陳良勝 方應(yīng)權(quán)

（1 河南省新縣人民醫(yī)院藥劑科，新縣 465550；2 重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，重慶 404120）

紫花大葉柴胡（Bupleurum longiradiatum var. porphyranthum） 為傘形科柴胡屬植物的一種，多年生草本，為三峽區(qū)域民間用藥，在三峽庫區(qū)的巫溪、石柱、巴東和巫山等地使用較為廣泛，療效確切，有發(fā)表祛風(fēng)、清泄心火、清肝利膽、通經(jīng)之功效，主治肝氣不舒、虛勞骨蒸、月經(jīng)不調(diào)、感冒、黃疸等癥[1-2]。目前已知該藥材根部主要含有柴胡皂苷a、c、d，此外根中尚含有揮發(fā)油，植物甾醇和有機(jī)酸等，莖葉、地上部分尚含有黃酮類化合物[3]。柴胡皂苷的提取方法很多，多為傳統(tǒng)提取方法，提取耗時(shí)費(fèi)力。閃式提取法紫花大葉柴胡中柴胡皂苷的研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。近幾年來閃式提取在中草藥有效成分提取方面發(fā)展迅速、潛力巨大，其主要特點(diǎn)是高效節(jié)能、操作簡便、省時(shí)經(jīng)濟(jì)、適應(yīng)范圍廣，且提取溫度低，對有效成分的破壞小。相比傳統(tǒng)方法有著巨大優(yōu)勢。

1 材料和儀器

1.1 材料及鑒定紫花大葉柴胡[4-5]2014年7月下旬采集于重慶巫溪海拔約1500 m的紅池壩，經(jīng)重慶師范學(xué)院陳邵成教授鑒定為傘形科 (Umbelliferae) 柴胡屬紫花大葉柴胡。

2 閃式提取法正交實(shí)驗(yàn)

2.1 正交試驗(yàn)各個(gè)因素水平的確定[6-7]選取提取溶液濃度，提取時(shí)間及料液比三個(gè)因素對黃酮提取率進(jìn)行考察，依次對單因素進(jìn)行考察，以確定每個(gè)因素的水平。松針黃酮為一類極性較大的有機(jī)化合物，一般提取方法采用不同濃度的乙醇溶液，本研究采用50%，60%，70%，80%濃度的乙醇溶液，每個(gè)梯度平行6次試驗(yàn)，依據(jù)上述黃酮的測定方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在乙醇濃度為70%時(shí)，黃酮含量較高，因此選擇60%，70%，80%作為乙醇濃度的三個(gè)水平。同理采用同樣的方法，確定料液比和提取時(shí)間的水平。

2.2 閃式提取法 選取影響閃式提取工藝的三個(gè)因素，即乙醇濃度（A），料液比（B），提取時(shí)間（C） 為考察因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)三個(gè)水平，選取L9（34）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取柴胡藥材粗粉50 g，根據(jù)因素水平表L9（34），進(jìn)行閃式提取，過濾，濾液定溶至1000 mL量瓶中，進(jìn)行含量測定。實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果見表1、2。

表1 因素水平表

表2 柴胡提取工藝正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （mg/g）

圖1 提取因素對提取率影響表

由上表可知A2B2C2為閃式提取最佳工藝

3 方差分析

將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)代入SPASS14軟件中，進(jìn)行方差分析，見表3。結(jié)果表明：A.B因素具有顯著差異，A2＞A3＞A1，故選擇A2；B因素B2＞B3＞B1，故選擇B2；C因素?zé)o顯著性差異，根據(jù)能耗和提取效率考慮選擇C2，因此根據(jù)表2中含量測定的結(jié)果顯示，采用A2B2C2工藝條件，柴胡皂苷的含量最高，故定為最優(yōu)工藝，即以12倍量75%乙醇，閃式提取2.0 min。

表3 方差分析表

4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

為驗(yàn)證優(yōu)選工藝的可靠性和重現(xiàn)性，取柴胡150 g，按最優(yōu)工藝進(jìn)行閃式提取，平行操作6份，柴胡皂苷含量分別為15.42，15.86，16.01，15.46，16.02，15.43(mg/g)，RSD＜2.01%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

5 乙醇回流提取法[8]

柴胡在工業(yè)上廣泛采取加熱回流提取有效成分柴胡皂苷，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道加熱回流提取柴胡中柴胡皂苷的優(yōu)化工藝為乙醇體積濃度75%，12倍量乙醇，一般提取三次，每次3 h。按此條件制備3批樣品，并按照“柴胡皂苷的含量測定”方法測定，計(jì)算平均結(jié)果與閃式提取的優(yōu)化結(jié)果進(jìn)行對比，見表4。

表4 閃式提取與加熱回流提取的比較

從表4可以看出，閃式提取法與傳統(tǒng)加熱回流提取法相比，在提取乙醇濃度基本相同的情況下，提取時(shí)間僅為后者的1/90，且閃式提取法柴胡皂苷含量較高。

6 討論

通過試驗(yàn)得到了柴胡皂苷閃式提取的最優(yōu)工藝條件，即75%的乙醇，料液比1∶12，閃式提取2.0 min。該方法提取效率高、提取時(shí)間短、操作簡單、生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)。與傳統(tǒng)提取方法相比，閃式提取時(shí)間短，僅為乙醇加熱回流提取的1/90，且閃式提取法柴胡皂苷含量較高。采用正交設(shè)計(jì)的方法，應(yīng)用閃式提取新技術(shù)，優(yōu)選出紫花大葉柴胡中柴胡皂苷提取新工藝是有效可行的。

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[8]霍務(wù)貞，孫嚴(yán)彤，朱盛山.柴胡有效成分提取條件的研究[J].廣東藥學(xué)，2005，15(4):122.