王瑩關(guān)兵葉實明徐麗常玲美于愛民

·臨床研究·

965例新生兒聽力及聾病易感基因聯(lián)合篩查結(jié)果分析△

王瑩1關(guān)兵2葉實明1徐麗2常玲美2于愛民2

目的 探討新生兒聽力及聾病易感基因聯(lián)合篩查的臨床意義。方法 選擇出生后3～5天的965例新生兒，采集足跟血提取基因組DNA進行耳聾易感基因［線粒體12Sr RNA c.1555A＞G、c.1494C＞T，GJB2基因35delG、167del T、176_191del16、235delC、299_300del AT，GJB3基因538C＞T、547G＞A，SLC26A4（PDS）基因281C＞T、589G＞A、IVS7-2A＞G、1174A＞T、1226G＞A、1229C＞T、IVS15+5G＞A、1975G＞C、2027T＞A、2162C＞T、2168A＞G］的位點檢測；同時進行聽力篩查，初篩采用篩查型耳聲發(fā)射（DPOAE），復(fù)篩采用篩查型OAE結(jié)合自動判別聽性腦干反應(yīng)（AABR），分析兩種篩查的結(jié)果。結(jié)果 965例中53例（5.49%）存在耳聾基因突變，其中，1例為線粒體12Sr RNA c.1555＞G突變，33例為GJB2基因突變，18例為SCL26A4基因突變，1例為GJB3基因突變；聽力初篩未通過28例，復(fù)篩未通過18例，10例在3月齡時進行了聽力學(xué)診斷，最終確診6例新生兒聽力損失。965例中，聽力篩查與基因篩查均通過905例，均未通過11例，聽力篩查通過但基因篩查未通過42例，聽力篩查未通過但基因篩查通過7例。結(jié)論 新生兒聽力和聾病易感基因聯(lián)合篩查，可發(fā)現(xiàn)單純聽力篩查不能發(fā)現(xiàn)的部分藥物性聾和遲發(fā)性聾患兒。

新生兒； 聽力篩查； 耳聾； 基因

據(jù)統(tǒng)計，每年有近126 000～500 000的嬰兒聽力受到損害，其中90%在發(fā)展中國家［1］。60%的耳聾與遺傳因素有關(guān)［2］。迄今為止，已有114個耳聾基因位點被報道，40多個耳聾基因被克隆［3］。部分因基因缺陷導(dǎo)致的先天性聽力損失患兒在出生早期可能無表現(xiàn)。隨著聾病基因診斷技術(shù)的開展與應(yīng)用，2007年王秋菊等［4］在進行了大規(guī)模聾病分子流行病學(xué)研究的基礎(chǔ)上，提出了新生兒聽力與聾病易感基因聯(lián)合篩查的理念。隨后部分城市已開始試點實施，意在早期發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性聾患兒，達到早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期干預(yù)的目標(biāo)。本研究以965例新生兒為研究對象，對其進行新生兒聽力篩查及聾病易感基因檢測，進一步探討新生兒聽力及聾病易感基因聯(lián)合篩查的臨床應(yīng)用價值及意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2013年4月～2014年8月在揚州市蘇北人民醫(yī)院進行聽力篩查的965例正常分娩新生兒為研究對象，其中，男456例，女509例。本研究獲得蘇北人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有新生兒篩查之前，家長均被詳細(xì)講解和告知聽力和基因篩查的相關(guān)知識，理解同意后填寫知情同意書。

1.2 聽力篩查方法 聽力初篩采用篩查型耳聲發(fā)射（DPOAE），復(fù)篩采用篩查型DPOAE結(jié)合自動判別聽性腦干反應(yīng)（AABR），初篩于出生后3～5天進行，復(fù)篩于出生后42天進行。初篩在新生兒雙側(cè)外耳道清理后進行，測試時f1、f2強度分別為65、55 d B HL，測試4個頻率（范圍2～5 k Hz），信噪比≥7 d B，以4個頻率中3個以上通過為篩查通過標(biāo)準(zhǔn)。復(fù)篩OAE方法同前，AABR由系統(tǒng)自動判定測試結(jié)果是否通過。復(fù)篩未通過的新生兒生后三個月時行聽力學(xué)評估和醫(yī)學(xué)診斷。

1.3 聾病易感基因篩查 所有新生兒出生后3～5天內(nèi)采集足跟血作為提取基因組DNA的血樣，送到華大基因?qū)嶒炇疫M行耳聾易感基因的線粒體12Sr RNA c.1555A＞G、c.1494C＞T，GJB2基因35delG、167del T、176_191del16、235delC、299_ 300del AT，GJB3基因538C＞T、547G＞A，SLC 26A4（PDS）基因281C＞T、589G＞A、IVS7-2A＞G、1174A＞T、1226G＞A、1229C＞T、IVS15+5G＞A、1975G＞C、2027T＞A、2162C＞T、2168A＞G的位點檢測，檢測方法采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)，并用直接測序法進行驗證［5］。任何一個位點有突變均被視為“未通過”，即篩查結(jié)果陽性。

1.4 隨訪 將聽力篩查和基因篩查結(jié)果以短信、電話或郵件形式通知家長，對未通過新生兒重點隨訪，定期對其聽力、語言發(fā)育情況及干預(yù)情況等進行隨訪及防聾指導(dǎo)。

2 結(jié)果

2.1 聽力篩查結(jié)果 965例新生兒中，937例通過聽力初篩，初篩通過率為97.10%（937／965）；28例未通過初篩的新生兒均進行了復(fù)篩，18例未通過（1.87%，18／965），其中左、右耳未通過各2例，雙耳未通過14例。

2.2 聾病易感基因致病突變位點的檢測結(jié)果 965例中53例新生兒存在耳聾易感基因的突變，總體陽性率為5.49%（53／965）。

2.2.1 線粒體12Sr RNA基因篩查結(jié)果 965例中1例為12Sr RNA c.1555A＞G陽性，為致病突變，致病突變率為0.10%（1／965），該例聽力初篩、復(fù)篩雙耳均通過。

2.2.2 GJB2基因篩查結(jié)果 33例為GJB2基因突變，突變率為3.42%（33／965），其中28例為GJB2 235delC雜合突變，1例為GJB2 299_300del AT雜合突變，這29例中25例聽力初篩雙耳通過，4例復(fù)篩雙耳未通過；其余4例中2例為GJB2 235delC純合突變，1例為GJB2 235delc＆299_300del AT復(fù)合雜合突變，1例為GJB2 176_191de116＆235delC復(fù)合雜合突變，均為致病突變，致病突變率為0.41%（4／965），這4例聽力篩查雙耳均未通過。

2.2.3 SLC26A4基因篩查結(jié)果 16例為SCL26A4 IVS7-2A＞G雜合突變，1例為SLC26A4 2168A＞G雜合突變，1例為SCL26A4 1226G＞A雜合突變，突變率為1.87%（18／965），這18例中1例聽力復(fù)篩左耳未通過，1例右耳未通過，16例聽力初篩雙耳通過。

2.2.4 GJB3基因篩查結(jié)果 1例為GJB3 538C＞T雜合突變，聽力篩查通過。

2.3 聽力與聾病基因聯(lián)合篩查結(jié)果 965例中，聽力篩查與基因篩查均通過的有905例，均未通過的有11例，聽力篩查通過但基因篩查未通過的有42例，聽力篩查未通過但基因篩查通過的有7例（表1）。

表1 聽力篩查與基因篩查結(jié)果比較（例，%）

2.4 聽力學(xué)診斷結(jié)果 18例復(fù)篩未通過的新生兒中10例在3月齡時進行了聽力學(xué)診斷，其確診結(jié)果見表2。復(fù)篩未通過者失訪8例，耳聾基因篩查結(jié)果1例為GJB2 235delC純合突變，1例為GJB2 235delc＆299_300del AT復(fù)合雜合突變，1例為GJB2 176_ 191de116＆235delC復(fù)合雜合突變，5例正常。

表2 復(fù)篩未通過的10例新生兒耳聾基因篩查結(jié)果及3月齡時聽力學(xué)診斷結(jié)果

3 討論

先天性聽力障礙是新生兒最常見的先天性缺陷，新生兒聽力障礙發(fā)生率約為0.1%～0.3%，每年新出生的聾兒接近2.3萬（不包括遲發(fā)性聾及藥物性聾），均以中重度及極重度聾為主［6］。早期發(fā)現(xiàn)和診斷新生兒先天性聾的目的是及早干預(yù)，使之獲得最佳的聽力與言語發(fā)育時機。有文獻報道OAE用于新生兒聽力篩查的靈敏度約為99.51%，特異性為68.65%［7］，ABR的敏感性為100%，特異性為94%～99.1%不等［8］，所以目前耳聲發(fā)射結(jié)合聽性腦干反應(yīng)被認(rèn)為是最有效的聽力篩查方式［9］，但此方法仍會漏診一些遲發(fā)性聾及藥物性聾患兒。本組965例新生兒中，28例初篩未通過，18例未通過復(fù)篩，最終確診6例先天性聽力損失，也說明了OAE和AABR聯(lián)合篩查的有效性。

某些病毒感染及環(huán)境因素可導(dǎo)致先天性聽力損失，如風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒感染，早產(chǎn)、腦外傷、出生前或出生后感染等。近年來隨著分子生物學(xué)及遺傳學(xué)的迅速發(fā)展，耳聾的遺傳因素已逐步被確定，從遺傳學(xué)的角度能解釋50%以上的重度先天性聾［10］。文獻報道［3］線粒體12Sr RNA、GJB2、GJB3、SLC26A4基因為我國最常見的引起耳聾的突變基因。因此，本研究在實施新生兒聽力篩查的同時對這四個基因進行了重點篩查。GJB2基因是引起非綜合型聾最常見的致病基因［10］，表現(xiàn)為常染色體隱性遺傳，也是我國耳聾患者最常見的致病基因。中國耳聾人群中13%～26.7%由GJB2突變導(dǎo)致，235delC是GJB2最常見的突變［3］。本研究發(fā)現(xiàn)2例GJB2基因c.235delC純合突變，1例為GJB2 235delc＆299_300del AT復(fù)合雜合突變，1例為GJB2 176_191de116＆235delC復(fù)合雜合突變，均為致病突變，這4例新生兒出生時即表現(xiàn)為中度-重度聾，且聽力篩查初篩與復(fù)篩均未通過，說明聽力篩查與基因篩查可以相互印證。經(jīng)詢問家族史，1例GJB2基因c.235delC純合突變的患兒母親出生時即為耳聾患者，該患兒家長有再生育的打算，遂對患兒的父母均進行了基因檢測，發(fā)現(xiàn)母親為GJB2基因c.235delC純合突變，父親為GJB2基因c.235delC雜合突變，生育正常聽力兒童的概率為25%，因此建議其父母在懷孕的前三個月內(nèi)可行產(chǎn)前耳聾基因檢測，避免再孕育聾兒；其余患兒家族中無耳聾患者。235delC在正常人群中其攜帶率為1%～2%［11］，在中國，常見GJB2基因突變位點有235delC、176del16、299del AT［12］。本研究中有29例為GJB2基因突變攜帶者，其攜帶率為3.01%（29／965），其中25例初篩通過，說明正常新生兒中GJB2突變者占有一定的比例。

迄今為止SLC26A4基因被認(rèn)為是僅次于GJB2突變引起遺傳性感音神經(jīng)性聾的遺傳學(xué)病因。SLC26A4基因與前庭水管擴大及Pendred綜合征密切相關(guān)。SLC26A4基因突變患者在出生時可不表現(xiàn)為聽力損失，而在頭部震蕩外傷或感冒后出現(xiàn)聽力損失。國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，92.1%的大前庭水管患者存在SLC26A4基因的突變［13］。SLC26A4基因雜合攜帶與GJB2基因的雜合攜帶不會致病，但日后與具有相同基因型的攜帶者婚配時，其后代有25%的可能發(fā)生聽力損失，對于此類攜帶者應(yīng)給與追蹤隨訪，并在婚配前及懷孕時予以適當(dāng)?shù)母深A(yù)，可避免耳聾患兒的出生。本組新生兒中發(fā)現(xiàn)18例為SCL26A4基因雜合突變，占總篩查人數(shù)的1.87%

（18／965），僅次于GJB2的突變攜帶率，此18例均無耳聾家族史，其中16例通過了聽力篩查，需對其進行隨訪，防止遲發(fā)性聾的發(fā)生。

線粒體DNA突變?yōu)槟赶颠z傳，與藥物性聾相關(guān)，線粒體12Sr RNA c.1555A＞G、c.1494C＞T為兩個常見突變位點，有此類基因突變的患者禁用氨基糖苷類藥物，以防“一針致聾”。本研究中1例新生兒為12Sr RNA c.1555A＞G陽性，為致病突變，出生時聽力正常，雙耳聽力篩查均通過，已告知患者家屬該患兒將來禁用氨基糖苷類抗生素，從而避免出現(xiàn)藥物性聾。經(jīng)詢問家族史，該患兒的母親為氨基糖苷類藥物致聾患者，通過家系分析，可對家系中尚未發(fā)病的母系家庭成員予以預(yù)警，進行宣教，是一種有效的前瞻性防聾策略。

GJB3基因能導(dǎo)致常染色體顯性或者隱性遺傳性非綜合征型聾，該基因最初被發(fā)現(xiàn)在中國患者中導(dǎo)致常染色體顯性遺傳非綜合征型聾（antosomal dominant non-syndromic semsorineural hearing loss，DFNA），其錯義突變和無義突變與高頻聽力損失有關(guān)，其復(fù)合雜合突變423-425del ATT和423A＞G能導(dǎo)致隱性非綜合征型聾［14］，該基因在正常人群中突變頻率較小，本研究發(fā)現(xiàn)1例為GJB3 538C＞T雜合突變，其聽力篩查結(jié)果正常，需要定期隨訪。

本研究中，18例聽力篩查未通過的新生兒中，有7例基因篩查未見異常，可能與目前仍有部分耳聾基因未被確定及檢測手段的局限性有關(guān)。目前通過耳聾基因檢測只能夠診斷出60%～80%遺傳性聾的準(zhǔn)確致病基因［15，16］?；蚝Y查異常但聽力篩查通過的有42例，一方面與某些突變?yōu)榉侵虏⊥蛔冇嘘P(guān)，另一方面也可能與遲發(fā)性聾有關(guān)，均需加強隨訪，監(jiān)測聽力。

本研究所采用的基因檢測方法具有檢測位點多、覆蓋率高、通量高、檢測周期短、準(zhǔn)確率高、成本低等優(yōu)點［5］，能夠達到臨床對耳聾基因檢測的要求。本研究結(jié)果顯示，聽力及聾病易感基因聯(lián)合篩查可發(fā)現(xiàn)部分聽力篩查不能發(fā)現(xiàn)的藥物性聾和遲發(fā)性聾患兒，但目前仍有部分耳聾基因未被確定，且當(dāng)前的檢測手段還難以普查到已發(fā)現(xiàn)的所有耳聾致病基因，故基因篩查不能替代聽力篩查。李雋等［17］認(rèn)為單純通過聽力篩查會遺漏相當(dāng)一部分潛在的耳聾及耳聾高危兒，本研究965例新生兒中發(fā)現(xiàn)線粒體12Sr RNA、GJB2、GJB3和SCL26A4四個聾病易感基因突變位點陽性率為5.49%，高于聽力復(fù)篩未通過率1.87%，證實了這一觀點。隨著分子遺傳學(xué)技術(shù)的不斷進步，相信不久的將來會出現(xiàn)一套更加完善的新生兒聽力與基因聯(lián)合檢測的篩查模式。

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（2014-08-18收稿）

（本文編輯 李翠娥）

A Study of Universal Newborn Hearing Screening Combined with Deafness Predisposing Gene Screening in 965 Newborns

Wang Ying*，Guan Bing，Ye Shiming，Xu Li，Chang Lingmei，Yu Aimin
（*Department of Otorhinolaryngology，Clinical College of Yangzhou University，Yangzhou，225001，China）

Objective To investigate the clinical significance of universal newborn hearing screening for deafness predisposing genes in newborns.Methods A total of 965 newborns at Subei Hospital in Yangzhou were taken blood samples at heel and received for deafness predisposing genes screening.The most common deafness genes were detected by gene sequencing，including mt12Sr RNA c.1555A＞G，c.1494C＞T，GJB2 35delG，167del T，176_ 191del16，235delC，299_300del AT，SLC26A4 281C＞T，589G＞A，IVS7-2A＞G，1174A＞T，1226G＞A，1229C＞T，IVS15+5G＞A，1975G＞C，2027T＞A，2162C＞T，2168A＞G，GJB3538C＞T，547G＞A.At the same time，all infants received hearing screening.Otoacoustic emission（OAE）was used as the first step screening，and OAE combined with auto-auditory brainstem response（AABR）detection were used as the second step screening. Results Fifty-three cases（5.49%）had partial gene mutation，one case of 12Sr RNA gene mutation，33 cases of GJB2 gene mutation，18 cases of SCL26A4 gene mutation，one case of GJB3 gene mutation.Of 965 cases，28 cases failed to pass hearing screening while 18 cases did not pass rescreening.There were 10 cases taking audiological diagnosis at the age of three months.Six cases were confirmed with hearing loss.There were 905 cases p assed the

Newborn； Hearing screening； Deafness； Gene

10.3969／j.issn.1006-7299.2015.03.009

時間：2015-3-4 10：26

R764.04

A

1006-7299（2015）03-0248-04

△江蘇省社會發(fā)展項目（BE2012706）資助

1 揚州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院耳鼻咽喉頭頸外科（揚州 225001）； 2 揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院江蘇省蘇北人民醫(yī)院耳鼻咽喉科

王瑩，女，江蘇人，在讀研究生，主要研究方向為耳科學(xué)。

關(guān)兵（Email：aliceguan0685@sina.com）

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www.cnki.net／kcms／detail／42.1391.R.20150304.1026.010.html

hearing screening and genetic screening，11 failed born hearing and gene screening.Conclusion That the newborn gene screening was added into the hearing screening can be helpful to find out the deafness predisposing genes and drug-induced or late-onset hearing loss.