趙 森 慕楊娜 姜 黎 鄒 明

(1 大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，大連，116001；2 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，沈陽(yáng)，110032)

單因素法優(yōu)化兩面針提取工藝

趙 森1慕楊娜2姜 黎1鄒 明1

(1 大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，大連，116001；2 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，沈陽(yáng)，110032)

目的：優(yōu)化兩面針?biāo)幉牡奶崛」に?。方法：采用單因素考察方法，以提取時(shí)間，提取次數(shù)，提取溶劑、用量、濃度及PH值作為優(yōu)選因素，以兩面針中的氯化兩面針堿提取量和出膏率作為定量指標(biāo)，優(yōu)化提取工藝。結(jié)果：最佳的提取工藝條件是：乙醇濃度80%，加醇量為8倍，提取2次，每次提取2 h，加入0.1 mol/L鹽酸調(diào)乙醇pH至5，出膏率和有效成分提取率比較高，重現(xiàn)性好。結(jié)論：優(yōu)化的提取工藝穩(wěn)定可行，適合工業(yè)大生產(chǎn)要求。

兩面針；總生物堿；單因素法；高效液相色譜

兩面針，又稱雙面針、山椒[2]。主產(chǎn)于云南、廣西、海南、廣東福建等地?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》收載[1]的兩面針主要功效為行氣止痛，活血化瘀，祛風(fēng)通絡(luò)，具有良好的活血化瘀止痛藥用價(jià)值[3]，氯化兩面針堿(Nitidine Chloride)是兩面針的主要有效成分,具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、心血管系統(tǒng)、抗真菌，強(qiáng)心、降血壓等藥理作用[4]。實(shí)驗(yàn)以單因素法預(yù)選了影響提取工藝的重要因素，并以提取物中有效成分氯化兩面針堿和兩面針提取物的提取率作為指標(biāo)，優(yōu)化兩面針提取工藝[5]。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津公司)；CLSS-VP色譜工作站；XL-204電子天平(梅特勒-托利多)；KQ128型超聲儀；LG-08A粉碎機(jī)(深圳市百源堂公司)；對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)：737-1101；兩面針購(gòu)自安國(guó)藥材公司，經(jīng)賈天柱教授鑒定為正品；實(shí)驗(yàn)試劑均為色譜純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersol BDSC18(4.6 mm×200 mm)；流動(dòng)相：磷酸二氫鉀溶液-乙腈(55∶45)，磷酸調(diào)節(jié)pH=3.17；檢測(cè)波長(zhǎng)329 nm；柱溫:室溫；流速1 mL/min；測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得[4]。

1.2.2 對(duì)照品溶液的配制 取氯化兩面針堿對(duì)照品適量，精密稱定，加無水甲醇配制成0.2448 mg/mL的溶液。

1.2.3 樣品的處理和供試品溶液的配制 取兩面針?biāo)幉?，加入乙醇，置電熱套中，加熱回?次，每次2 h，濾過，水浴干燥成干膏。取干膏適量，精密稱定，置容量瓶中，精密加入甲醇100 mL，超聲處理30 min，濾過，取續(xù)濾液，用0.45 μm濾膜濾過，即得。

1.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取0.2448 mg/mL的氯化兩面針堿對(duì)照品溶液5、10、12.5、15、20 μL分別注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)得標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=233.15X-216.74，r=0.999 4(n=5)，結(jié)果顯示在0.122 4 μg～0.489 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.5 精密度 分別吸取對(duì)照品溶液，按色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.93%，結(jié)果表明該方法精密度符合規(guī)定。

1.2.6 重復(fù)性 按1.2.3項(xiàng)下操作，精密吸取10 μL，進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，RSD=0.84%，小于3%，表明該方法重復(fù)性符合規(guī)定。

1.2.7 穩(wěn)定性 精密吸取樣品試液，在室溫條件下分別放置0、2、4、6、8、10、12 h后進(jìn)樣測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.76%，小于3%，結(jié)果表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定已知氯化兩面針堿含量的兩面針提取物0.2 g，分別加入定量的氯化兩面針堿對(duì)照品溶液，按1.2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行操作，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率和RSD，結(jié)果見表1。

表1 氯化兩面針堿加樣回收率考察結(jié)果

由表1可見，氯化兩面針堿回平均收率為100.81%，RSD為1.1%，表明方法的回收率良好。

2 結(jié)果

出膏率=m/M×100%，其中m為干膏的重量(g),M為藥材的重量(g)。綜合評(píng)分：氯化兩面針堿含量權(quán)重系數(shù)0.5，出膏率權(quán)重系數(shù)0.5，進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

2.1 提取溶劑 取等量?jī)擅驷標(biāo)幉?份，分別加入加酸的水溶液和乙醇溶液，各提取1次，1 h/次，將提取液的續(xù)濾液濃縮并定容，得供試品溶液。由表2可見，醇提液比加酸水溶液氯化兩面針堿得率高，且水溶液極性大，易提取出色素[6]，黏液質(zhì)等極性大的雜質(zhì)，不利于濾過和儲(chǔ)存，故選擇乙醇作為提取溶劑。

表2 提取溶劑

2.2 乙醇濃度 取4份等量藥材，分別加入10倍量50%、60%、70%、80%、90%乙醇，提取1次，2 h/次，測(cè)定出膏率及氯化兩面針堿含量。從表3可以看出，用80%的乙醇對(duì)兩面針的出膏率和氯化兩面針堿有較好的提取效果，通過出膏率和氯化兩面針堿的綜合評(píng)分，所以選擇80%的乙醇。

表3 乙醇濃度

2.3 提取時(shí)間 取3份等量藥材，分別加入80%乙醇浸泡2 h，提取1次，分別提取1 h、2 h、3 h，將提取液濾過、濃縮、定容，測(cè)定出膏率及氯化兩面針堿含量。由表4可見，提取時(shí)間短(1 h)有效成分溶出不完全，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)(2 h)有效成分被提取完全，時(shí)間增加(3 h)，故選擇提取時(shí)間為2 h。

表4 提取時(shí)間結(jié)果

2.4 提取次數(shù) 取3份等量藥材，加入80%乙醇，分別提取1次、2次、3次，2 h/次，測(cè)定出膏率及氯化兩面針堿含量。由表5可見，有效成分隨著提取次數(shù)的增加而增加，多次提取率較高，但提取次數(shù)不適當(dāng)?shù)脑黾樱崛÷试黾硬幻黠@，且浪費(fèi)成本，選擇提取次數(shù)為2次。

表5 回流次數(shù)

2.5 溶媒用量 取3份等量藥材，分別加入10倍、8倍、6倍藥材量的80%乙醇，提取2次，2 h/次，測(cè)定出膏率及氯化兩面針堿含量。由表6可知，乙醇用量為10倍、8倍時(shí)，兩面針的出膏率和氯化兩面針堿含量最高，為降低生產(chǎn)成本，故選擇乙醇用量為8倍。

2.6 乙醇pH值對(duì)提取效率的影響 取4份等量藥材，加入不同pH值的80%乙醇，分別提取2次，2 h/次，測(cè)定出膏率及氯化兩面針堿含量。兩面針中藥材中主要成分為總生物堿，其中氯化兩面針堿為主要鎮(zhèn)痛成分[8]。本實(shí)驗(yàn)采用了加入少量乙酸來增加生物堿的溶出率，由表7可見，乙醇液的pH值降低，提取率明顯增加，pH=5時(shí)，兩面針的出膏率和氯化兩面針堿含量最高。

表6 溶媒用量

表7 乙醇pH值

2.7 工藝重現(xiàn)性考察 取兩面針?biāo)幉?00 g，按照單因素考察的結(jié)果提取，即用80%的乙醇溶液提取兩次，加入0.1 mol/L鹽酸調(diào)乙醇pH=5，加醇量為8倍，提取2 h。測(cè)定結(jié)果見表。

表8 工藝重現(xiàn)性考察

結(jié)果表明,此方法穩(wěn)定可行。

3 討論

本文選取了溶媒、乙醇濃度、溶媒用量、溶媒pH值、提取時(shí)間、提取次數(shù)等6個(gè)因素考察兩面針?biāo)幉牡奶崛」に嚒Ｒ掖嫉奶崛⌒Ч黠@優(yōu)于水的提取效果，80%乙醇更適合有效成分溶出且雜質(zhì)溶出較少，從生產(chǎn)成本考慮，乙醇用量為8倍量，提取時(shí)間2 h，提取次數(shù)為2次，考慮到兩面針中主要成分為生物堿類，且鎮(zhèn)痛的主要成分為氯化兩面針堿，本次實(shí)驗(yàn)首次采用加入少量酸調(diào)節(jié)提取溶劑的pH值來增加兩面針總生物堿的溶出度，結(jié)果有效成分氯化兩面針堿的提取率顯著增加。最終確定兩面針的最佳工藝為：乙醇濃度為80%，加醇量為8倍，提取2次，提取2 h，加入0.1 mol/L鹽酸調(diào)乙醇pH至5，生物堿轉(zhuǎn)移率和出膏率均較高，工藝重現(xiàn)性穩(wěn)定可行。

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(2014-08-19收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Single-factor Optimization for Extraction Process of Radix Zanthoxyli

Zhao Sen1，Mu Yangna2，Jiang Li1，Zou Ming1

(1AffiliatedZhongshanHospitalofDalianUniversity,Dalian116001,China; 2TheSecondAffiliatedHospitalofLiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shenyang110034,China)

Objective:To optimize extraction process of Radix zanthoxyli. Methods:By using a single factor optimization method, we selected a reasonable extraction process via ethyl alcohol. Optimizing factors are extraction time, number of extractions, extraction solvent, dosage, concentration, PH value; using yield rate and Nitidine Chloride extracted weight as parameters. Results:The optimum extraction process is 80% concentration of ethyl alcohol, extract 2 h each time, extract twice, controlling pH=5 using 0.1 mL/L HCL. Conclusion:The optimized extraction process is suitable for industrial production.

Radix Zanthoxyli; Total alkaloid; Single factor optimization method; HPLC

趙森(1981.8—)，男，碩士，主管中藥師，藥劑科科員，研究方向：主要從事中藥新劑型及新藥開發(fā)，E-mail：179786627@qq.com

鄒明(1970.9—)，女，本科，主任藥師，藥劑科副主任，研究方向：主要從事藥事管理與臨床藥學(xué)，E-mail：zsyyyjk@sina.com，Tel：(0411)62893535

R284.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.11.038