，即為單核細(xì)胞。

1.2.2 單核細(xì)胞的培養(yǎng)及分組 將獲取的單核細(xì)胞調(diào)整濃度為5×106/mL，分為3組，細(xì)胞因子組：將5×106/mL的單核細(xì)胞置于含有10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)，加入GM-CSF(8×105IU/L)和IL-4(106IU/L)各40 μL，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7d后，在RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)加入LPS(50μg/mL)40 μL，繼續(xù)培養(yǎng)5d。GPS組：將5×106/mL的單核細(xì)胞置于內(nèi)含等體積10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液配制的GPS液(400 μg/mL)內(nèi)培養(yǎng)，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12 d，第7天時(shí)半量換入GPS液。聯(lián)合培養(yǎng)組：將單核細(xì)胞加入與細(xì)胞因子組相同濃度的培養(yǎng)液內(nèi)，先加入GM-CSF、IL-4各40 μL，后加入GPS液(400 μg/mL)，第7天時(shí)加入LPS(50 μg/mL)40 μL，繼續(xù)培養(yǎng)5 d。

1.3 細(xì)胞離心涂片 以上各組均在第7d、第12d用無血清RPMI-1640培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，計(jì)數(shù)并進(jìn)行細(xì)胞離心涂片，進(jìn)行瑞氏染色和免疫細(xì)胞化學(xué)染色。

1.4 倒置相差顯微鏡觀察 倒置相差顯微鏡下觀察不同分組，處于細(xì)胞培養(yǎng)液中正常生活狀態(tài)下的單核細(xì)胞、imDC以及mDC的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

5瑞氏染色 瑞氏染液滴染5min后，加入等量的蒸餾水，洗耳球吹打混勻，繼續(xù)染5min。蒸餾水沖洗，吹干，95%酒精涮洗1-3秒，晾干，入二甲苯中脫蠟，封片觀察。

1.6 免疫細(xì)胞化學(xué) 按試劑盒說明書進(jìn)行。陰性對(duì)照采用PBS代替一抗。

1.7 圖像和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用病理分析系統(tǒng)對(duì)各培養(yǎng)組的細(xì)胞在7d、12d進(jìn)行細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65平均吸光度(AA)測(cè)定，并采用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)其進(jìn)行分析，顯著性差異的界值為P<0.05。

2 結(jié)果

2.1 倒置相差顯微鏡觀察 倒置相差顯微鏡下觀察純化獲得的人臍血單核細(xì)胞，可見細(xì)胞呈散在貼壁生長，細(xì)胞體呈圓形，表面光滑；細(xì)胞核呈圓形，多位于中央。倒置相差顯微鏡下觀察加入GM-CSF、IL-4的細(xì)胞因子組體外培養(yǎng)7d的單核細(xì)胞，可見細(xì)胞呈貼壁生長，細(xì)胞體積增大，大小不等，形態(tài)不規(guī)則。加入GM-CSF、IL-4和LPS繼續(xù)培養(yǎng)5d，細(xì)胞多呈懸浮生長，體積較大，大小不等，細(xì)長的突起較多，有的細(xì)胞貼壁生長，呈桿狀、梭狀、多角形等多種形態(tài)；細(xì)胞核大而不規(guī)則，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見空泡和顆粒狀物?？梢娖湟逊只癁槲闯墒鞓覦C，呈現(xiàn)毛刺樣突起，粗細(xì)不等。甘草多糖組的單核細(xì)胞培養(yǎng)7d后，細(xì)胞體積增大，大小不等，形態(tài)不規(guī)則(圓形、橢圓形或長梭形)，表面呈現(xiàn)出毛刺樣突起，粗細(xì)不等，有的突起末端鈍圓，有的細(xì)長，可在培養(yǎng)液中擺動(dòng)和收縮；細(xì)胞核呈圓形，位于中央，大而不規(guī)則；(見圖1)培養(yǎng)12d時(shí)，細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則形，出現(xiàn)密集的毛刺樣突起，呈現(xiàn)典型的DC形態(tài)。(見圖2)聯(lián)合細(xì)胞組：可見培養(yǎng)7d的細(xì)胞數(shù)量明顯增多，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，并出現(xiàn)長短不一、毛刺樣和樹枝樣的細(xì)胞突起；繼續(xù)培養(yǎng)至12d，細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則形，毛刺樣突起密集，已經(jīng)分化為成熟DC。

圖1 甘草多糖組，體外培養(yǎng)7d，人imDC倒置顯微鏡觀察，可見細(xì)胞表面呈現(xiàn)出毛刺樣突起，粗細(xì)不等。

圖2 甘草多糖組，體外培養(yǎng)12d，人mDC倒置顯微鏡觀察，可見細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則形，出現(xiàn)密集的毛刺樣突起。

圖3 甘草多糖組，體外培養(yǎng)7d，人imDC瑞氏染色，光鏡觀察，細(xì)胞數(shù)量多，呈圓形，細(xì)胞核呈腎形或馬蹄形，現(xiàn)細(xì)胞突起。

圖4 甘草多糖組，體外培養(yǎng)12d，人mDC瑞氏染色，光鏡觀察，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞突起明顯。

2.2 瑞氏染色 純化獲得的臍血單核細(xì)胞體積較大，大多呈圓形 ，未見細(xì)胞突起；細(xì)胞核呈現(xiàn)腎形或馬蹄形，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，染為灰藍(lán)色。細(xì)胞因子組培養(yǎng)7 d的imDC，體積增大，形態(tài)不規(guī)則，出現(xiàn)長短不一的突起；細(xì)胞核多為圓形，有凹陷；細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)紫色，內(nèi)含有較多的脂滴；培養(yǎng)至第12 d，imDC分化為mDC,其細(xì)胞體積繼續(xù)增大，細(xì)胞突起增多；細(xì)胞核偏位；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有空泡。GPS組培養(yǎng)7 d的imDC，體積增大，形態(tài)不規(guī)則，出現(xiàn)長短不一的突起；細(xì)胞核多為圓形，偏位，有凹陷；細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)紫色，內(nèi)含有較多脂滴(見圖3)；培養(yǎng)至第12 d，imDC分化為mDC,其細(xì)胞體積繼續(xù)增大，細(xì)胞突起增多；細(xì)胞核偏位；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有空泡(見圖4)。聯(lián)合培養(yǎng)組體外培養(yǎng)第7d時(shí)，imDC的體積比細(xì)胞因子組同時(shí)期增大，細(xì)胞數(shù)目也增多；細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞突起較多，有的呈面紗樣突起；細(xì)胞核體積也增大；細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)紫色，不含脂滴。體外培養(yǎng)第12 d時(shí)，mDC的體積更加增大，形態(tài)極不規(guī)則，呈橢圓形、多邊形，細(xì)胞表面有大量毛刺樣突起；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)未見空泡。

2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果 純化獲得的臍血單核細(xì)胞表達(dá)表面分化抗原CD86。細(xì)胞因子組培養(yǎng)7d后，imDC的細(xì)胞核呈NF-kB p65弱陽性，但細(xì)胞質(zhì)呈較強(qiáng)陽性反應(yīng)，顯棕黃色；imDC的細(xì)胞質(zhì)呈HLA-DR陽性表達(dá)。加入TNF-α繼續(xù)培養(yǎng)5d，imDC分化為mDC，其細(xì)胞核呈NF-kB p65強(qiáng)陽性反應(yīng)，著色深，細(xì)胞質(zhì)呈弱陽性；mDC的細(xì)胞質(zhì)呈HLA-DR陽性反應(yīng)增強(qiáng)，細(xì)胞膜上也出現(xiàn)陽性反應(yīng)，細(xì)胞核呈陰性。GPS組：體外培養(yǎng)7d后，單核細(xì)胞的細(xì)胞核也呈NF-kB p65弱陽性，染為棕黃色，免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果顯示其也分化為imDC。繼續(xù)換液培養(yǎng)5d，imDC分化為mDC，其細(xì)胞核呈NF-kB p65強(qiáng)陽性反應(yīng)，著色深，細(xì)胞質(zhì)呈弱陽性；聯(lián)合培養(yǎng)組：體外培養(yǎng)7d，單核細(xì)胞即分化為imDC，其細(xì)胞核呈NF-kB p65弱陽性，染色淺；加入TNF-α后繼續(xù)培養(yǎng)5d，imDC即分化為mDC，可見其細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)明顯的NF-kB p65強(qiáng)陽性反應(yīng)，與細(xì)胞因子組相比較，染色深；且mDC的HLA-DR表達(dá)也增強(qiáng)。

2.4 圖像及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果 細(xì)胞因子組、GPS組、聯(lián)合培養(yǎng)組3組中，GPS組可使單核細(xì)胞分化為imDC和mDC，而且第7 d和第12 d的NF-kB p65表達(dá)存在差異。3組組內(nèi)比較，NF-kB p65表達(dá)隨著DC的不斷分化成熟而有所增加(P<0.05)；組間比較，可見聯(lián)合培養(yǎng)組第12d mDC的NF-kB p65表達(dá)強(qiáng)于細(xì)胞因子組和GPS組(P<0.05)，結(jié)果如圖5所示。

圖5 各實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65平均吸光度值(AA)

細(xì)胞因子組：體外培養(yǎng)7d的imDC與12d的mDC細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65表達(dá)比較，兩者具有顯著性差異，P<0.05；GPS組：體外培養(yǎng)7d的imDC與12d的mDC細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65表達(dá)比較，兩者具有顯著性差異，P<0.05；聯(lián)合培養(yǎng)組：體外培養(yǎng)7d的imDC與12d的mDC核內(nèi)NF-kB p65表達(dá)比較，兩者具有顯著性差異，P<0.05；聯(lián)合培養(yǎng)組、GPS組：體外培養(yǎng)12d的mDC核內(nèi)NF-kB p65表達(dá)，兩者比較具有顯著性差異，P<0.05。

3 討論

研究結(jié)果表明[3]，核轉(zhuǎn)錄因子-kB(nuclear factor-kappa B,NF-kB)是從成熟B細(xì)胞中提取的，并能與免疫球蛋白K鏈基因增強(qiáng)子相結(jié)合的核因子。在哺乳動(dòng)物中，NF-kB家族有p50/p105(NF-kB1)、p65(Re1A)、C-re1、p52/p-100(NF-kB2)和Re1B 5個(gè)成員。NF-kB p65作為NF-kB家族中的重要成員，在細(xì)胞生長調(diào)控中發(fā)揮著重要影響。DC是機(jī)體內(nèi)重要的抗原呈遞細(xì)胞，在其生長過程中，細(xì)胞的形態(tài)和免疫功能發(fā)生著重要的變化，在從抗原捕獲到抗原呈遞過程中，其表面分子抗原發(fā)生著很大的變化，這是因?yàn)橄嚓P(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。筆者探討了NF-kB p65對(duì)DC生長和分化中的作用，以及加入GPS后對(duì)NF-kB p65和其它表面分子抗原在DC表達(dá)的影響。

單核細(xì)胞在含GM-CSF、IL-4的培養(yǎng)液內(nèi)培養(yǎng)7d，再加入LPS繼續(xù)培養(yǎng)5d，則分化為imDC和mDC。在分化過程中，其細(xì)胞核內(nèi)的NF-kB p65含量不斷增加，同時(shí)細(xì)胞表面分化抗原也發(fā)生了變化，如CD86、HLA-DR和S-100的表達(dá)均增加，結(jié)果提示，NF-kB p65在其分化成熟過程中發(fā)揮著重要的作用，并且由此可以根據(jù)蛋白變化的這個(gè)特點(diǎn)來推斷DC在體內(nèi)處于成熟分化的哪個(gè)階段，同時(shí)也可以作為一種有用的表面標(biāo)志。在單核細(xì)胞培養(yǎng)過程中，加入400μg/mL GPS后，培養(yǎng)至7d時(shí)，其細(xì)胞核內(nèi)的NF-kB p65表達(dá)增加，且單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為imDC，培養(yǎng)至12d時(shí)，轉(zhuǎn)化為mDC。聯(lián)合培養(yǎng)組的單核細(xì)胞在培養(yǎng)7d時(shí)，已分化為imDC，與GPS組比較，細(xì)胞狀態(tài)更為良好，數(shù)目增多；若加入LPS繼續(xù)培養(yǎng)5d時(shí)，細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上完整，細(xì)胞突起增多，且細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65表達(dá)增加。

作為專職的抗原呈遞細(xì)胞，國、內(nèi)外已經(jīng)逐漸重視DC疫苗在抗腫瘤治療領(lǐng)域的應(yīng)用，成為當(dāng)今腫瘤免疫治療的熱點(diǎn)[4-6]。如何提高其呈遞抗原的效率以及提高其對(duì)腫瘤的殺傷率有著很重要的意義。本實(shí)驗(yàn)觀察了NF-kB p65在DC成熟過程中的變化，再結(jié)合NF-kB家族中其它成員的表達(dá)變化可以作為判斷體內(nèi)DC處于何種發(fā)育分化階段，從而可以加入其它一些因素來促進(jìn)DC的成熟，增強(qiáng)人體的免疫力和DC抗腫瘤的能力。

甘草為常用中藥，性味甘平，歸心、肺、脾、胃經(jīng)，具益氣補(bǔ)中，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和藥性之功效。甘草的有效成分主要是甘草甜素、甘草次酸、甘草苷元和甘草多糖。甘草多糖(GPS)主要由鼠李糖、葡聚糖、阿拉伯糖和半乳糖組成。藥理研究發(fā)現(xiàn)[7]，GPS具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抗腫瘤、抗病毒、防治骨關(guān)節(jié)炎、抗氧化等作用，而且無細(xì)胞毒作用。GPS能明顯提高小鼠的生長性能和T細(xì)胞的E玫瑰花環(huán)數(shù)量[8]，能誘導(dǎo)激活淋巴細(xì)胞，提高其能量代謝水平和IL-2的分泌，具有免疫調(diào)節(jié)作用[9]，對(duì)小鼠機(jī)體免疫有增強(qiáng)作用[10]。GPS也可能通過降低荷瘤小鼠Treg細(xì)胞的比例及提高脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率而發(fā)揮抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用[11]，GPS可有效抑制大鼠肝腫瘤的生長[12]。孫氏等研究表明：GPS能夠促進(jìn)人外周血γδT細(xì)胞增殖、分泌細(xì)胞因子及殺傷腫瘤細(xì)胞[13]。但GPS對(duì)DC的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路尚未見報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中，GPS對(duì)DC的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，細(xì)胞的生長、分化以及功能有著一定的影響。GPS可以替代細(xì)胞因子的作用使單核細(xì)胞分化成為DC，且細(xì)胞形態(tài)更為明顯，細(xì)胞突起增多，細(xì)胞表面分子抗原表達(dá)增多，但遜于細(xì)胞因子與甘草多糖聯(lián)合培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GPS可以替代各種因子發(fā)揮促進(jìn)臍血來源單核細(xì)胞分化為DC的作用。

[1]張麗，唐軍民，唐巖，等.人外周血單核細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞過程中核轉(zhuǎn)錄因子-KBp50的表達(dá)及柴胡皂苷α的影響[J].解剖學(xué)報(bào)，2007，38(6)：681-686.

[2]唐中生，羅亞非，謝高宇，等.不同濃度甘草多糖促進(jìn)臍血源樹突狀細(xì)胞分化與成熟的研究[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2013，33(6)：488-492.

[3]Sen R，Baltimore D.Multiple nuclear factors interact and the immunoglobulin enhancer sequences[J].Cell,1986,46(5)：705-716.

[4]Banchereau J,Steinlnan R M.Dendritic cells and the control of immunity[J].Nature,1998,392(6673)：245-252.

[5]Matthias S,Joche S.Dendritic cell vaccination：New hope for the treatment of mestastasized endocrine malignancies[J].Trends In Endocrinology And Metabolism,2003,14：156-162.

[6]宮安靜，李新鋼，孟慶海，等.腫瘤干細(xì)胞致敏的樹突狀細(xì)胞對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞免疫的影響[J].中華神經(jīng)外科雜志，2011，27(2)：136-139.

[7]劉三俠，吳俊偉，林永樂.甘草多糖藥理作用研究進(jìn)展[J].中國獸藥雜志，2013，47(1)：64-67.

[8]王麗榮，李杰，董永軍，等.甘草多糖對(duì)小鼠生長性能及細(xì)胞免疫能力的影響[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2007，16(1)：220-222.

[9]程安瑋，金征宇，萬發(fā)春.甘草多糖對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的免疫作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35(6)：1660-1661.

[10]李發(fā)勝，趙玨，池曉峰，等.甘草多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16(6)：35-36.

[11]李曉冰，何小鵑，劉彪，等.甘草多糖對(duì)H22荷瘤小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，8(4)：363-367.

[12]張文興，石軍飛，程立新.甘草多糖對(duì)抗大鼠肝腫瘤活性的研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35(3)：208-211.

[13]孫舒玉，何小鵑，柴旺，等.甘草多糖對(duì)人外周血γδT細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(6)：242-245.

貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究課題(NO：QZYY2010-04)，貴州省科技廳和貴陽中醫(yī)學(xué)院聯(lián)合基金課題(NO：黔科合中藥字〔2011〕LKZ7036號(hào))，貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目(NO：黔科合J字〔2012〕2078號(hào))。

唐中生(1977.08-)，男，貴州遵義人，碩士，副教授，主要從事樹突狀細(xì)胞生物學(xué)的研究。Tel：13885085968，E-mail：tzs351213@126.com。

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