李志敏丁福先楊明龍潘文中史本宏何秉寧賴燕平

（1.大理州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南大理 671000；2.大理市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南大理 671000；3.祥云縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,云南祥云 672100；4.祥云縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南祥云 672100）

家畜血吸蟲病抗體快速檢測(cè)試紙條使用的體會(huì)

李志敏1丁福先1楊明龍2潘文中3史本宏4何秉寧1賴燕平1

（1.大理州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南大理 671000；2.大理市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南大理 671000；3.祥云縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,云南祥云 672100；4.祥云縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南祥云 672100）

家畜血吸蟲病試紙條檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)單、節(jié)約時(shí)間、降低勞動(dòng)強(qiáng)度、提高檢測(cè)效率、易于推廣等優(yōu)點(diǎn)，深受基層歡迎。試紙條在大范圍推廣使用過程中有一些體會(huì)供同行參考。

家畜血吸蟲病 檢測(cè) 試紙條 體會(huì)

1 材料與方法

1.1家畜血吸蟲病抗體檢測(cè)試紙條、牛陰性血清、牛陽性血清、PBS液、蒸餾水、純凈水、自來水、可控溫培養(yǎng)箱等。血吸蟲病快速檢測(cè)試紙條，由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生產(chǎn)、云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供，待檢血清、血紙均采自血吸蟲病疫區(qū)。

1.2方法及步驟。第1步取1瓶PBS液1 ml，加到20 ml蒸餾水中，作為稀釋液。第2步取潔凈1.5 ml塑料離心管，編上待檢血清號(hào)，吸取稀釋后的PBS液100 μl加到離心管中。第3步吸取待檢血清100 μl，加入對(duì)應(yīng)編號(hào)的塑料離心管中，混勻。第4步取試紙條，將標(biāo)有箭頭端的試紙條直接插入血清中10 s，待見有血清滲到層析膜，將試紙條平放在桌面上。第5步結(jié)果判斷，5～20 min內(nèi)觀察結(jié)果。檢測(cè)線（中間靠箭頭端）及對(duì)照線（中間靠綠色標(biāo)簽端）均呈現(xiàn)紅色條帶（2條紅線）判為陽性；僅對(duì)照線（中間靠綠色標(biāo)簽端）呈現(xiàn)紅色條帶（1條紅線）判為陰性。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)成立

選擇陰性血清、陽性血清、PBS液、稀釋液驗(yàn)證試驗(yàn)是否成立？結(jié)果：試驗(yàn)成立，可以進(jìn)一步往下研究探討。（表1）

表1 驗(yàn)證試驗(yàn)所用的試劑是否有效，試驗(yàn)是否成立

2.2 稀釋液

由于部分地方?jīng)]有蒸餾水，所以設(shè)立蒸餾水、純凈水、自來水作對(duì)比，試驗(yàn)結(jié)果：純凈水可以代替蒸餾水。（表2）

表2 稀釋液對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

2.3 溫度

觀察判斷時(shí)間隨溫度高低而不同，通過設(shè)立15℃、20℃、25℃三組溫度作對(duì)比，結(jié)果：25℃是最佳的溫度，只需6 min。（表3）

表3 溫度對(duì)觀察判斷時(shí)間的變化

2.4 稀釋倍數(shù)

選擇不同的稀釋梯度，結(jié)果：1：1效果最佳。（表4）

表4 不同的稀釋倍數(shù)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響

2.5 血紙浸泡時(shí)間

選擇不同時(shí)間浸泡血紙，結(jié)果：40min效果最佳。（表5）

表5 血紙浸泡時(shí)間對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響

2.6 試紙條下面墊一物

在用試紙條檢測(cè)時(shí)，試紙條插入待檢血清后，不要將試紙條直接放在桌面上，在試紙條下面墊一物（玻璃棒、鉛筆、木棍都行），使其稍微傾斜，手持端向下、箭頭端向上懸空。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)表明：稀釋液在沒有條件獲取蒸餾水時(shí)，可以用純凈水（最好不要用礦泉水）代替，最佳的試驗(yàn)溫度是25℃，最佳的稀釋倍數(shù)是1：1即100μl稀釋液和100μl待檢血清，血紙浸泡時(shí)間最佳為40 min，使用試紙條時(shí)可以在下面墊一物，使其稍微傾斜，這樣可以減少待檢血清丟失，加快血清滲到層析膜，結(jié)果更準(zhǔn)確。

本試驗(yàn)通過使用簡(jiǎn)單的3個(gè)“1”（即：一瓶純凈水、一片血紙、一條試紙條）便可以準(zhǔn)確檢測(cè)出結(jié)果，可以在野外、農(nóng)戶家、養(yǎng)殖場(chǎng)等地點(diǎn)操作，既方便又實(shí)用。

項(xiàng)目來源：本項(xiàng)目為大理州科技局資助項(xiàng)目。

李志敏（1979-），男，彝族，碩士研究生，從事動(dòng)物疫病防控工作。