馮曉丹，葉莉莉，高玲娟，顧平清(江蘇省南京市婦幼保健院檢驗(yàn)科 210004)

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·論 著·

人類免疫缺陷病毒抗體檢測(cè)“灰區(qū)”設(shè)置的探討*

馮曉丹，葉莉莉，高玲娟，顧平清
(江蘇省南京市婦幼保健院檢驗(yàn)科 210004)

目的 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體，旨在設(shè)置科學(xué)、合理的HIV抗體檢測(cè)的“灰區(qū)”范圍，減少HIV抗體陽性的漏檢率。方法 采用ELISA對(duì)吸光度值/臨界值(S/CO)介于大于0.8～<1.2的30例臨界值患者血清進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)，以此S/CO值，設(shè)置“灰區(qū)”范圍；對(duì)于S/CO介于灰區(qū)的標(biāo)本進(jìn)行免疫印跡確證。結(jié)果 設(shè)置灰區(qū)參考范圍為0.796～1.204；共有46例處于“灰區(qū)”的血清標(biāo)本，經(jīng)免疫印跡確證為陽性3例，不確定1例。結(jié)論ELISA檢測(cè)HIV抗體應(yīng)設(shè)置合理的“灰區(qū)”范圍，對(duì)灰區(qū)的標(biāo)本進(jìn)行確證，對(duì)減少HIV抗體陽性漏檢具有重要的臨床意義。

HIV抗體； 灰區(qū)； 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引發(fā)的一種免疫缺陷性疾病[1]。到2010年，我國HIV感染者已達(dá)1 000萬，嚴(yán)重威脅著人類健康[2]。為了有效控制艾滋病的傳播，WHO和我國衛(wèi)生部將酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)首推為HIV抗體篩查方法[3-4]。在ELISA檢測(cè)HIV抗體過程中，對(duì)Cut-off值的設(shè)定尤為重要，而接近Cut-off值的結(jié)果往往難以判斷，研究者將其定義為“灰區(qū)”[5]。本研究旨在根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，科學(xué)、合理地設(shè)置HIV抗體檢測(cè)的“灰區(qū)”范圍，最大限度地檢出可疑標(biāo)本，防止HIV抗體弱陽性標(biāo)本的漏檢。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年1月至2014年12月南京市婦幼保健院門診患者28 760份血液標(biāo)本，無溶血、脂血、黃疸等，收集后-20 ℃保存。

1.2 儀器與試劑 HAMILTON全自動(dòng)酶免分析儀(瑞士Hamilton Bonaduz AG)。HIV(1+2型)ELISA試劑盒由北京萬泰藥業(yè)股份有限公司提供(國藥準(zhǔn)字S20000024)，批號(hào)分別為I201102038034、I201101028021、I201105088083；HIV(1+2型)ELISA試劑盒由英科新創(chuàng)(廈門)科技公司提供(國藥準(zhǔn)字S20000039)，批號(hào)分別為2011086615、2011126622、2011116618、2011076613。

1.3 方法 ELISA嚴(yán)格按照試劑盒說明書流程以及初篩試驗(yàn)流程進(jìn)行操作。根據(jù)說明書判定北京萬泰HIV診斷試劑的Cut-off值為0.124，英科新創(chuàng)HIV診斷試劑的Cut-off值為0.105。將原始吸光度值/臨界值(S/CO)，根據(jù)回歸方程計(jì)算S/CO的平均值為1時(shí)(臨界值血清)的CV值?；覅^(qū)的上限和下限計(jì)算公式分別為：灰區(qū)上限(S/CO值)=1+2CV，灰區(qū)下限(S/CO值)=1-2CV[6]。

2 結(jié) 果

2.1 HIV抗體試驗(yàn)“灰區(qū)”的參考范圍 將處于0.8

表1 HIV體抗體臨界值血清所測(cè)吸光度、S/CO值

2.2 灰區(qū)標(biāo)本確證結(jié)果 28 760份血清標(biāo)本經(jīng)免疫印跡確證為陽性的共計(jì)8例(表2僅示例陽性結(jié)果3例，其余5例陽性結(jié)果未處于灰區(qū))，經(jīng)ELISA試劑初篩S/CO值在0.796～1.204的血清共計(jì)46例(表2僅示例23例結(jié)果)，將其確定為灰區(qū)標(biāo)本。經(jīng)免疫印跡確證為陽性的3例，占比例為6.52%(3/46)；不確定1例，占比例為2.17%(1/46)。減少HIV抗體漏檢率為25%(2/8)，假陽性比例為86.9%(20/23)，見表2。

表2 “灰區(qū)”標(biāo)本經(jīng)確證的陽性結(jié)果

3 討 論

臨床實(shí)驗(yàn)室針對(duì)HIV抗體測(cè)定時(shí)，ELISA均需要設(shè)置一段“灰區(qū)”范圍[7]，然而目前，國內(nèi)定性試劑生產(chǎn)廠家并未對(duì)其“灰區(qū)”范圍進(jìn)行科學(xué)、合理地設(shè)定，而且各實(shí)驗(yàn)室對(duì)于“灰區(qū)”設(shè)定的觀點(diǎn)眾說不一。在實(shí)際的HIV抗體檢測(cè)時(shí)，設(shè)置合適的“灰區(qū)”范圍能最大限度地減少陽性漏檢的問題，“灰區(qū)”范圍的確定使得測(cè)定結(jié)果假陽性與假陰性發(fā)生率降低[8]。在本研究中，作者探討了“灰區(qū)”范圍的合適范圍，將處于0.8

根據(jù)本試驗(yàn)室設(shè)置的“灰區(qū)”范圍，進(jìn)一步將S/CO值處于“灰區(qū)”的血清共計(jì)46例進(jìn)行免疫印跡確證，結(jié)果顯示陽性3例，占比例為6.52%(3/46)，不確定1例，占比例為2.17%(1/46)。原因分析：(1)國內(nèi)HIV抗體篩查試劑盒，多采用ELISA雙抗體(抗原)夾心法，但ELISA診斷試劑的局限性使得不能及時(shí)捕捉HIV抗體檢測(cè)的窗口期[9]，針對(duì)這些標(biāo)本的檢測(cè)，其結(jié)果可能為陰性或處在灰區(qū)，但具有傳染性，如表2中的標(biāo)本2。(2)部分患者標(biāo)本，經(jīng)多次檢測(cè)，HIV抗體的S/CO值始終處在“灰區(qū)”范圍，此為真抗體弱陽性，其原因可能為基因片段的突變導(dǎo)致試劑盒檢測(cè)吸光度值降低[10]，如表2中的標(biāo)本1、3、4。且本研究揭示，針對(duì)灰區(qū)的標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步確證，HIV抗體漏檢率為25%(2/8)，假陽性比例為86.9%(20/23)?；诖?，合理、科學(xué)地設(shè)置灰區(qū)范圍，能使ELISA最大限度地檢出陽性標(biāo)本，防止弱陽性標(biāo)本的漏檢，可有效保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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Study on gray area setting in HIV antibody detection*

FENGXiao-dan,YELi-li,GAOLing-juan,GUPing-qing
(DepartmentofClinicalLaboratory,NanjingMaternityandChildHealthCareHospital,Nanjing,Jiangsu210004,China)

Objective To set the scientific and rational gray area range of HIV antibody detection by ELISA for reducing the missed detection rate of HIV antibody detection.Methods Thirty serum specimens with the critical value range of 0.8

HIV antibody； gray area； enzyme-linked immunosorbent assay

江蘇省南京市科技發(fā)展計(jì)劃資助項(xiàng)目(201308041)。

馮曉丹，女，主管檢驗(yàn)醫(yī)師，碩士，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)相關(guān)工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.22.015

A

1672-9455(2015)22-3332-02

2015-06-11

2015-09-11)