郭肖 公保索安 增太措 吾堅(jiān)旦增 吉毛才讓 羅多文色 李先加 多杰 李啟恩

(青海大學(xué) 1藏醫(yī)藥研究中心，青海 西寧 810016；2藏醫(yī)學(xué)院；3藏藥新藥開(kāi)發(fā)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

失眠主要由心理、藥物、疾病及環(huán)境等因素引起，其典型特征表現(xiàn)為入睡困難、睡眠不深和睡眠時(shí)間不足，嚴(yán)重失眠者不僅會(huì)表現(xiàn)出以上典型特征，而且甚至?xí)?dǎo)致徹夜不眠。失眠雖不能直接威脅生命，但可導(dǎo)致抑郁、焦慮及機(jī)體多功能受損，誘發(fā)糖尿病等代謝性疾病、免疫性疾病、心血管疾病和神經(jīng)性疾病等多種慢性和重大疾病，并影響疾病預(yù)后。失眠治療以減少患者痛苦、改善生活質(zhì)量、降低機(jī)體功能受損和減少抑郁、焦慮、糖尿病和心血管病風(fēng)險(xiǎn)為目標(biāo)〔1～6〕。

失眠在藏醫(yī)學(xué)中稱為“尼業(yè)”，是藏醫(yī)學(xué)“三因”中的“隆”因過(guò)盛和功能紊亂而導(dǎo)致，反過(guò)來(lái)，失眠作為藏醫(yī)學(xué)飲食、起居、時(shí)令和心理等“四大病因”之一的起居因素的重要內(nèi)容，會(huì)進(jìn)一步加重“隆”因的病變，引發(fā)“隆”病，而“隆”病的發(fā)生會(huì)誘發(fā)包括心血管系統(tǒng)疾病和精神性疾病在內(nèi)的各類(lèi)疾病〔7〕。因此，藏醫(yī)學(xué)在失眠的臨床治療中特別注重對(duì)“隆”的調(diào)理和正常睡眠時(shí)間的要求。尼極藏茶以藏醫(yī)治療“隆”病和改善睡眠的藥性理論出發(fā)，選用藏民族民間有食用習(xí)慣的藥食同源植物窄葉鮮卑花和寬葉蕁麻為原料藥材進(jìn)行炮制加工和配伍而成，具有良好的改善睡眠和調(diào)和“隆”病的作用〔7～10〕。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證尼極藏茶改善睡眠的功效。

1 資料與方法

1.1材料

1.1.1尼極藏茶的制備 100目尼極藏茶(窄葉鮮卑花和寬葉蕁麻1∶1，炒制)100 g，料液比1∶10，浸泡2 h，熱回流130℃提取3次，3 h/次，抽濾，合并濾液，濃縮干燥，計(jì)算得率(9.241±1.842)%。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)KM小鼠，雄性，9周齡，體重(45±2)g。購(gòu)于斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK(京)2016-0002，飼養(yǎng)條件為溫度(21±1)℃，相對(duì)濕度(60±5)%，適應(yīng)性生長(zhǎng)1 w，實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由進(jìn)食和飲水。

1.1.3其他實(shí)驗(yàn)材料 戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均為分析純，購(gòu)于上?；瘜W(xué)試劑公司。地西泮片(1.25 mg/片)，濟(jì)寧市安康制藥有限責(zé)任公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1一般觀察 每天觀察小鼠的毛色狀況、行為表現(xiàn)及精神狀況，分析有無(wú)異常，并在各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)前后稱重，觀察體重變化情況。

1.2.2不同劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時(shí)間的影響 雄性KM小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。分別按25、30、35、40、50、60 mg/kg的梯度劑量給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉溶液，然后測(cè)定不同劑量下戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時(shí)間的影響。

1.2.3不同劑量尼極藏茶對(duì)小鼠直接睡眠的影響 50只KM小鼠，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為生理鹽水組(等體積生理鹽水)，地西泮組(地西泮片10 mg/kg，1.25 mg/片)，尼極藏茶低、中、高劑量組(200 mg/kg、450 mg/kg、1 000 mg/kg)。灌胃不同藥物溶液，1次/d，0.1 ml/20 g，連續(xù)給藥66 d。實(shí)驗(yàn)期間記錄每日小鼠攝食量，且每2 d稱量體重 1 次，攝食飲水自由，觀察給藥后小鼠是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象，小鼠是否進(jìn)入睡眠以翻正反射消失為依據(jù)指標(biāo)，如超過(guò)1 min不能翻正則認(rèn)為翻正反射消失，確認(rèn)小鼠進(jìn)入睡眠。翻正反射恢復(fù)則認(rèn)為動(dòng)物覺(jué)醒，從翻正反射消失到最終恢復(fù)這段時(shí)間被認(rèn)為是小鼠的睡眠時(shí)間，記錄各組入睡小鼠的數(shù)量及睡眠時(shí)間長(zhǎng)短。睡眠潛伏期計(jì)算方法是入睡時(shí)間減去注射時(shí)間，睡眠時(shí)間的計(jì)算方法是睡眠結(jié)束時(shí)間減去入睡時(shí)間。

1.2.4不同劑量尼極藏茶對(duì)戊巴比妥鈉閾上劑量小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的影響 參照1.2.3分組及給藥末次給藥1 h后腹腔注射54 mg/kg戊巴比妥鈉，并記錄戊巴比妥鈉注射時(shí)間、小鼠入睡時(shí)間、小鼠睡眠結(jié)束時(shí)間，以觀察尼極藏茶和戊巴比妥鈉聯(lián)和用藥對(duì)小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的作用。

1.2.5不同劑量尼極藏茶對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠睡眠率的影響 參照1.2.3分組及給藥末次給藥1 h后腹腔注射32 mg/kg戊巴比妥鈉，記錄各組入睡動(dòng)物數(shù)，觀察尼極藏茶對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠睡眠發(fā)生率的影響(睡眠發(fā)生率=入睡動(dòng)物數(shù)/受試動(dòng)物數(shù)×100%)。

1.2.6不同劑量尼極藏茶對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的影響 參照1.2.3分組及給藥末次給藥后30 min，給每組小鼠按250 mg/kg腹腔注射巴比妥鈉，并記錄注射催眠劑量巴比妥鈉后各組小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行方差分析和χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1受試物對(duì)小鼠體重的影響 各組實(shí)驗(yàn)中，每個(gè)劑量組小鼠的毛色、行為及精神狀況均無(wú)異常。各組灌胃前體重、攝食量比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。 見(jiàn)表1。

表1 各組灌胃前后體重、體重?cái)z食量比較

2.2不同劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時(shí)間的影響 戊巴比妥鈉最佳劑量(閾劑量)的確定以實(shí)驗(yàn)小鼠100%進(jìn)入睡眠，且入睡時(shí)間不超過(guò)90 min為標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)確定的閾劑量為50 mg/kg。戊巴比妥鈉的最大閾下劑量為80%～90%小鼠翻正反射不消失的鎮(zhèn)靜劑量，本實(shí)驗(yàn)最終確定的最大閾下劑量為32 mg/kg。見(jiàn)表2。

表2 不同劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時(shí)間的影響

2.3尼極藏茶對(duì)小鼠直接睡眠的影響 3個(gè)劑量的藏茶連續(xù)灌胃66 d，各組翻正反射仍未消失，表示尼極藏茶對(duì)受試小鼠無(wú)直接睡眠作用。

2.4尼極藏茶協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對(duì)睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的影響 與生理鹽水組比較，地西泮組睡眠潛伏期明顯縮短，睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05,P<0.01)；藏茶各劑量組睡眠潛伏期縮短不明顯(P>0.05)，但其中、高劑量組睡眠時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.05,P<0.01)。與地西泮組比較，尼極藏茶高劑量組表現(xiàn)出相同的延長(zhǎng)睡眠時(shí)間的作用。見(jiàn)表3。

表3 尼極藏茶協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的影響

2.5尼極藏茶對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量誘導(dǎo)小鼠催眠作用的影響 與對(duì)照組(0%)比較，尼極藏茶低、中、高劑量組睡眠發(fā)生率提高(20%、40%、40%)；與地西泮組(80%)比較，尼極藏茶對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量誘導(dǎo)小鼠催眠發(fā)生率較低，即尼極藏茶對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生有促進(jìn)作用。

2.6尼極藏茶對(duì)巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠作用的影響 與生理鹽水組相比，地西泮組、尼極藏茶各劑量組睡眠潛伏期均明顯縮短，且睡眠時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.05)。與地西泮組相比，尼極藏茶高劑量組對(duì)小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 尼極藏茶對(duì)巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間的影響

3 討 論

失眠不僅是一種疾病，而且是引發(fā)藏醫(yī)學(xué)被認(rèn)為可誘發(fā)一切疾病的“隆”病的重要因素〔7〕。隨著社會(huì)的發(fā)展和生活節(jié)奏的加快及隨之而來(lái)的生活壓力日趨增大、社會(huì)老齡化現(xiàn)象不斷加劇和社會(huì)關(guān)系日趨冷淡等社會(huì)現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，導(dǎo)致越來(lái)越多的人患有失眠癥〔3，4，11〕，輕則導(dǎo)致人們生活質(zhì)量下降、身心疲憊、記憶力減退和脾氣暴躁等癥狀，重則出現(xiàn)機(jī)體免疫和代謝功能紊亂，甚至?xí)T發(fā)心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、糖尿病等慢性重大疾病〔3～5，11〕。

藏醫(yī)學(xué)一向關(guān)注睡眠方法和質(zhì)量，在藏醫(yī)經(jīng)典《四部醫(yī)典》之起居章中明確記載：常人每晚必須保證足夠的睡眠，如果因熬夜而缺了睡眠，次日早晨須在空腹?fàn)顟B(tài)下補(bǔ)足睡眠，補(bǔ)睡時(shí)間為正常晚間睡眠時(shí)間的一半為宜，尤其是對(duì)醉酒者、身體虛弱者、受到精神和心理創(chuàng)傷者、過(guò)度勞累者、說(shuō)話過(guò)多者和老齡群體等必須確保足夠的睡眠，否則會(huì)使機(jī)體功能受到嚴(yán)重?fù)p害，誘發(fā)藏醫(yī)“隆”病及上述各類(lèi)疾病〔7〕。尼極藏茶是在藏醫(yī)理論指導(dǎo)下，以調(diào)和“隆”因和改善睡眠為目的而組方和開(kāi)發(fā)的藏茶，雖然臨床應(yīng)用已證明具有良好的改善睡眠功能，但缺乏實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。鑒于此，本研究擬通過(guò)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)和戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證尼極藏茶改善睡眠的功能〔12〕。通過(guò)觀察受試藥物對(duì)巴比妥類(lèi)藥物誘導(dǎo)睡眠的影響，是觀察藥物催眠作用的經(jīng)典方法〔2，13～16〕。戊巴比妥鈉和巴比妥鈉為目前常用的中樞鎮(zhèn)靜藥物，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明受試藥尼極藏茶無(wú)直接睡眠作用，尼極藏茶與戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均有協(xié)同的催眠作用。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》規(guī)定，延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)及巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)中，只要有兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)陽(yáng)性，就可以判定受試物具有改善睡眠的功效〔12〕，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中受試物具有改善睡眠的效果的規(guī)定，說(shuō)明尼極藏茶具有理想的改善睡眠作用。