金煜文 陳 凱 顧性初 蔡金娜 張 杰*

（1 上海中醫(yī)藥大學中藥學院，上海 201203；2 美迪西普亞醫(yī)藥科技（上海） 有限公司，上海 201203）

苦參凝膠是由貴陽新天藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的具有抗菌消炎作用的陰道用藥，已在臨床使用多年，其主要成分為苦參總堿，臨床上廣泛用于宮頸糜爛、赤白帶下、滴蟲性陰道炎及陰道霉菌感染等婦科慢性炎癥[1，2]。根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導原則》（2014年5月），本研究于2014年10月—2015年5月在通過GLP認證的美迪西普亞醫(yī)藥科技（上海） 有限公司藥物安全評價中心進行，為臨床安全使用苦參凝膠提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物 苦參凝膠及基質(zhì)均有貴陽新天藥業(yè)股份有限公司提供，苦參凝膠，批號140814；苦參凝膠（基質(zhì)），批號140901。

陽性對照品的制備：在黃燈下稱取需要量的2，4-二硝基氯苯至合適的容器中，在超凈臺中將指定量的無水乙醇加至該容器中，混合物被渦旋至均一，為淡黃色色澄清溶液。

1.2 受試動物及飼養(yǎng)條件

1.2.1 受試動物Hartley豚鼠：SPF級，60只，雌性，體重283.2～411.7 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2012-0001，簽發(fā)單位：北京市科學技術(shù)委員會。實驗動物質(zhì)量合格證號：11400700076304。

1.2.2 飼養(yǎng)條件 每只豚鼠單獨籠養(yǎng)在環(huán)境可調(diào)控房間的不銹鋼絲網(wǎng)動物籠中。房間的溫濕度每天記錄兩次，實驗中溫度和相對濕度范圍分別為20.9 ~ 22.6 °C和50~56 %。明暗交替照明每天大約各12小時。自由攝取SPF豚鼠生長繁殖飼料和實驗動物飲用水。

1.3 實驗方法

1.3.1 分組60只雌性豚鼠根據(jù)體重水平隨機分為4組，分別為高劑量組（20只）、低劑量組（20只）、基質(zhì)組（10只） 以及陽性對照組（10只）。

1.3.2 劑量設(shè)計 苦參凝膠臨床用法用量為“每晚一支，每支裝5 g”，密度為1.07 g/mL，即1次/d，4.67 mL/次。高劑量組動物1次/d，0.8 mL/次；低劑量組動物1次/d，0.4 mL/次；基質(zhì)組動物1次/d，0.8 mL/次。陽性對照組在誘導期給予1 %（W/V） 2，4-二硝基氯苯1 次/d，0.4 mL/次，在 激 發(fā) 期 給 予2 % （W/V）2，4-二硝基氯苯1次/d，0.4 mL/次。采用經(jīng)皮涂抹給藥，第一階段為誘導期，試驗第1、8、15日，共3次給予動物。第二階段為激發(fā)期，在誘導期末次給藥后第14日一次激發(fā)，首次給藥定義為試驗第一天（D1）。

1.3.3 給藥 誘導期：試驗前約24小時，將豚鼠背部左側(cè)去毛，去毛范圍為6 cm×6 cm。將受試物噴涂在豚鼠背部左側(cè)4 cm×4 cm的去毛區(qū)域內(nèi)，陽性對照品也涂抹在相應(yīng)區(qū)域內(nèi)；給藥后1~2分鐘，須待凝膠中溶劑揮發(fā)盡干燥后，以一層玻璃紙覆蓋，再以無刺激膠布封閉固定6小時后，移去覆蓋物，清洗殘留受試樣品。每次給藥前，每組動物給藥區(qū)相應(yīng)位置重新去毛。

激發(fā)期：試驗前約24小時，將豚鼠背部左側(cè)去毛，去毛范圍為6 cm×6 cm。將受試物噴涂在豚鼠背部左側(cè)4 cm×4 cm的去毛區(qū)域內(nèi)，陽性對照品也涂抹在相應(yīng)區(qū)域內(nèi)；給藥后1~2分鐘，須待凝膠中溶劑揮發(fā)盡干燥后，以一層玻璃紙覆蓋，再以無刺激膠布封閉固定6小時后，移去覆蓋物，清洗殘留受試樣品。

1.4 指標觀察 所有動物每天進行兩次籠邊觀察，觀察內(nèi)容包括發(fā)病、損害、死亡率和供食供水情況。實驗過程中所有給藥動物，每天進行一次詳細臨床觀察，觀察包括但不僅限于：皮膚，毛，眼，耳，鼻，口腔，胸部，腹部，外生殖器，四肢，呼吸及循環(huán)系統(tǒng)，自主效應(yīng)（如流涎），神經(jīng)系統(tǒng)（如震顫，抽搐，應(yīng)激反應(yīng)以及反常行為）。

各次致敏后1和24 h觀察各組動物全身過敏及過敏反應(yīng)情況。激發(fā)期給藥后24 h和48 h觀察豚鼠皮膚反應(yīng)情況，按皮膚過敏反應(yīng)評分標準（表1） 對每只動物的皮膚過敏反應(yīng)評分。當受試物組動物出現(xiàn)激發(fā)側(cè)皮膚反應(yīng)積分≥2時，判為該動物出現(xiàn)皮膚變態(tài)反應(yīng)陽性，按皮膚過敏性評價標準（表2） 判定受試物的致敏強度。過敏反應(yīng)陽性接受標準：按《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導原則》“但輕-中度的致敏劑在加佐劑的試驗中至少30%和不加佐劑試驗中至少15%應(yīng)有反應(yīng)?！?/p>

表1 皮膚過敏反應(yīng)評分標準 [例（%）]

表2 皮膚過敏性評價標準 （%）

2 結(jié)果

2.1 臨床體征觀察 各動物誘導期及激發(fā)期詳細臨床觀察均未見明顯異常。

2.2 誘導后觀察結(jié)果 在誘導后1 h和24 h，各組動物皮膚均未見明顯紅斑和水腫等過敏反應(yīng)。

2.3 激發(fā)后觀察結(jié)果 激發(fā)24小時后，各組均未出現(xiàn)皮膚過敏反應(yīng)。激發(fā)48小時后，陽性對照組1只動物（1/10例） 出現(xiàn)輕微紅斑，1只動物（1/10例） 出現(xiàn)中度紅斑、輕度水腫，2只動物（2/10例） 出現(xiàn)輕度紅斑、輕度水腫?？鄥⒛z低、高劑量組及基質(zhì)組激發(fā)后均正常。

2.4 過敏評價 根據(jù)1.4項下過敏反應(yīng)判定標準可以得出，陽性對照組產(chǎn)生過敏反應(yīng)，過敏反應(yīng)發(fā)生率為30%，屬于中度致敏；苦參凝膠低、高劑量組和基質(zhì)組均未見局部過敏反應(yīng)。

3 討論

苦參凝膠的主要成分為苦參總堿，臨床上廣泛用于宮頸糜爛、赤白帶下、滴蟲性陰道炎及陰道霉菌感染等婦科慢性炎癥。本試驗發(fā)現(xiàn)，苦參凝膠皮膚給藥對豚鼠無明顯致敏作用。此外有很多研究[3-8]是在驗證苦參凝膠治療婦科炎癥等疾病的臨床療效的同時，觀察了其不良反應(yīng)的發(fā)生情況，結(jié)果均表明苦參凝膠的臨床不良反應(yīng)發(fā)生率低，無明顯毒副作用。

[1]胡珍真，高妍，張杰.苦參凝膠臨床應(yīng)用研究進展[J].中草藥，2014，21(45):3204-3207.

[2]劉東澤，胡珍真，張萍，等.苦參凝膠藥理作用與臨床研究進展[J].上海中醫(yī)藥雜志，2014，11:96-98.

[3]樊芝艷.評價苦參凝膠治療霉菌性陰道炎的有效性和安全性[J].中國醫(yī)藥導報，2009，6(34):77-78.

[4]田平.苦參凝膠聯(lián)合奧硝唑治療滴蟲性陰道炎42例[J].中國藥業(yè)，2013，14:110.

[5]黃彥霞.苦參凝膠聯(lián)合康婦消炎栓治療宮頸糜爛的臨床觀察[J].中外醫(yī)療，2012，25:117-118.

[6]王婉萍，張甦.苦參凝膠治療細菌性陰道炎40例[J].實用醫(yī)學雜志，2010，11:2009-2010.

[7]陳炳錦，葛亞娟，朱芳，等.甲硝唑聯(lián)合苦參凝膠治療滴蟲性陰道炎[J].中國婦幼保健，2009，29:4176-4177.

[8]孫桂華，陳炳錦，陳蕾，等.甲硝唑聯(lián)合苦參凝膠治療細菌性陰道病41例[J].南通醫(yī)學院學報，2009，6:503-504.