肖本熙，張燕軍，王 端，戚本華，馬文君，李遠(yuǎn)紅，潘妹霞

(廣東省人民醫(yī)院/廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院營(yíng)養(yǎng)科，廣州 510080)

流行病學(xué)資料顯示，絕經(jīng)后女性的代謝綜合征(metabolic syndrome，MS)、冠心病、骨質(zhì)疏松等的發(fā)病率較絕經(jīng)前有明顯的增加［1］。已有大量研究表明，雌激素作為一種抗氧化物質(zhì)，在慢性炎癥和氧化應(yīng)激持續(xù)狀態(tài)在以代謝綜合征為代表的退行性疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用［2.3］。白藜蘆醇(resveratrol，RES)，屬多酚類(lèi)化合物，廣泛存在于虎杖、葡萄籽及花生根中［4］，是植物雌激素的一種，具有弱雌激素活性，其多酚類(lèi)的結(jié)構(gòu)具有較強(qiáng)的清除氧自由基的能力。本研究以去卵巢大鼠為動(dòng)物模型，研究白藜蘆醇對(duì)低雌激素狀態(tài)下大鼠抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)3月齡健康雌性未交配SD 大鼠48 只，體重255±18 g，購(gòu)自廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào):SCXK (粵)2008-0002。

1.2 主要試劑

白藜蘆醇(RES)，天津市尖峰天然產(chǎn)物研究開(kāi)發(fā)有限公司，純度:98%，批號(hào)003-1202111-13。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

大鼠按體重隨機(jī)分為2 組，假手術(shù)組(n=8)行雙側(cè)卵巢摘除假手術(shù)，手術(shù)組(n=40)，手術(shù)組大鼠行雙側(cè)卵巢摘除術(shù) (ovarectomized，OVX)，術(shù)后第10d，取尾血測(cè)大鼠血清雌二醇水平，按雌激素水平將OVX 大鼠隨機(jī)分為5 組，每組8 只，分別為:去卵巢組，己烯雌酚組(DES 0.03 mg/kg)及RES 5、15、45mg/kg 組。DES 組與RES 各組分別灌胃給予相應(yīng)劑量的己烯雌酚與RES，假手術(shù)組和去卵巢組大鼠給予等量溶劑，灌胃劑量為2.0 mL/kg，實(shí)驗(yàn)期為90 d。

以適應(yīng)飼養(yǎng)期大鼠進(jìn)食量為參考，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠定量給食，每只每天為18g，大鼠每2d 稱(chēng)體重1 次，稱(chēng)重前2h 撤食、撤水。實(shí)驗(yàn)第45d 和90d，將動(dòng)物麻醉后，股動(dòng)脈取血測(cè)定血清總超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活性和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。

1.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)及檢測(cè)方法

(1)體重:稱(chēng)量法。(2)血清雌二醇:放射免疫法(RIA)測(cè)定，試劑盒，購(gòu)自天津協(xié)和醫(yī)藥科技公司。(3)血清總超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase，SOD):黃嘌呤氧化酶法。(4)血清丙二醛(Malondialdehyde，MDA):硫代巴比妥法。

SOD 與MDA 所用試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程公司，操作均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包建立數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行分析，以(±SD)表示各定量指標(biāo)的平均值和分散程度，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用最小顯著差異法(LSD)，前后比較配對(duì)t 檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠血清雌二醇濃度

由表1 所知，與假手術(shù)組比較，去卵巢大鼠血清雌二醇濃度顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。去卵巢大鼠的雌二醇水平組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，說(shuō)明造模成功。實(shí)驗(yàn)0d 和實(shí)驗(yàn)第90d 各組血清E2 濃度比較經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

表1 大鼠血清雌二醇(E2)濃度(pg/mL，±SD)

表1 大鼠血清雌二醇(E2)濃度(pg/mL，±SD)

注:與假手術(shù)組比較，a P＜0.05;與模型組比較，b P＜0.05。

2.2 大鼠體重變化及增重

從表2 可看出，實(shí)驗(yàn)期開(kāi)始時(shí)，各組大鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)。在控制攝食量的情況下，DES組大鼠第90d 的體重和實(shí)驗(yàn)期體重增重均低于假手術(shù)組和模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 均＜0.05)，45mg/(kg·bw·d)RES 組實(shí)驗(yàn)期增重低于模型組(F=8.746，P=0.047)。在定量給食的情況下，本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物去卵巢模型組和假手術(shù)組增重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表2 實(shí)驗(yàn)期內(nèi)的大鼠體重及增重(g，±SD)

表2 實(shí)驗(yàn)期內(nèi)的大鼠體重及增重(g，±SD)

注:與假手術(shù)組比較，a P＜0.05;與模型組比較，b P＜0.05。

實(shí)驗(yàn)第90d 和第1d 各組大鼠體重的前后差異，經(jīng)配對(duì)t 檢驗(yàn)顯示各組大鼠體重在實(shí)驗(yàn)期內(nèi)均有顯著增長(zhǎng)(P＜0.05)。

2.3 大鼠血清總超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量

由表3 所知，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠總SOD活力降低，MDA 含量增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在實(shí)驗(yàn)45d 和90d 時(shí)，DES 組和白藜蘆醇各組的總SOD 活力高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但均低于假手術(shù)組(P＜0.05)，去卵巢各組在實(shí)驗(yàn)第90d 時(shí)的總SOD 活力顯著低于第45d，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說(shuō)明白藜蘆醇和己烯雌酚能提高去卵巢大鼠體內(nèi)的總SOD 活力，但是，隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，己烯雌酚組和白藜蘆醇組大鼠的血清總SOD活力仍有明顯的下降。

DES 組和白藜蘆醇各組血清MDA 含量在實(shí)驗(yàn)45d和90d 時(shí)都顯著低于模型組(P＜0.05)，而與假手術(shù)組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)，去卵巢各組在實(shí)驗(yàn)第90d 時(shí)的MDA 含量顯著高于45 天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說(shuō)明去卵巢可使大鼠血清內(nèi)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA 增加，給予白藜蘆醇和己烯雌酚后，可使大鼠血清MDA顯著減少，說(shuō)明白藜蘆醇和己烯雌酚都具有很強(qiáng)的清除過(guò)氧化產(chǎn)物的能力，但隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，其作用有所降低。

綜上，白藜蘆醇和己烯雌酚可增強(qiáng)去卵巢大鼠血清總SOD 活力，減少血清MDA 的堆積，從而減輕去卵巢后導(dǎo)致的機(jī)體氧化損傷。

表3 大鼠血清總超氧化物歧化酶(總SOD)活力和丙二醛(MDA)含量(±SD)

表3 大鼠血清總超氧化物歧化酶(總SOD)活力和丙二醛(MDA)含量(±SD)

注:與假手術(shù)組比較，a P＜0.05;與模型組比較，b P＜0.05。NU 為亞硝酸鹽單位。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在定量給食的情況下，各組大鼠能量攝入水平一致，但與模型組相比，45mg/kg 白藜蘆醇對(duì)去卵巢大鼠的體重的增加有明顯的抑制作用。孫延雙等［5］發(fā)現(xiàn)，用添加白藜蘆醇的飼料喂養(yǎng)，小鼠的肥胖狀態(tài)也得到改善，該文認(rèn)為白藜蘆醇的作用機(jī)制可能通過(guò)激活脂肪組織中的sirt-1，進(jìn)而抑制了PPARγ 和CEBPα的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，表明作為植物雌激素的白藜蘆醇對(duì)減少去卵巢動(dòng)物的體重增加有有益作用。

SOD 是體內(nèi)重要的抗氧化酶，它的活力高低可間接反應(yīng)機(jī)體清除氧自由基能力的大小;MDA 是脂質(zhì)過(guò)氧化作用最后的分解產(chǎn)物，其含量的多少可反應(yīng)組織細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化的速率和強(qiáng)度，間接反映細(xì)胞的損傷程度。雌激素作為一種抗氧化物質(zhì)，女性絕經(jīng)后，隨著雌激素的降低，其體內(nèi)的抗氧化能力也有明顯的下降，而脂質(zhì)過(guò)氧化程度則顯著增加。本次試驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠的SOD 水平明顯低于對(duì)照組大鼠，而過(guò)氧化產(chǎn)物MDA 濃度則顯著高于對(duì)照組，以及各組大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)┢诳寡趸笜?biāo)和過(guò)氧化產(chǎn)物指標(biāo)較實(shí)驗(yàn)中期均有明顯的差異，均證實(shí)了低雌激素狀態(tài)下機(jī)體的抗氧化情況的變化。大量的自由基能破壞機(jī)體的氧化系統(tǒng)平衡，氧自由基的這些作用均可被機(jī)體的抗氧化酶(如SOD)和其他的抗氧化劑所抑制。已有研究證實(shí)補(bǔ)充雌激素后，機(jī)體抗氧化能力可得到改善［6］。本實(shí)驗(yàn)中0.03mg/(kg·bw·d)己烯雌酚組對(duì)改善去卵巢大鼠體內(nèi)的過(guò)氧化狀況也具有較好的作用，驗(yàn)證了早前的研究結(jié)論。

已有研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可抑制活性氧的產(chǎn)生，捕捉并清除自由基，保護(hù)細(xì)胞DNA 及蛋白質(zhì)等大分子免受活性氧損害，具有很強(qiáng)的抗氧化作用［7］。本次實(shí)驗(yàn)則發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可提高去卵巢大鼠血清總SOD 活力，但尚不能達(dá)到正常大鼠的SOD 水平。白藜蘆醇還能減少去卵巢動(dòng)物的血清MDA 的堆積，從而改善去卵巢后機(jī)體抗氧化能力。包括超氧化物歧化酶系統(tǒng)在內(nèi)的體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)很多，鄧祖躍等［8］發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇也可通過(guò)活化L-Arg-NO 途徑，提高機(jī)體的抗氧化能力，從而改善高脂血癥大鼠的脂肪代謝狀態(tài)。另有研究也發(fā)現(xiàn)，多酚類(lèi)化合物可通過(guò)抑制eNOS 的解耦聯(lián)過(guò)程［9］，降低過(guò)氧化物水平，從而增強(qiáng)NO 活性，降低氧化損傷程度。我們的另一部分研究也發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可增加去卵巢大鼠血清的NO 及NOS 的濃度［10］。以上均表明作為多酚類(lèi)化合物的白藜蘆醇，具有很強(qiáng)的抗氧化性，而且抗氧化的作用機(jī)制是多方面的。本研究結(jié)果顯示，低雌激素狀態(tài)下，動(dòng)物體內(nèi)的抗氧化酶SOD 明顯降低，過(guò)氧化產(chǎn)物則明顯增加，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)改變更加明顯。植物雌激素白藜蘆醇能提高去卵巢大鼠血清中SOD 活力，減少M(fèi)DA 含量，改善去卵巢大鼠體內(nèi)的抗氧化能力。

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