王 虎，李文兵，胡昌江，朱 軍

（1．四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 611930； 2．成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137）

不同產(chǎn)地川芎主要有效成分含量比較

王 虎1，李文兵1，胡昌江2，朱 軍1

（1．四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 611930； 2．成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137）

目的建立測(cè)定川芎主要有效成分含量的高效液相色譜（HPLC）法，比較不同產(chǎn)地川芎的質(zhì)量，為川芎新品種選育提供依據(jù)。方法采用HPLC法對(duì)川芎主要有效成分藁本內(nèi)酯和阿魏酸進(jìn)行含量測(cè)定，確定最佳測(cè)定方法。結(jié)果不同產(chǎn)區(qū)川芎中有效成分含量有差異，四川道地產(chǎn)區(qū)彭州和都江堰總含量最高，其中都江堰產(chǎn)區(qū)川芎中藁本內(nèi)酯平均含量最高。結(jié)論通過對(duì)川芎有效成分含量的測(cè)定，四川道地產(chǎn)區(qū)川芎質(zhì)量最優(yōu)。該測(cè)定方法能為川芎新品種選育優(yōu)質(zhì)的苓種提供科學(xué)的依據(jù)，并可為川芎的綜合開發(fā)利用提供優(yōu)質(zhì)原料。

川芎；高效液相色譜法；藁本內(nèi)酯；阿魏酸；選育；質(zhì)量評(píng)價(jià)

川芎為傘形科植物 Ligusticum chuanxiong Hort．藁本屬的干燥根莖，具有行氣活血、祛風(fēng)止痛的功效，被古人譽(yù)為“血中之氣藥”。川芎栽培歷史悠久，主產(chǎn)于四川省，此外云南、甘肅、江蘇、江西等地亦產(chǎn)[1]。川芎中主要含有揮發(fā)油、生物堿、酚酸、有機(jī)酸等成分[2-3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明，阿魏酸和藁本內(nèi)酯為川芎中起活性作用的有效成分，在高效液相色譜（HPLC）中易檢測(cè)，故建立阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量測(cè)定方法[4-5]，對(duì)不同產(chǎn)地川芎進(jìn)行含量測(cè)定和比較，以評(píng)價(jià)川芎的質(zhì)量，可為川芎新品種育種選擇優(yōu)質(zhì)的苓種提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫 1200B型高效液相色譜儀（G1312B型二元泵，G1315C型DAD檢測(cè)器，ChemStation化學(xué)工作站）；BP211D型電子天平（德國(guó)Sartorius公司，d=0．1 mg／0．01 mg，max=210 g／80 g)；KQ5200DB型超聲波清洗器（昆山市儀器有限公司）；溫控水浴鍋。阿魏酸（批號(hào)為 110773-201312）、藁本內(nèi)酯（批號(hào)為111737-201001）對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，曝光保存；甲醇（迪馬公司)為色譜純，水為重蒸水，冰醋酸等其他試劑均為分析純。川芎購(gòu)自四川彭州、都江堰、江西（扶芎）、甘肅（西芎）、云南（云芎）等不同產(chǎn)地，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)胡昌江教授鑒定為傘形科植物 Ligusticum chuanxiong Hort．的干燥根莖。

2 方法與結(jié)果

2．1 川芎中阿魏酸含量測(cè)定[6]

2．1．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-1%的醋酸溶液（30∶70）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：321 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，川芎中阿魏酸與其他組分能達(dá)到基線分離。色譜見圖1。

圖1 阿魏酸的高效液相色譜圖

2．1．2 溶液制備

精密稱取阿魏酸對(duì)照品5．00 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶解，作為母液，放置冰箱備用，再精密吸取10 mL至25 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度20 μg／mL的對(duì)照品溶液。取川芎粉末（過4號(hào)篩）0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液適量過0．45 μm濾膜，即得供試品溶液。

2．1．3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液4，6，8，10，12，14，16 μL，分別注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積值，重復(fù)操作2次，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=0．005 95 X+0．054 77，r=0．999 9（n=7）。結(jié)果表明，阿魏酸進(jìn)樣量在0．08～0．32 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定阿魏酸峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為0．75%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液置棕色瓶中，密閉、室溫貯藏，于0，2，4，8，12，24 h時(shí)分別進(jìn)樣2次，測(cè)定藁本內(nèi)酯的峰面積。結(jié)果的 RSD分別為0．86%，1．05%（n=6），表明阿魏酸在該溶液中穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一川芎樣品粉末6份，照2．1．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算阿魏酸的含量。結(jié)果的 RSD= 2．01%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知阿魏酸含量的川芎藥材粉末約0．25 g，6份，精密稱定，精密加入阿魏酸對(duì)照品適量，按2．1．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定含量并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2．2 川芎中藁本內(nèi)酯含量測(cè)定

2．2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：326 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，川芎中藁本內(nèi)酯與其他組分能達(dá)到基線分離。色譜見圖2。

圖2 藁本內(nèi)酯的高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

取藁本內(nèi)酯對(duì)照品約62．50 mg，精密稱定，置25 mL棕色容量瓶中，加色譜甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液，再精密量取1 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加色譜甲醇稀釋至刻度，制成每1 mL含藁本內(nèi)酯100 μg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。精密稱取川芎粉末（過4號(hào)篩）約0．5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密閉，搖勻，稱重，超聲處理30 min，用甲醇溶液補(bǔ)足減失質(zhì)量，濾過，精密稱取續(xù)濾液2 mL，置5 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液，取續(xù)濾液適量過0．45 μm濾膜，備用。

2．2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣4，8，10，12，16，20 μL，重復(fù)進(jìn)樣2次，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=0．008 93 X+0．003 85， r=0．999 9（n=6）。結(jié)果表明，藁本內(nèi)酯進(jìn)樣量在 0．4～2．0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定藁本內(nèi)酯峰面積。結(jié)果的 RSD為0．64%（n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液至棕色瓶中，密閉、室溫貯藏，于0，2，4，8，12，24 h時(shí)分別進(jìn)樣2次，測(cè)定藁本內(nèi)酯的峰面積。結(jié)果的 RSD分別為1．03%和0．92%（n=6），表明藁本內(nèi)酯在該溶液中穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一川芎樣品粉末6份，照2．2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算藁本內(nèi)酯的含量。結(jié)果的 RSD= 1．86%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知藁本內(nèi)酯含量的川芎藥材粉末約0．25 g，6份，精密稱定，分別精密加入藁本內(nèi)酯對(duì)照品適量，按2．2．2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，測(cè)定含量并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 藁本內(nèi)酯加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2．3 樣品含量測(cè)定

取不同產(chǎn)地的川芎藥材，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果見表3?？梢?，從總含量來(lái)看，四川＞江蘇＞甘肅 ＞云南；在四川產(chǎn)地的川芎中，都江堰產(chǎn)地川芎中藁本內(nèi)酯含量大于彭州產(chǎn)地的川芎。四川適宜的氣候和生長(zhǎng)環(huán)境為川芎質(zhì)量提供了保證，故四川產(chǎn)地川芎產(chǎn)量大，暢銷國(guó)內(nèi)外[7]。

表3 川芎中阿魏酸和藁本內(nèi)酯含量測(cè)定結(jié)果（%）

3 討論

檢測(cè)波長(zhǎng)選擇：通過全波段波長(zhǎng)掃描，阿魏酸在321 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，藁本內(nèi)酯在326 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

提取方法選擇：阿魏酸的含量測(cè)定參照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》方法，通過考察，70%甲醇回流可將川芎中阿魏酸提取完全。藁本內(nèi)酯的提取方法中比較了甲醇超聲、回流、冷浸，甲醇超聲效率最高；比較了甲醇、50%甲醇、70%甲醇、乙醇、95%乙醇提取溶劑，甲醇提取率最高；比較了15，30，45 min不同提取時(shí)間，30 min即可完全提取，故選擇文中的提取與測(cè)定方法。由于阿魏酸屬于酚酸類成分，藁本內(nèi)酯屬于揮發(fā)油類成分，1種溶劑不可能將兩者提取完全，為了最大限度地提取，文中分開建立了其含量測(cè)定方法，結(jié)果準(zhǔn)確可行。

流動(dòng)相選擇：阿魏酸采用2010年版《中國(guó)藥典（一部）》流動(dòng)相，效果好。而藁本內(nèi)酯的流動(dòng)相比較了乙腈-水（60∶40）、甲醇 -水（70∶30），后者出峰時(shí)間和峰形較好，且能與其他峰相分離，分離度大于1．5，故選擇甲醇-水（70∶30）為流動(dòng)相。

藁本內(nèi)酯在川芎中含量較高，可作為川芎質(zhì)量的評(píng)價(jià)指標(biāo)[8-9]，但其在室溫條件下穩(wěn)定性較差，對(duì)光和熱較為敏感，應(yīng)快速測(cè)定，并密封避光、低溫保存。通過對(duì)川芎有效成分含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地川芎含量有明顯差異，其中四川產(chǎn)地含量最高，應(yīng)努力從源頭上保證川芎藥材質(zhì)量[10]。彭州已建立了川芎最大的中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GAP）種植基地，是開發(fā)使用川芎的主要源頭。本研究結(jié)果可為川芎新品種選育優(yōu)質(zhì)的苓種提供科學(xué)依據(jù)。

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Comparison of the M ain Effective Contents of Ligusticum Wallichii from Different Regions

Wang Hu1,Li Wenbing1,Hu Changjiang2,Zhu Jun1
（1．Sichuan New Green Pharmaceutical Technology Development CO．,LTD．,Chengdu,Sichuan,China 611930; 2．Chengdu University of TCM,Chengdu,Sichuan China 611137）

Objective To establish an HPLC method for the measurement of the main effective components ofLigusticum wallichii to compare the quality of the product from different regions,and to provide the basis for breeding new varieties．M ethods HPLC was used to assay the contents of ligustilide and ferulic acid in RC to determine the best measuring method．Results There were differences in the effective components ofLigusticum wallichii from different regions;products from Sichuan′s Pengzhou and Dujiangyan districts were of the highest quality．Conclusion Through the determination of the effective components ofLigusticum wallichii,product from Sichuan has the best quality．This method can to provide a scientific basis for producing high quality raw materials and the development and utilization of new varieties．

Ligusticum wallichii;HPLC;Z-ligustilide;ferulicacid;breeding;qualitative standard

R284.1；R282.71

A

1006-4931(2015)21-0037-03

王虎（1985-），男，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥茖W(xué)，（電子信箱）893274765＠qq．com；胡昌江，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制學(xué)的教學(xué)和科研工作，本文通訊作者，（電子信箱）hhccjj＠hotmail．com。

2015-05-13；

2015-07-09)

四川省科技支撐計(jì)劃突破性川產(chǎn)道地藥材新品種選育——川芎新品種選育及配套技術(shù)研究項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2011NZ0098-12-06；川芎整合式全產(chǎn)業(yè)鏈綜合開發(fā)研究項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2015SZ0031。