王全洪

遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科(遵義563099)

·方藥縱橫·

不同炮制方法對黔產(chǎn)淫羊藿中總黃酮及淫羊藿苷的影響*

王全洪

遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科(遵義563099)

目的：探討炮制方法對黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品中總黃酮及淫羊藿苷的影響。方法：分別采用紫外-可見分光光度及高效液相色譜法對黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品中的總黃酮及淫羊藿苷的含量進行測定。結(jié)果：淫羊藿總黃酮呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系；淫羊藿苷在0.00105～0.0525mg/mL的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，加樣回收率為99.91%，RSD為2.14%。結(jié)論：黔產(chǎn)淫羊藿經(jīng)炮制加工后，總黃酮及淫羊藿苷的含量總體上未出現(xiàn)較大的變化，僅酒炙淫羊藿中總黃酮及淫羊藿苷的含量略有上升。

淫羊藿具備風(fēng)濕的祛除、腎臟陽氣補足、筋骨的強壯等療效，在臨床上常被應(yīng)用于風(fēng)濕、腎衰及筋骨萎軟等疾患的治療[1-2]。淫羊藿中含有多種黃酮類成分，其中淫羊藿苷所占比例較高，臨床主要使用的有炒淫羊藿、鹽炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿等，不同炮制方法對淫羊藿中成分可能會產(chǎn)生影響，筆者對采用不同炮制方法制備的黔產(chǎn)淫羊藿中總黃酮及淫羊藿苷的含量進行測定，現(xiàn)報道如下。

1 材料與儀器

1.1 實驗材料 淫羊藿苷的對照品(中國藥品生物制品檢定所制作，批號：120712-201309)；炒淫羊藿、鹽炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿均購自貴州省藥材公司，經(jīng)鑒定均為黔產(chǎn)淫羊藿正品；乙腈(西隴化工股份有限公司，色譜純，批號：201310002)；甲醇(濟寧恒泰化工有限公司，分析純，批號：201310019)。

1.2 實驗儀器 UV-2550型可見-紫外分光光度計(日本島津)；Agilent 1200高效液相色譜儀；超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司)；十萬分之一電子天平(日本島津)等。

2 方法與結(jié)果

2.1 淫羊藿總黃酮的含量測定 2.1.1 淫羊藿的對照品溶液的制備方法：應(yīng)用精密電子稱稱取適量的淫羊藿苷對照品，放入10mL的容量瓶中并用甲醇并定容，搖勻即得濃度為0.05mg/mL溶液，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備：精密稱取黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品粉末(過三號篩)0.2g，并將其置入容量為100mL的具塞錐形瓶內(nèi)，采用移液管精密量取20mL50%的乙醇加入其中，將重量稱定，放入超聲儀中進行60min的超聲，60min后取出，然后放至冷卻，再次精密稱定具塞錐形瓶的重量，流失的重量使用適量的50%乙醇以補充，充分搖勻后將其靜置并濾過，采用移液管精密量取續(xù)濾液0.5mL，放置于50mL容量瓶內(nèi)，并用50%甲醇定容到刻度，充分搖勻后備用。

2.1.3 淫羊藿總的黃酮線性關(guān)系的研究：分別精密吸取0.1、0.3、0.5、0.6、0.9mL和1mL的淫羊藿苷對照品溶液，置于10mL量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻即得不同濃度的淫羊藿苷對照品溶液。選擇測定波長為270nm，按照紫外-可見分光光度法，測定不同濃度淫羊藿苷對照品的吸光度，以對照品的濃度(C)和相應(yīng)的吸光度(A)進行線性回歸，可得到淫羊藿苷的線性回歸方程：A=0.8427C-0.0752(r=0.9993)。

2.1.4 含量測定：分別取對照品、供試品溶液，并以相應(yīng)的試劑作為空白，按照“2.1.4”項下的方法，測定淫羊藿及其炮制品的吸光度，計算總黃酮的含量。測定結(jié)果見表1。

表1 黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品中淫羊藿

2.2 淫羊藿苷的含量測定 2.2.1 色譜條件[3]：色譜柱為Hypersil ODS2 C18色譜柱；流動相為乙腈-水(30∶70)；流速：1mL/min；所需檢測的波長是270nm，柱溫：30℃，樣品進入的體積是10μL。根據(jù)淫羊藿苷峰來計算理論板數(shù)，應(yīng)≥1500。

2.2.2 淫羊藿苷的對照品溶液的制備：采用精密電子稱稱取適量的淫羊藿苷對照品，并將其放入10mL的容量瓶內(nèi)，應(yīng)用甲醇溶液定容到刻度，充分搖勻，便為濃度為0.105mg/mL的淫羊藿苷對照品溶液。

2.2.3 黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品的制備：取黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品粉末0.2g，應(yīng)用精密電子稱稱定重量后，置入容量為25mL的具塞錐形瓶內(nèi)，并用移液管量取20mL的 50%乙醇加入其中，對重量精密稱定，置入超聲儀中進行60min超聲，6min后取出，放置冷卻，再次對錐形瓶的重量進行稱定，流失的重量利用50%乙醇進行補充，充分搖勻后靜置并過濾，過濾出的液體便是黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品的供試品溶液。

2.2.4 方法學(xué)考察：2.2.4.1 線性關(guān)系的考察：對淫羊藿苷對照品溶液分別精密量取0.1、0.2、0.5、1、2、5mL，置于10mL的量筒中，應(yīng)用甲醇定容到刻度，所得溶液便是不同濃度的淫羊藿苷的對照品溶液。分別精密吸取10μL上述淫羊藿苷對照品溶液，根據(jù)色譜條件測定其峰面積，并以淫羊藿苷的濃度(X)與其對應(yīng)的峰面積(Y)作圖并進行線性回歸，可以得到淫羊藿苷的標準曲線：Y =10.61X-30.58，r=0.9996。結(jié)果顯示，淫羊藿苷在0.00105-0.0525mg/mL的濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

2.2.4.2 精密度實驗：取黔產(chǎn)淫羊藿的供試品溶液，每次的進樣量均為10μL，連續(xù)進樣5次，照色譜條件測定其峰面積，算峰面積的RSD值。結(jié)果顯示，黔產(chǎn)淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值為1.59%，表明該方法的精密度良好。

2.2.4.3 穩(wěn)定性實驗：取同批黔產(chǎn)淫羊藿，制備其供試品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，每隔2h進樣1次，連續(xù)進樣7次，照色譜條件測定其峰面積，計算RSD值。結(jié)果顯示，黔產(chǎn)淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值為1.94%，表明黔產(chǎn)淫羊藿中的淫羊藿苷在12h內(nèi)基本穩(wěn)定，穩(wěn)定性較好。

2.2.4.4 重復(fù)性實驗：取5份黔產(chǎn)淫羊藿樣品，根據(jù)制備照樣品的方法，對供試品溶液進行制備，精密量取所制備的溶液10μL，并向高效液相色譜儀內(nèi)注入，峰面積的測定根據(jù)照色譜條件進行，最后對淫羊藿苷的含量進行計算。由結(jié)果得出，黔產(chǎn)淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值為1.62%，表明采用該方法用于黔產(chǎn)淫羊藿中淫羊藿苷的含量測定，重現(xiàn)性較好。

2.2.4.5 加樣回收率實驗：取6份已知含量的淫羊藿藥材的粉末(過三號篩)，每份約0.5g，精密稱定，分別等量加入的適量的淫羊藿苷對照品，按照制備樣品的方法對溶液進行制備，并精密量取所制備的溶液10μL，將其向高效液相色譜儀內(nèi)注入，其峰面積的測定根據(jù)色譜條件進行，最后對其加樣回收率進行計算，見表2。

2.2.4.6 黔產(chǎn)淫羊藿及黔產(chǎn)淫羊藿炮制品的含量測定：按上述樣品制備方法制備黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品的溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，照色譜條件測定其峰面積，根據(jù)淫羊藿苷的線性回歸方程，計算各樣品中淫羊藿苷的含量。淫羊藿苷含量測定的結(jié)果見表3。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

表3 黔產(chǎn)淫羊藿及其炮制品中淫羊

3 討 論 淫羊藿總黃酮具有有提高機體免疫功能、改善患者心腦血管功能、調(diào)節(jié)機體的內(nèi)分泌功能、抗腫瘤等多重藥理活性。傳統(tǒng)中醫(yī)常使用淫羊藿的炮制品，如炒淫羊藿、鹽炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿入藥[4]。炮制前、后淫羊藿的活性成分是否發(fā)生了較大的變化，目前進行較全面的研究尚少，如崔莉等對淫羊藿炮制前、后在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)進行了研究，發(fā)現(xiàn)了其主要活性成分淫羊藿苷在大鼠體內(nèi)的吸收量出現(xiàn)了較大的提高，從而表明了通過炮制可改善淫羊藿中淫羊藿苷在大鼠體內(nèi)的吸收，提高淫羊藿中淫羊藿苷的生物利用度[5]。筆者測定了淫羊藿炮制前、后的主要化學(xué)成分變化，發(fā)現(xiàn)炮制后，淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷未出現(xiàn)較大的變化，提示炮制工藝的實施，可能對淫羊藿中其它成分可能會有一定的影響，從而促進主要活性成分的生物利用度提高，但對淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷的含量未產(chǎn)生較大的影響，結(jié)果顯示筆者采用的高效液相色譜法及紫外-可見分光光度法具有靈敏度較好、操作較為簡單，可快速對淫羊藿中的活性成分進行測定，為控制淫羊藿及其炮制品的質(zhì)量提供了重要的參考。

[1] 韓小東,張正祥,任光友,等.柔毛淫羊藿對去卵巢小鼠骨密度、破骨細胞和IL-β的影響[J].陜西中醫(yī),2011,32(7):917-918.

[2] 王雁錄,王偉亮,唐自銀,等.仙靈骨葆膠囊對膝骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液SOD和 MDA水平的影響[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2008,37(7):892-893.

[3] 余曉暉,侯 嘉,趙 磊,等.甘肅不同產(chǎn)地淫羊藿中總黃酮和淫羊藿苷含量測定[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2014,31(1):13-16.

[4] 任桂友,劉海萍,王 爽,等.大孔樹脂同時分離純化淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的工藝優(yōu)選[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014,20(2):5-7.

[5] 崔 莉,孫 娥,樊宏偉,等.藥理效應(yīng)法測定淫羊藿生品及不同炮制品的藥動學(xué)參數(shù)[J].中藥材,2013,36(3):370-373.

(收稿2015-04-24；修回2015-06-17)

*貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究項目(QZYY2013-100)

淫羊藿 炮制 色譜法，高壓液相

R28.3

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.11.043