金 劍,林 濤

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院，上海 200011)

舒肝祛脂膠囊對實驗性脂肪肝大鼠治療作用的研究

金 劍,林 濤

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院，上海 200011)

目的 觀察舒肝祛脂膠囊對實驗性脂肪肝大鼠的治療作用。方法 將30只Wistar大鼠隨機分為正常對照組、模型組及舒肝祛脂低、中、高劑量組和阿昔莫司組。除正常對照組外，其余5組均以高脂肪飲食飼喂5周，建立高血脂性脂肪肝模型后，模型組給予生理鹽水灌胃，舒肝祛脂低、中、高劑量組分別用舒肝祛脂膠囊0.04 g/(kg·d)，0.08 g/(kg·d)，0.24 g/(kg·d)灌胃，阿昔莫司組用阿昔莫司膠囊0.06 g/kg灌胃。各組于用藥4周后處死動物取材送檢，觀察肝指數(shù)、血脂生化指標(biāo)、肝組織病理改變等。結(jié)果 模型組鏡下呈中重度脂肪肝改變；與模型組比較，舒肝祛脂中、高劑量組大鼠肝指數(shù)及血清TC、TG、LDL-C、AST、ALT、ALP水平均明顯下降(P均<0.05)。結(jié)論 舒肝祛脂膠囊對高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝具有一定治療作用。

舒肝祛脂膠囊；高血脂癥；脂肪肝

脂肪性肝病簡稱脂肪肝，是一種由各種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積，以肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)蓄積為主要特征的臨床病理綜合征。美國流行病學(xué)調(diào)查顯示非酒精性脂肪肝發(fā)病率接近20%，遠(yuǎn)超丙型肝炎和酒精性肝病的發(fā)病率。隨著肥胖、糖尿病的全球流行，日本和中國等亞洲國家的發(fā)病率已接近歐美國家水平[1]。由于脂肪肝的發(fā)病機制目前尚未完全闡明，西醫(yī)缺乏理想的針對性特效藥，主要應(yīng)用調(diào)節(jié)血脂的藥物進行輔助治療，而中藥對脂肪肝有著很好的作用和廣闊前景[2]。本實驗以高血脂癥大鼠為研究對象，觀察疏肝祛脂膠囊對大鼠血脂和脂肪肝形成的影響，為尋找和開發(fā)新的降血脂、防治脂肪肝藥物提供實驗依據(jù)。

1 實驗資料

1.1材料

1.1.1動物與飼料 6周齡清潔級雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量(180±20)g，購自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院實驗動物中心，合格證號：SYXK(滬)2012-0007；飼料購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，許可證號：滬飼審(2008)04002。

1.1.2藥物 舒肝祛脂膠囊，上海方心制藥科技有限公司，產(chǎn)品批號：210120805。阿昔莫司膠囊，魯南貝特制藥有限公司，產(chǎn)品批號：31121207。

1.1.3試劑 總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酯酶(ALP)和血糖試劑盒均為西門子原裝配套試劑。肝組織超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所。

1.1.4主要儀器 ADVIA 2400型全自動化生化分析儀(拜耳德國)，Axioskop-plus型光學(xué)顯微鏡(蔡司德國)，組織包埋機，全自動組織脫水機，石蠟切片機，病理圖像分析系統(tǒng)等。

1.2動物分組及造模 雄性Wistar大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機分為正常對照組、模型組、舒肝祛脂高劑量組、舒肝祛脂中劑量組、舒肝祛脂低劑量組和阿昔莫司組，每組5只。每組大鼠均自由攝水，正常對照組給予基礎(chǔ)飼料，其余5組給予高脂飼料(含88.8%基礎(chǔ)飼料、10%豬油、1%膽固醇、0.2%甲基硫氧嘧啶)，連續(xù)飼喂5周。從實驗第6周末起，各組大鼠仍如前法飼喂，正常對照組、模型組用生理鹽水1 mL灌胃；舒肝祛脂低、中、高劑量組分別給予舒肝祛脂膠囊0.04 g/(kg·d)、0.08 g/(kg·d)、0.24 g/(kg·d)劑量灌胃各1 mL；阿昔莫司組給予阿昔莫司0.06/(kg·d)灌胃1 mL。6組大鼠均連續(xù)灌胃4周，于末次灌胃后24 h處死，取血取肝并進行相應(yīng)指標(biāo)檢測。

1.3檢測指標(biāo)

1.3.1一般情況 觀察大鼠精神、活動、飲食、皮毛、體質(zhì)量變化。處死大鼠后肉眼觀察肝臟脂肪情況并計量肝指數(shù)(肝濕質(zhì)量與體質(zhì)量之比)。

1.3.2生化指標(biāo)檢測 門靜脈采血分離血清，采用全自動化分析儀測定TG，TC，LDL-C，HDL-C，ALT，AST，ALP及血糖水平，該檢測由我院檢驗科生化實驗室完成。

1.3.3SOD活力、MDA水平檢測 取大鼠1/5肝臟組織用預(yù)冷生理鹽水沖洗表面血污后置于少量生理鹽水中固定。SOD活力采用氮藍(lán)四唑(NBT)比色法，MDA含量測定采用硫代巴比妥酸法，通過檢測吸光度，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算各組大鼠肝組織SOD活力和MDA水平。

1.3.4光鏡觀察 取肝組織5 mm×5 mm，浸泡于10%甲醛液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織形態(tài)變化。

2 結(jié) 果

2.1各組一般情況 高脂飼料飼喂大鼠前期食量大于正常對照組，體質(zhì)量增加較快，后期食量減小，活動量減少。舒肝祛脂各組食量、活動量均明顯優(yōu)于模型組(P<0.05)。舒肝祛脂高劑量組大鼠體質(zhì)量明顯輕于模型組(P<0.05)。處死大鼠后取肝組織肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)正常對照組肝組織色澤正常，呈暗紅色，切面無油膩感；模型組大鼠肝臟肥大、表面發(fā)黃，切面油膩。舒肝祛脂高劑量組和阿昔莫司組肝組織略偏大，大部分色澤暗紅，接近正常表現(xiàn)。各組體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量及肝指數(shù)情況，見表1。

表1 各組體質(zhì)量、肝濕質(zhì)量與肝指數(shù)比較

注：①與模型組比較，P<0.05。

2.2各組血清脂質(zhì)、血糖及肝功能比較 與模型組相比，舒肝祛脂高劑量組和阿昔莫司組TC和AST、TG、LDL-C、ALT、ALP水平均明顯下降(P均<0.05)，舒肝祛脂中劑量組水平也明顯下降(P均<0.05)；舒肝祛脂低劑量組生化指標(biāo)亦有所下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。疏肝祛脂膠囊各劑量組HDL-C及血糖水平與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

表2 各組血清脂質(zhì)、血糖的比較

注：①與模型組比較，P<0.05。

2.3各組SOD活力、MDA水平比較 疏肝祛脂各劑量組，SOD活力及MDA水平隨劑量增大有輕度改善，但與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表3。

2.4肝組織光鏡下觀察 光鏡下顯示，正常對照組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁薄，肝組織排列成肝索，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，細(xì)胞呈多邊形，見圖1。模型組呈重度脂肪肝樣改變，呈現(xiàn)彌漫性脂肪變性及空泡樣變，變性的肝組織極度腫脹呈圓形，體積較正常肝組織明顯增大，細(xì)胞核被脂滴擠向一邊，類似脂肪細(xì)胞。肝竇受壓變窄甚至消失，肝索排列紊亂，見圖2。舒肝祛脂各劑量組其細(xì)胞變性及腫脹程度隨藥物劑量增大而逐漸減輕，高劑量組和阿昔莫司組僅有微量炎性細(xì)胞浸潤和壞死灶，接近于正常表現(xiàn)，見圖3～6。

表3 各組血清SOD活力及MDA水平比較

圖1 正常對照組肝組織結(jié)構(gòu)(HE，×400)

圖2 模型組肝組織結(jié)構(gòu)(HE，×400)

圖3 舒肝祛脂低劑量組肝組織結(jié)構(gòu)(HE，×400)

3 討 論

脂肪肝是由多種原因引起的肝臟脂肪性病變，當(dāng)肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚超過肝濕質(zhì)量的5%或以上的肝細(xì)胞在光鏡可見脂肪小滴，其是一種可逆性病變，只要早期診斷和及時治療，一般可恢復(fù)正常[3]。但也有研究認(rèn)為，無論成因如何，均有部分脂肪肝可發(fā)展為肝纖維化，甚至肝硬化[4]。中醫(yī)學(xué)雖然沒有脂肪肝的病名，但根據(jù)其病因病機及臨床表現(xiàn)和體征，可歸屬于中醫(yī)的“脅痛”“痰濁”“瘀血”等范疇。中醫(yī)理論認(rèn)為該病起因多為過食肥甘厚味，嗜酒過度，或七情內(nèi)傷，濕熱之邪壅滯肝脾，以致肝失疏泄，肝血瘀滯，脾失健運，聚濕成痰，痰阻氣機，痰瘀互結(jié)而發(fā)病[5]。其病機基礎(chǔ)與痰、濕、瘀、積有關(guān)。病位主要責(zé)之于肝脾二臟。因此，疏肝健脾、化痰祛濕、活血化瘀、消食導(dǎo)滯為脂肪肝治療要則[6]。

圖4 舒肝祛脂中劑量組肝組織結(jié)構(gòu)(HE，×400)

圖5 舒肝祛脂高劑量組肝組織結(jié)構(gòu)(HE，×400)

圖6 阿昔莫司組肝組織結(jié)構(gòu)(HE，×400)

舒肝祛脂膠囊作為我院的自制制劑，臨床應(yīng)用近20年，療效確切，無明顯不良反應(yīng)。舒肝祛脂膠囊由柴胡、紅花、黃芩、白芍、青皮、參三七、大黃、甘草、枳殼、海藻、白術(shù)、敗醬草、郁金、豬苓、山楂和女貞子等16味藥組成，具有清熱化濕、化痰消瘀、調(diào)和氣血、養(yǎng)肝健脾等功效。其中以柴胡、枳殼、郁金、海藻疏肝理氣，消痰散結(jié)；白術(shù)、澤瀉健脾利濕，使痰無滋生之源；紅花、參三七、山楂活血通絡(luò)、祛肝經(jīng)之瘀，增強肝臟血運，消除積聚脂肪；敗醬草能散結(jié)，寒可泄熱，又具活血行瘀之功，故能清熱化積；大黃通腑導(dǎo)滯，與澤瀉配用，分流疏導(dǎo)，降濁祛脂。諸藥合用，使肝能條達(dá)，脾可健運，痰瘀得除，脂肪無蓄積之處，從而達(dá)到舒肝祛脂之療效[7]。現(xiàn)代研究表明，舒肝祛脂膠囊中多味中藥材均能降低血脂、肝脂，從而改善肝細(xì)胞脂肪變性，促進肝臟功能恢復(fù)等達(dá)到降脂護肝的效果。

本研究結(jié)果顯示，舒肝祛脂膠囊能降低脂肪肝大鼠血清TC、TG、AST、ALT、ALP及LDL-C水平，清除肝細(xì)胞內(nèi)部分脂質(zhì)積聚；鏡下顯示病理組織學(xué)變化明顯改善，高劑量組僅有少量脂滴堆積，輕微脂肪變性，肝細(xì)胞形態(tài)趨于正常細(xì)胞表現(xiàn)。其改善脂肪肝作用與阿昔莫司相當(dāng)，但疏肝祛脂各劑量組SOD活力和MDA水平與模型組相比稍有改善，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。其原因可能是實驗觀察時間過短，SOD活力與MDA水平之間存在相互影響、制約的關(guān)系，其過程較為復(fù)雜[8]。本實驗是建立在高脂模型的基礎(chǔ)上，大鼠已有明顯肝損傷，發(fā)生脂肪變。一方面肝損傷造成肝細(xì)胞耗氧增加，體內(nèi)產(chǎn)生大量自由基，造成脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，反應(yīng)產(chǎn)物MDA水平增加[9]；另一方面，肝脂變造成機體抵抗力下降[10]，抗自由基能力及SOD活力下降。兩方面因素引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至死亡，使機體肝臟抗氧化能力下降。脂肪肝的治療應(yīng)是長期、多方面的，短時間內(nèi)無法提高肝臟的抗氧化能力。而本研究為期4周，時間較短，可能不足以發(fā)現(xiàn)藥物改善高血脂癥大鼠肝臟氧化-抗氧化的失衡狀態(tài)[11]。筆者將在下一個研究項目中對舒肝祛脂膠囊做更為長期的研究以期進一步發(fā)現(xiàn)具體原因。

總之，舒肝祛脂膠囊具有一定的降脂保肝作用，其具體作用機制還有待進一步探索。臨床應(yīng)用時醫(yī)師可按照患者實際病情制定個體化用藥方案，靈活應(yīng)用，在提高患者服藥依從性的基礎(chǔ)上教導(dǎo)患者調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)、適當(dāng)增加運動等；并定期檢查血脂、肝功能指標(biāo)、B超等，及時調(diào)整給藥頻次、劑量等以期發(fā)揮藥物最大療效。

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Study on the effect of Shugan Quzhi Capsule in rats of experimental liver steatosis

JIN Jian, LIN Tao

(Shanghai Ninth People’s Hospital Affiliated Shanghai JiaoTong School of Medicine, Shanghai 200011, China)

Objective It is to observe the effect of Shugan Quzhi Capsule in rats of experimental liver steatosis. Methods 30 cases of Wistar rats were divided into normal group, model group, Shugan Quzhi Capsule low does, medium does and high does group, and Acipimox group. In addition to normal group, the others of five groups were fed high fat diet for 5 weeks to established hyperlipemia model. Then the animals were given normal saline gavage in model groups, Shugan Quzhi Capsule (0.04 g/kg, 0.08 g/kg, and 0.24 g/kg) in Shugan Quzhi Capsule groups, and Acipimox Capsule (0.06 g/kg) in Acipimox group. Four weeks later the animals were killed to examine the changes of blood biochemistry and pathological, and the common conditions, blood lipid level, enzyme, the ratio of liver to body weight and histological change were observed. Results The liver tissues showed changes of moderate or severe fatty liver in microscope in model group. Compared with model group, the levels of TC, TG, LDL-C, AST, ALT, ALP in Shugan Quzhi Capsule medium does and high does group were decreased markedly (allP<0.05 ). Conclusion Shugan Quzhi Capsule has some effect in the treatment of hyperlipidemia fatty liver induced by high fat diet.

Shugan Quzhi Capsule; hyperlipidemia; fatty liver

金劍，男，碩士，主管藥師，研究方向為臨床藥學(xué)。

上海市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科研基金(2012Y015A)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.03.004

R-332

A

1008-8849(2015)03-0238-04

2014-06-01