吳立國(guó)，韓淑英，石雪靜，張英，石亞靜，錢莊(開(kāi)灤醫(yī)療集團(tuán)錢家營(yíng)醫(yī)院，河北開(kāi)灤063000；河北聯(lián)合大學(xué))

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·基礎(chǔ)研究·

蕎麥花葉黃酮對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮功能的影響及機(jī)制

吳立國(guó)1，韓淑英2，石雪靜2，張英2，石亞靜2，錢莊2(1開(kāi)灤醫(yī)療集團(tuán)錢家營(yíng)醫(yī)院，河北開(kāi)灤063000；2河北聯(lián)合大學(xué))

摘要：目的觀察蕎麥花葉黃酮(FBFL)對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮功能的影響，并探討其機(jī)制。方法取禁食24 h的大耳白兔10只，猛擊后枕部致死，立即剖開(kāi)腹腔，制備離體回腸腸管。腸管上端接肌張力換能器，下端固定于金屬鉤上，調(diào)整腸管初負(fù)荷為2 g，平衡30 min。待腸管收縮穩(wěn)定后開(kāi)始加入FBFL，F(xiàn)BFL溶液濃度為0、0.5、1、2、4、8、16、32、64 mg/mL，每個(gè)濃度的體積為20 μL，觀察給藥前后回腸平滑肌平均收縮力和收縮頻率。采用M受體阻斷劑(阿托品)孵育肌條，觀察不同濃度(2、4、8、16、32、64 mg/mL)FBFL聯(lián)合10 mg/mL阿托品對(duì)離體回腸平滑肌舒縮功能的影響。結(jié)果0、0.5、1、2、4、8、16、32、64 mg/mL的FBFL作用后回腸平滑肌收縮力分別為(2.77±0.30)、(2.90±0.08)、(2.97±0.10)、(3.11±0.20)、(3.26±0.11)、(3.33±0.15)、(3.57±0.12)、(3.56±0.14)、(3.57±0.18)g，收縮頻率分別為(7.41±0.40)、(8.17±0.52)、(8.74±0.52)、(9.37±0.41)、(10.25±0.11)、(10.69±0.23)、(10.43±0.28)、(10.48±0.23)、(10.25±0.46)次/min，F(xiàn)BFL在0.5、1、2、4、8、16 mg/mL范圍內(nèi)對(duì)離體回腸平滑肌的收縮作用有一定量效關(guān)系(P均<0.01)；FBFL能拮抗阿托品對(duì)家兔離體腸管平滑肌收縮的抑制作用，在4、8、16 32、64 mg/mL范圍內(nèi)有一定的量效關(guān)系(P均<0.01)。結(jié)論FBFL能增強(qiáng)家兔離體回腸平滑肌的收縮功能，其機(jī)制可能與激動(dòng)M受體相關(guān)。

關(guān)鍵詞：蕎麥花葉黃酮；家兔；離體回腸平滑肌；阿托品

蕎麥(俗稱甜蕎)為蓼科植物，含較高的黃酮類化合物。目前對(duì)苦蕎麥、金蕎麥的研究較多，而蕎麥主要用作食品，對(duì)其研究較少。蕎麥中主要作為糧食應(yīng)用的成分是蕎麥種子，結(jié)果造成大量的花葉被廢棄。蕎麥花葉黃酮(FBFL)為其花葉中提取的黃酮類成分。近年研究[1～3]表明,FBFL具有降血糖、降血脂、抗氧化等多種生物學(xué)作用,但其對(duì)腸道平滑肌活動(dòng)的影響未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察FBFL對(duì)家兔離體回腸平滑肌收縮功能的影響，并探討其作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料①藥品與試劑：蕎麥花葉采自內(nèi)蒙古庫(kù)倫旗，經(jīng)河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)鑒定確認(rèn)。硫酸阿托品 (atropin)注射液(貴州光正制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)100806)。酸性殼聚糖。臺(tái)氏生理鹽溶液(NaCl 6.9 g，KCl 0.35 g，MgSO40.295 g，KH2PO40.16 g，NaHCO32.1 g，CaCl20.275 g)。②儀器：HW-400S 恒溫平滑肌槽，BL-420+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，購(gòu)自成都泰盟科技有限公司。③實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康大耳白兔，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，雌性，無(wú)孕，購(gòu)自北京沙河通利試驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司，合格證號(hào)：SCXK(京)2010-0004。

1.2方法

1.2.1蕎麥花葉黃酮的制備自然干燥的蕎麥花葉，粉碎，用去離子90 ℃加熱提取2次，合并濾液，濃縮，加酸性殼聚糖攪拌，趁熱過(guò)濾，濾液靜置沉淀，過(guò)濾得黃色沉淀物，為總黃酮(采用紫外分光光度法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)得黃色沉淀物中總黃酮含量達(dá)95%)[4]。

1.2.2家兔離體回腸腸管的制備參考文獻(xiàn)[5]方法，將10只大耳白兔禁食24 h，猛擊后枕部致死，立即剖開(kāi)腹腔，分離回腸，去除腸系膜，分離出長(zhǎng)約25 cm的腸管，立刻置于37 ℃充入95%O2和5%CO2的混合氣體的臺(tái)氏液中，將腸管分成長(zhǎng)2～2.5 cm 數(shù)段，用臺(tái)氏液將腸內(nèi)容物輕輕沖洗干凈后備用。

1.2.3FBFL對(duì)離體回腸平滑肌收縮頻率及張力的影響觀察打開(kāi)BL-420+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，調(diào)零，定標(biāo)，在一通道輸入接口處安裝張力換能器。參照文獻(xiàn)[6]方法，取上述制備好的腸管，懸掛于置有臺(tái)氏液的麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)(液體容積 20 mL)，上端接肌張力換能器，下端固定于金屬鉤上，通入混合氣氣泡每秒1～2個(gè)為宜，調(diào)整標(biāo)本初負(fù)荷為2 g，平衡30 min。待腸管收縮穩(wěn)定后開(kāi)始給予FBFL，所用FBFL均以最終浴槽內(nèi)濃度計(jì)算。先描記一段正常腸平滑肌自律波形，再開(kāi)始加入FBFL。分別加入FBFL溶液(用臺(tái)式液配制)0(臺(tái)式液)、0.5、1、2、4、8、16、32、64 mg/mL，每個(gè)濃度的體積為20 μL，每次給藥后觀察5 min，分別記錄給藥前后5 min腸管的運(yùn)動(dòng)波形。之后用新鮮臺(tái)氏液沖洗3次，待腸管舒縮穩(wěn)定恢復(fù)正常后，再加入下一濃度藥物。實(shí)驗(yàn)重復(fù)8次(8個(gè)腸管)，觀察給藥前后腸平滑肌平均收縮力和收縮頻率。以給藥前后腸平滑肌收縮的平均張力和頻率計(jì)算促進(jìn)率。張力(頻率)促進(jìn)率(%)=[給藥后平均張力(幅度)或頻率-給藥前平均張力(幅度)或頻率]/給藥前平均張力(幅度)或頻率×100%[6,7]。

1.2.4FBFL聯(lián)合阿托品對(duì)離體回腸平滑肌舒縮功能的影響觀察離體腸管制備同上，待腸管舒縮穩(wěn)定后，分別向平滑肌槽中加入終濃度均為10 mg/mL阿托品，30 s后加入FBFL，F(xiàn)BFL濃度為2、4、8、16、32、64 mg/mL。其余操作參照1.2.3。

2結(jié)果

2.1FBFL對(duì)離體回腸平滑肌收縮頻率及張力的影響不同劑量FBFL作用離體回腸平滑肌后收縮頻率及張力比較見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，2～64 mg/mL的FBFL均能提高家兔離體回腸腸管腸平滑肌收縮的平均張力，且4～64 mg/mL 的FBFL表現(xiàn)的作用更為顯著(P<0.01)；0.5～64 mg/mL的FBFL均能顯著提高家兔離體腸管回腸平滑肌的收縮頻率(P<0.01),且二者均呈劑量依賴性。

表1　不同劑量FBFL作用離體回腸平滑肌后

注：與0 mg/mL相比，*P<0.05，**P<0.01。

2.2FBFL聯(lián)合阿托品對(duì)離體回腸平滑肌舒縮功能的影響不同劑量FBFL聯(lián)合阿托品作用離體回腸平滑肌后收縮張力及頻率比較表2。由表2可見(jiàn)，阿托品能明顯抑制家兔離體回腸腸管腸平滑肌的平均收縮力和收縮頻率(P<0.01)；4～64 mg/mL的FBFL能拮抗阿托品對(duì)家兔離體腸管腸平滑肌收縮力的抑制作用，呈劑量依賴性，其中8～64 mg/mL的FBFL作用更明顯(P<0.01)；2～64 mg/mL的FBFL能使受阿托品抑制的家兔離體腸管腸平滑肌的收縮頻率增加，呈劑量依賴性，其中4～64 mg/mL的FBFL作用更顯著(P<0.01)。

±s)

注：與未給藥物前相比，**P<0.01；與10 mg/mL阿托品相比，△P<0.05，△△P<0.01。 3討論

目前，蕎麥作為食品已占有一席之地，但作為藥品使用尚未引起足夠重視。在臨床應(yīng)用中，最理想的藥物是高效低毒的藥品，食品作為日常生活中的必需品，較為安全，而具有藥用價(jià)值的食品是相對(duì)更為安全的藥品，藥物或多或少具有一定的不良反應(yīng)，中藥相對(duì)于西藥來(lái)說(shuō)，不良反應(yīng)較小。在疾病治療中，選用藥食同源且具有高效低毒作用的植物作為藥品，是最佳的選擇。

蕎麥作為食藥兩用植物，目前還沒(méi)有實(shí)現(xiàn)高效利用。蕎麥分為甜蕎麥和苦蕎麥，甜蕎麥種子主要作為糧食應(yīng)用，而大量的花葉被廢棄。研究[8,9]發(fā)現(xiàn)，蕎麥花葉中含有豐富黃酮類成分，并具有抗氧化、降糖、降脂、免疫調(diào)節(jié)等作用，但其對(duì)腸道平滑肌活動(dòng)的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究觀察了FBFL對(duì)家兔離體回腸腸管平滑肌收縮功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BFL的作用性質(zhì)是興奮腸管平滑肌，不同劑量的FBFL能提高家兔離體腸管腸平滑肌的收縮張力及收縮頻率，且濃度越高作用越顯著；FBFL能拮抗阿托品對(duì)家兔離體腸平滑肌收縮張力和收縮頻率的抑制作用，并呈劑量依賴性。阿托品為M膽堿受體拮抗劑，而FBFL能有效拮抗阿托品對(duì)家兔離體腸管的抑制作用，證明 FBFL對(duì)腸道平滑肌收縮的促進(jìn)作用可能與激動(dòng)M膽堿受體相關(guān)。但FBFL的作用機(jī)制是否與影響腸平滑肌的其他因素有關(guān)，需進(jìn)一步研究；黃酮類成分很多，具體是哪一成分發(fā)揮作用，有待探索。

綜上所述，F(xiàn)BFL能增強(qiáng)家兔離體回腸平滑肌的收縮功能，其機(jī)制可能與激動(dòng)M膽堿受體有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 白靜,姜妍,韓婷,等.蕎麥花葉黃酮對(duì)2型糖尿病C57小鼠糖脂代謝及胰島素抵抗的影響[J].廣東醫(yī)學(xué),2012,33(13):1876.

[2] 韓淑英,王志路,儲(chǔ)金秀,等.蕎麥花葉黃酮對(duì) 2型糖尿病大鼠胰島素抵抗及肝組織PTP1B的影響[J].中國(guó)中藥雜志,2009,34(23):3114.

[3] Zhu LS, Ma XC, Han SY, et al. Effect of total flavones of buckwheat leaf on blood lipid and lipid peroxides[J]． Chin J Chlin Rehabilitation, 2004,8(25):5178.

[4] 韓淑英,張博男,張靜怡,等.蕎麥花葉黃酮對(duì)2 型糖尿病大鼠血糖穩(wěn)態(tài)的影響[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2013,35(23):2597-2599.

[5] 袁明勇,馬松濤,劉冬戀,等.桂枝油對(duì)兔離體腸平滑肌的運(yùn)動(dòng)作用機(jī)制[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2011,31(17):1482-1483.

[6] 劉紅艷,郭建生,王小娟,等.檀香不同部位提取物對(duì)豚鼠離體腸平滑肌功能的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012,33(2):241-244.

[7] 李晶晶,牛彥兵,石寧,等.延胡索炮制前后在金鈴子散中對(duì)大鼠腸管平滑肌的影響[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,33(2):94-97.

[8] 王樹(shù)華,韓淑英,耿菲,等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選甜蕎麥花葉中蘆丁的提取工藝[J].遼寧中醫(yī)雜志,2011,38(6):1178-1179.

[9] 馬俊利,李春鋼,張博男,等.甜蕎麥花葉化學(xué)成分研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(13):94-96.

(收稿日期：2014-09-12)

通信作者：韓淑英

基金項(xiàng)目：唐山市“十二五”重點(diǎn)科技支撐項(xiàng)目(10130203-3)。

中圖分類號(hào)：S517;R337.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2015)03-0024-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.03.008