李 瑛，張 騰，戴根來

(合肥久諾醫(yī)藥科技有限公司，安徽合肥 230088)

用于治療高血壓疾病的阿齊沙坦(azilsartan，圖1)［1－2]是一代新型的選擇性 AT1亞型血管緊張素II受體拮抗劑(ARBs)類抗高血壓藥［3－4]，由日本武田藥品工業(yè)株式會(huì)社研究與開發(fā)，2012年1月開始在日本獲批上市，片劑劑型。目前，我國尚未上市。阿齊沙坦屬于低溶解性藥物，難溶解于水中。中國藥典2010版二部要求，難溶性的藥物均需要作溶出度的檢查，所以從質(zhì)量控制上說，溶出度是其重要的一項(xiàng)指標(biāo)。本文采用HPLC法，對(duì)三批自制阿齊沙坦片和一批市售片進(jìn)行溶出度測(cè)定，并運(yùn)用方法學(xué)進(jìn)行考察［5－6]。

1 儀器與材料

1．1 儀器 美國科學(xué)系統(tǒng)公司SSI高效液相色譜儀(SSI Series 500 PUMP，Series 500紫外檢測(cè)器，Anastar色譜工作站)、AB135－S分析天平(托利多梅特勒)、RCZ－8A智能藥物溶出儀(天津市鑫洲科技有限公司)。

1．2 試藥 阿齊沙坦對(duì)照品(合肥久諾醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào):D111001)，阿齊沙坦片，規(guī)格20 mg(合肥久諾醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào):120702、120703、120704;日本武田藥品工業(yè)株式會(huì)社，批號(hào):O002)，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 色譜柱:Agilent C18(250 mm ×4．6 mm，5．0 μm);流動(dòng)相為水—乙腈—冰醋酸(43∶57∶1);檢測(cè)波長為254 nm，柱溫30℃，流速1．0 mL·min－1，進(jìn)樣量20 μL。按雙酰化物峰計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不低于3 000。

2．2 配制對(duì)照品溶液 取約20 mg阿齊沙坦對(duì)照品，精密稱定，置100 mL量瓶中。加適量甲醇使其溶解，再加溶出介質(zhì)(1．7 g磷酸氫二鉀和4．475 g十二水磷酸氫二鈉溶于1 000 mL水中)，稀釋至刻度后搖勻。精密量取5 mL至50 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)，稀釋至刻度，并作為對(duì)照品溶液使用。

2．3 配制供試品溶液 按照溶出度測(cè)定法(中國藥典2010年版二部附錄X C第二法)，取阿齊沙坦片，以1 000 mL磷酸鹽緩沖液(1．7 g磷酸氫二鉀和4．475 g十二水磷酸氫二鈉溶于1 000 mL水)為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r·min－1。45 min時(shí)，取適量溶液濾過(0．45μm微孔濾膜)。取續(xù)濾液作供試品溶液使用。

2．4 測(cè)試空白溶液 取溶出介質(zhì)進(jìn)樣。結(jié)果表明空白溶液沒有干擾［7]，如圖2所示。

2．4．1 線性考察 取適量阿齊沙坦對(duì)照品，進(jìn)行精密稱定，加適量甲醇將其溶解，用溶出介質(zhì)定量稀釋成為每1 mL中約含0．35 mg的溶液，使其作為阿齊沙坦的對(duì)照品貯備液;分別精密量取1、2、3、4、5 mL貯備液至50 mL量瓶中，用溶出介質(zhì)將其稀釋至刻度后搖勻。分別量取20μL上述溶液，按“2．1”項(xiàng)條件測(cè)定，記錄峰面積，以濃度C對(duì)阿齊沙坦峰面積A進(jìn)行線性回歸分析，有回歸方程A=29 643C+12 312，r=0．999 7。結(jié)果顯示，在 6．82 ～34．10 mg·L－1濃度范圍內(nèi)，阿齊沙坦具有良好的線性關(guān)系。

2．4．2 精密度試驗(yàn) 取20．46 mg·L－1上述對(duì)照品溶液，進(jìn)行6次重復(fù)進(jìn)樣并進(jìn)行測(cè)定，記錄其峰面積。結(jié)果得出，RSD=0．71%。

2．4．3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取20．46 mg·L－1上述對(duì)照品溶液，0、1、2、4、8 h 分別進(jìn)行測(cè)定，記錄其峰面積，結(jié)果得出，RSD=1．21%。結(jié)果表明，在8 h內(nèi)阿齊沙坦溶液最為穩(wěn)定。

2．4．4 重復(fù)性試驗(yàn) 取20片同一批樣品(批號(hào):120702)，精密稱定后研細(xì)。精密稱取6份適量(約相當(dāng)于阿齊沙坦20 mg)，分別置于100 mL量瓶中，加適量甲醇，并運(yùn)用超聲處理使其溶解。使用溶出介質(zhì)使其稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取5 mL續(xù)濾液，置于25 mL量瓶中，使用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻。精密量取20μL，按照“2．1”項(xiàng)條件測(cè)定，記錄其峰面積。另取適量阿齊沙坦對(duì)照品，精密稱定，加適量甲醇將其溶解，再用溶出介質(zhì)定量稀釋成為每1 mL中約含20μg阿齊沙坦的溶液，作為對(duì)照品溶液，使用相同方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果得出，RSD=0．33%，說明該方法具有良好的重現(xiàn)性。

2．4．5 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取10、16、20 mg阿齊沙坦對(duì)照品及3份處方配比量的輔料，置于1 000 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)使其稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液使用;另取約20 mg阿齊沙坦對(duì)照品，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加適量甲醇將其溶解，另加pH 6．8磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)將其稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液使用。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2．1”項(xiàng)條件測(cè)定，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果得出，平均回收率為(99．9±0．74)%，RSD 為0．74%，如表1 所示。

2．5 溶出度測(cè)定 按照溶出度測(cè)定法(中國藥典2010年版二部附錄X C第二法)，取阿齊沙坦片，用1 000 mL pH 6．8磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)，50 r·min－1轉(zhuǎn)速。45 min時(shí)，取適量溶液后濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液使用。另取適量阿齊沙坦對(duì)照品，精密稱定，加入甲醇適量將其溶解。將溶出介質(zhì)定量稀釋為每1 mL中約含20μg阿齊沙坦的溶液，作對(duì)照品溶液使用。分別量取對(duì)照品溶液與供試品溶液，按“2．1”項(xiàng)條件測(cè)定，計(jì)算溶出度，批號(hào)為 120702、120703、120704、0002 的樣品溶出度分別為 99．4%、99．4%、99．8%、99．6%。

表1 阿齊沙坦回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本文使用HPLC法對(duì)阿齊沙坦片進(jìn)行溶出度測(cè)定，具有良好的重現(xiàn)性、高度的準(zhǔn)確性。以阿齊沙坦最大吸收波長254 nm為檢測(cè)波長進(jìn)行紫外檢測(cè)，主峰保留時(shí)間為5 min以內(nèi)，并具有良好的分離度。

阿齊沙坦難溶于水［8－9]，本文建立的 HPLC 法對(duì)阿齊沙坦片溶出度進(jìn)行直接測(cè)定，可在同一色譜條件下與含量同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，準(zhǔn)確簡(jiǎn)單，省時(shí)省力。

［1] 張亞安，傅志賢，張征林．抗高血壓新藥選擇性AT1壓型血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑－阿齊沙坦酯［J]．藥學(xué)與臨床研究，2011，19(3):262 －264．

［2] 楊君義．新型降壓藥阿奇沙坦酯［J]．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32(5):644－645．

［3] 趙春艷，王京晶，劉 洋，等．心血管疾病新藥阿齊沙坦酯的藥理與臨床評(píng)價(jià)［J]．中國新藥雜志，2011，20(19):1831 －1834．

［4] 高 越，邱 彤，郗硯彬，等．復(fù)方阿齊沙坦酯/氯噻酮藥理作用研究進(jìn)展［J]．國際藥學(xué)研究雜志，2013，40(5):557 －559，583．

［5] 張 敏，霍立茹，公曉偉，等．HPLC法測(cè)定阿齊沙坦片含量［J]．中國藥房，2014，25(41):81 －82．

［6] 張樹文，徐 偉，楊 彬，等．阿齊沙坦的合成［J]．化工中間體，2014，10(4):39 －41．

［7] Jie Z，Wenjuan P，Nan S，et aL．Separation of four-lol drugs by HPLCwith new bonded chiral stationary column［J]．Chinese Science Bulletin，2013，58(11):1267 －1273．

［8] 國家藥典委員會(huì)．中國藥典(二部)［S]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄85 －87．

［9] 唐了平，產(chǎn)運(yùn)霞，郭銀漢，等．阿齊沙坦片國產(chǎn)品溶出度試驗(yàn)方法的建立及與原研品體外溶出行為比較［J]．中國藥房，2014，25(17):1609－1611．