任宗娜

（天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所，國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市“腫瘤防治”重點實驗室，天津300060）

論著

沉默Notch4基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞系MDA-MB-231增殖和遷移侵襲能力的影響

任宗娜

（天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所，國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市“腫瘤防治”重點實驗室，天津300060）

目的：探討Notch4基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞系MDA-MB-231增殖、遷移侵襲能力的影響。方法：脂質(zhì)體法用Notch4 siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231，RT-PCR和Western blot檢測Notch4基因的表達(dá)，通過MTT實驗評價MDA-MB-231細(xì)胞增殖活性的改變；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期，通過Transwell實驗評價腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變；RT-PCR方法檢測Notch信號通路相關(guān)基因的變化。結(jié)果：Notch4 siRNA有效地轉(zhuǎn)入細(xì)胞并抑制了Notch4基因的表達(dá)。轉(zhuǎn)染Notch4 siRNA細(xì)胞的增殖活性及體外遷移侵襲能力均顯著下降（P<0.05）。細(xì)胞周期阻滯在G0/G1，Hes1、Hey1、c-Myc、cyclinD1、MMP9 mRNA水平明顯低于對照組（P<0.05）。結(jié)論：Notch4 siRNA可明顯抑制乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖、遷移和侵襲能力。Notch4基因可做為三陰性乳腺癌基因治療的靶基因。

Notch4基因；乳腺癌；RNA干擾；增殖；遷移；侵襲

三陰乳腺癌（triple-negativebreastcancer，TNBC）是以雌激素受體α（estrogen receptorα，ERα）、孕酮受體2（progesterone receptor 2，PR）和人表皮生長因子受體（human epidermal growth factor receptor，HER-2）均不表達(dá)為特點的乳腺癌細(xì)胞[1]，占所有乳腺癌細(xì)胞的10%～15%[2-4]，由于缺乏針對這些受體的有效治療靶點，無法采用內(nèi)分泌治療和曲妥單抗治療，導(dǎo)致預(yù)后較差[5]?；煷嬖诏熜Р环€(wěn)定、副作用大以及多藥耐藥等問題，因此，急需找到針對TNBC的有效的分子治療靶點。Notch信號通路廣泛存在于脊椎動物和非脊椎動物，在進(jìn)化上高度保守，通過相鄰細(xì)胞之間的相互作用調(diào)控胚胎發(fā)育、血管發(fā)生、程序性細(xì)胞死亡和細(xì)胞增殖等多種生理過程[6-9]，在腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡、增殖和血管生成等病理過程中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用[10-11]。目前在脊椎動物中共發(fā)現(xiàn) 4個同源體 Notch1、Notch2、Notch3、Notch4[12]。Speiser等[13]研究發(fā)現(xiàn)Notch4是三陰性乳腺癌的一個生物學(xué)標(biāo)志物。本研究利用RNAi技術(shù)沉默乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的Notch4基因，觀察其對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的增殖、遷移和侵襲能力的影響。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng) 乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231具有間質(zhì)特性和高轉(zhuǎn)移能力，來源于美國標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）。MDA-MB-231細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清（Fetal bovine serum，F(xiàn)BS；GIBCO公司，美國）的RPMI-1640培養(yǎng)基（GIBCO公司，美國）中。將對數(shù)生長期細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液，用于體外和體內(nèi)實驗。

1.2 siRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染 采用Lipofectamine 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，方法按照說明書。接種1×105個細(xì)胞/孔于6孔板，以含血清無抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞為30%～50%飽和度時用于轉(zhuǎn)染(表1)。將5 μL（100 pmol）的stealth RNAi加入含有250 μL的Opti-MEM（GIBCO公司，美國）的EP管中，輕輕混勻；將5 μL的 Lipofectamine 2000加入含有 250 μL的Opti-MEM的EP管中，輕輕混勻；室溫靜置孵育5 min；將上述液體混合，室溫靜置孵育20 min；將上述混合液緩慢滴入含有1.5 mL OPTI-DMEM無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞中，4～6 h后換成含10%FBS的培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染48 h后裂解細(xì)胞提取總RNA及免疫熒光檢測。實驗分組：實驗組（Notch4 siRNA組）；陰性對照組（NC siRNA組）；空白對照組（Mock siRNA組）。

表1 siRNA干擾序列Tab 1 The sequences of siRNA oligonucleotides

1.3 MTT 細(xì)胞胰酶消化對數(shù)期細(xì)胞，終止后離心收集，制成細(xì)胞懸液。細(xì)胞懸液接種于96孔板，細(xì)胞計數(shù)調(diào)整其濃度至3 000個細(xì)胞/孔，邊緣孔用無菌PBS填充，5%CO2，37℃孵育。設(shè)置6個復(fù)孔，分別處理1、2、3、4 d后，每孔加入10 μL MTT溶液（5 mg/mL，即0.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4 h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2～3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。每孔加入150 μL二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm處測量各孔的吸光值。

1.4 QTR-PCR 提取細(xì)胞總RNA，cDNA的合成，QPCR反應(yīng)。每個樣本中每個基因的檢測均重復(fù)3次。CT值為熒光信號達(dá)到設(shè)定閾值時所經(jīng)過的循環(huán)數(shù)，ΔCT值為各樣本中目的基因的CT值與管家基因GAPDH的CT值之差，2-△Ct則為該樣本中目的基因相對于GAPDH mRNA的表達(dá)量。管家基因GAPDH和目的基因的引物序列均采用Oligo6.0軟件設(shè)計，引物及探針均由上海生工生物工程公司合成（表2）。

表2 引物序列Tab 2 Primer sequence

1.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期 收集轉(zhuǎn)染后72 h各組細(xì)胞，乙醇固定過夜，RNA酶水浴加熱消化后加入碘化丙啶（PI，50 μg/mL），4℃放置15 min后流式細(xì)胞儀檢測。

1.6 細(xì)胞侵襲和遷移實驗 將懸浮于500 μL無血清培養(yǎng)基的5×104個231-siNotch4、231-siControl細(xì)胞接種于含Metrigel和不含Metrigel的transwell上室，下層加入750 μL含10%FBS的細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)8 h。取出transwell小室，用棉簽拭去上層未穿過的細(xì)胞，通過3步染色試劑盒（Thermo Scientific公司，美國）固定、染色，自來水漂洗3次，室溫風(fēng)干，中性樹膠固定，于鏡下觀察穿孔細(xì)胞數(shù)目，隨機選取5個視野計數(shù)并取其平均值。

1.7 Western blot檢測 使用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，提取總蛋白，在10%聚丙烯酰胺凝膠中電泳。將蛋白膜轉(zhuǎn)至PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉后，加入鼠一抗Notch4（1∶1 000），4℃轉(zhuǎn)動過夜。第2天取出膜，TBST漂洗后，加入羊抗鼠二抗反應(yīng)，室溫孵育1 h，TBST漂洗?；瘜W(xué)發(fā)光法（ECL）顯影，暗室曝光。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 體外細(xì)胞學(xué)實驗均設(shè)每組3個復(fù)孔細(xì)胞，實驗數(shù)據(jù)用±s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行處理。

2 結(jié)果

2.1 倒置熒光顯微鏡下觀察實驗細(xì)胞 絕大多數(shù)細(xì)胞都熒光著色，與背景反差明顯，熒光著色細(xì)胞有明顯的細(xì)胞輪廓（圖1）。

圖1 轉(zhuǎn)染48 h后倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染后實驗細(xì)胞（x100）Fig 1 MDA-MB-231 cells under fluoroscope at 48 h after transfection(x100)

2.2 RT-PCR和Westernblot檢測Notch4的表達(dá) 腫瘤細(xì)胞體外運動能力的變化RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，與陰性對照組和空白對照組相比，實驗組Notch4的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（圖2）。

圖2 Notch4 siRNA對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231 Notch4 mRNA和蛋白水平表達(dá)的影響（*P＜0.05）Fig 2 Effect of siRNA on Notch4 mRNA and protein expression in MDA-MB-231 cells（*P＜0.05）

2.3 MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖活性 轉(zhuǎn)染Notch4 siRNA后第1、2天，各實驗組增殖活性無明顯差異，48 h的OD值，Notch4 siRNA組：0.48±0.07，NC siRNA組：0.51±0.12，Mock siRNA組：0.54±0.17，無明顯統(tǒng)計差異（P＞0.05）。Notch4 siRNA組較其他兩組在第3～5天出現(xiàn)差異，第4天差異最明顯，此時Notch4 siRNA組OD值：0.93±0.08，NC siRNA組OD值：1.26±0.29，Mock siRNA組OD值：1.3±0.08，比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。以時間為橫軸、OD值為縱軸繪制生長曲線（圖3）。

圖3 轉(zhuǎn)染Notch4 siRNA對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖的影響Fig 3 The growth curve by the MTT assay in different groups of MDA-MB-231 after transfection with Notch4 siRNA

2.4 流式檢測細(xì)胞周期變化 由于細(xì)胞的增殖與細(xì)胞周期密切相關(guān)，在觀察到siRNA介導(dǎo)的Notoh4下調(diào)能夠抑制MDA-MB-231細(xì)胞的增殖后，利用流式細(xì)胞儀檢測了MDA-MB-231細(xì)胞在轉(zhuǎn)染siRNA 72 h后的細(xì)胞周期分布。結(jié)果MDA-MB-231細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后其典型細(xì)胞周期分布為G1：52.3%，G2：17.8%，S：30%；而對照組細(xì)胞的周期分布為Gl：71.8%，G2：15.8%，S：12.4%；呈G0/G1阻滯（圖4）。

圖4 Notch4沉默后對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞周期的影響Fig 4 The effect of Notch4 siRNA on cell cycle progression ofMDA-MB-231 cells

2.5 沉默Notch4基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞系MDA-MB-231體外遷移侵襲能力的影響 增殖抑制實驗表明，Notch4基因沉默后第3天開始出現(xiàn)差異。因此，為了減少細(xì)胞增殖對遷移侵襲實驗的影響，檢測遷移侵襲能力的實驗選定在轉(zhuǎn)染后24～48 h進(jìn)行。結(jié)果顯示Notch4 siRNA組與其余兩組相比，細(xì)胞的遷移、侵襲能力顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（圖5）。

2.6 RT-PCR檢測基因表達(dá) RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染72 h后，Notch4 siRNA組、NC siRNA組、Mock siRNA組的不同基因的表達(dá)。結(jié)果顯示Hes1、Hey1、c-Myc、cyclinD1 mRNA表達(dá)均明顯低于其他兩組（P＜0.05）（圖6）。

圖5 Notch4沉默后對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231體外運動能力的影響（*P＜0.05）Fig 5 The effect of Notch4 siRNA on migration and invasion activity of MDA-MB-231 cells in vitro（*P＜0.05）

圖6 轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細(xì)胞的Hes1、Hey1、c-Myc、cyclinD1、MMP9 mRNA表達(dá)的差異（*P＜0.05）Fig 6 The expression of Hes1,Hey1,c-Myc,cyclinD1 and MMP9 in MDA-MB-231 cells after transfection（*P＜0.05）

3 討論

Naik等[14]研究發(fā)現(xiàn)，Notch4異常高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，而且在Basal乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)。在高表達(dá)Notch4的乳腺癌細(xì)胞中，Notch4增加細(xì)胞的抗凋亡能力，提高對化療藥的耐受性[14]。研究發(fā)現(xiàn)，活化的Notch4還可以使正常乳腺上皮細(xì)胞在體外發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[15]。Lombardo等[16]研究發(fā)現(xiàn)，MCF-7細(xì)胞高表達(dá)Notch4受體，使細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，增加對內(nèi)分泌治療的不敏感性。臨床資料顯示[17]，Notch4高表達(dá)的腫瘤患者，其總體生存較短。所以，Notch4基因高表達(dá)是乳腺癌患者的不良預(yù)后因素。

在細(xì)胞周期檢測中，沉默Notch4基因后細(xì)胞發(fā)生了G0/G1阻滯，提示Notch4蛋白是通過促進(jìn)細(xì)胞周期誘導(dǎo)細(xì)胞增殖。細(xì)胞周期素D1（cyclinD1）屬細(xì)胞周期素家族成員，可與CDK4結(jié)合并激活其活性，調(diào)控細(xì)胞由G1期至S期的轉(zhuǎn)變。本實驗證實抑制Notch4基因的表達(dá)能下調(diào)cyclinD1，進(jìn)而阻止人乳腺癌MDAMB-231細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，所以靶向Notch4的藥物能緩解乳腺癌細(xì)胞的增殖速率。原癌基因c-Myc是決定細(xì)胞從G0/G1期進(jìn)入S期的“開關(guān)”，而且在G2/M細(xì)胞周期進(jìn)展中也起著重要作用，與細(xì)胞增殖關(guān)系密切[18-20]。使用RNA干擾技術(shù)沉默c-Myc基因能有效抑制腎癌細(xì)胞增殖[21]。張巧琳等[22]發(fā)現(xiàn)c-Myc抑制劑能抑制腎癌細(xì)胞786-0的增殖并發(fā)生G0/G1期細(xì)胞周期阻滯。以上研究說明c-Myc基因與細(xì)胞的增殖和周期密切相關(guān)，同樣，我們發(fā)現(xiàn)抑制Notch信號通路后乳腺癌細(xì)胞增殖受到抑制，而且停留在G0/G1期的細(xì)胞比例明顯升高。c-Myc與Notch4信號通路在生物學(xué)行為上具有相似性，兩者可能存在協(xié)同性。在本實驗中，我們采用小干擾沉默乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的Notch4蛋白后c-Myc的mRNA水平下調(diào)，說明在乳腺癌中c-Myc可能也作為Notch4蛋白的靶基因而發(fā)揮作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在沉默Notch4基因后Hes1和Hey1 mRNA表達(dá)水平均明顯降低。Notch信號傳導(dǎo)是通過信號發(fā)出細(xì)胞的配體結(jié)合信號接收細(xì)胞的受體由γ-內(nèi)分泌酶切除受體胞內(nèi)段使其激活。胞內(nèi)段入核后與轉(zhuǎn)錄因子CSL形成復(fù)合體，調(diào)節(jié)下游靶基因的表達(dá)，可見，Notch信號主要功能取決于下游靶基因的功能。下游靶基因主要是Hes/ Hey家族，轉(zhuǎn)錄后主要參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等從而決定細(xì)胞命運。MMP9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的成員之一，主要作用就是降解基質(zhì)中的蛋白，與乳腺癌的侵襲性、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[23]。本實驗發(fā)現(xiàn)，在沉默Notch4基因后MMP9的mRNA表達(dá)水平均明顯降低，提示在MDA-MB-231細(xì)胞中Notch4基因可能通過下調(diào)MMP9的水平，抑制細(xì)胞的遷移、侵襲能力。

綜上所述，本實驗證實了通過沉默Notch4的表達(dá)可明顯抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力，結(jié)合Notch4在增強乳腺癌細(xì)胞干性、抗凋亡和耐藥性等方面的作用，我們認(rèn)為靶向Notch4的治療是可行的，將有可能為三陰性乳腺癌基因治療的一種新選擇。

[1] S?rlie T,Perou C M,Tibshirani R,et al.Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2001,98(19)：10869

[2] Carey L,Winer E,Viale G,et al.Triple-negative breast Cancer：disease entity or title of convenience[J].Nat Rev Clin Oncol,2010,7 (12)：683

[3] Dent R,Trudeau M,Pritchard K I,et al.Triple-negative breast cancer：clinical features and patterns of recurrence[J].Clin Cancer Res, 2007,13(15 Pt 1)：4429

[4] Rakha E A,El-Sayed M E,Green A R,et al.Prognostic markers in triple-negative breast cancer[J].Cancer,2007,109(1)：25

[5] van’t Veer L J,Dai H Y,van de Vijver M J,et al.Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer[J].Nature,2002, 415(6871)：530

[6] Fernandez-Valdivia R,Takeuchi H,Samarghandi A,et al.Regulation of mammalian Notch signaling and embryonic development by the protein O-glucosyltransferase Rumi[J].Development,2011,138 (10)：1925

[7] Gianni-Barrera R,Trani M,Reginato S,et al.To sprout or to split? VEGF,Notch and vascular morphogenesis[J].Biochem Soc Trans, 2011,39(6)：1644

[8] Yalcin-Ozuysal O,Fiche M,Guitierrez M,et al.Antagonistic roles of Notch and p63 in controlling mammary epithelial cell fates[J]. Cell Death Differ,2010,17(10)：1600

[9] Monahan P,Rybak S,Raetzman L T.The notch target gene HES1 regulates cell cycle inhibitor expression in the developing pituitary [J].Endocrinology,2009,150(9)：4386

[10]Garcia A,Kandel J J.Notch：a key regulator of tumor angiogenesis and metastasis[J].Histol Histopathol,2012,27(2)：151

[11]Wang Z,Li Y,Banerjee S,et al.Down-regulation of Notch-1 and Jagged-1 inhibits prostate cancer cell growth,migration and invasion,and induces apoptosis via inactivation of Akt,mTOR,and NF-kappaB signaling pathways[J].J Cell Biochem,2010,109(4)：726

[12]Ellisen L W,Bird J,West D C,et al.TAN-1,the human homolog of the Drosophila notch gene,is broken by chromosomal translocations in T lymphoblastic neoplasms[J].Cell,1991,66(4)：649

[13]Speiser J,Foreman K,Drinka E,et al.Notch-1 and notch-4 biomarker expression in Triple-Negative breast Cancer[J].Int J Surg Pathol,2012,20(2)：139

[14]Naik S,Macfarlane M,Sarin A.Notch4 signaling confers susceptibility to TRAIL-Induced apoptosis in breast cancer cells[J].J Cell Biochem,2015,116(7)：1371

[15]Girard L,Jolicoeur P.A full-length Notch1 allele is dispensable for transformation associated with a provirally activated truncated Notch1 allele in Moloney MuLV-infected MMTVD/myc transgenic mice[J].Oncogene,1998,16(4)：517

[16]Lombardo Y,Faronato M,Filipovic A,et al.Nicastrin and notch4 drive endocrine therapy resistance and epithelial to mesenchymal transition in MCF7 breast cancer cells[J].Breast Cancer Res,2014, 16(3)：R62

[17]D’angelo R C,Ouzounova M,Davis A,et al.Notch reporter activity in breast cancer cell lines identifies a subset of cells with stem cell activity[J].Mol Cancer Ther,2015,14(3)：779

[18]Eilers M,Picard D,Yamamoto K R,et al.Chimaeras of myc oncoprotein and steroid receptors cause hormone-dependent transformation of cells[J].Nature,1989,340(6228)：66

[19]Roussel M F.Key effectors of signal transduction and G1 progression[J].Adv Cancer Res,1998,74：1

[20]Adachi S,Obaya A J,Han Z,et al.c-Myc is necessary for DNA damage-induced apoptosis in the G(2)phase of the cell cycle[J]. Mol Cell Biol,2001,21(15)：4929

[21]Tang S W,Chang W H,Su Y C,et al.MYC pathway is activated in clear cell renal cell carcinoma and essential for proliferation of clear cell renal cell carcinoma cells[J].Cancer Lett,2009,273(1)：35

[22]張巧琳，徐新，劉琪，等.c-Myc小分子抑制劑10058-F4對腎癌786-0細(xì)胞增殖凋亡的影響[J].重慶醫(yī)學(xué),2010,39(22)：3049

[23]Guo J,Xu Y,Ji W,et al.Effects of exposure to benzo[C].2015：201-210

（2015-05-06收稿）

Inhibition effect of silencing Notch4 gene on the proliferation and migration and invasion activity of breast cancer cell line MDA-MB-231

REN Zong-na
（Cancer Institute and Hospital，Tianjin Medical University，National Clinical Research Center of Cancer,Tianjin Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy，Tianjin 300060，China）

Objective：To investigate the effect of Notch4 gene on the proliferation and migration and invasion activity of breast cancer cells.Methods：Lipofectin Reagent was used to transfect Notch4 siRNA into breast cancer cell MDA-MB-231.The mRNA and protein expression level of Notch4 were detected by RT-PCR and Western blot.Cell grow curve was measured by MTT assay.Matrigel-coated Transwell and Transwell inserts were applied to examine cell migration and invasion activity in vitro.The cell cycle distribution was assessed by flow cytomentry.The expression levels of Hes1,Hey1,c-Myc,cyclinD1 and MMP9 were detected by RT-PCR.Results：The Notch4 siRNA was effectively transfected into MDA-MB-231 cells.The mRNA and protein expression level of Notch4 were inhibited.MTT test showed that the proliferation of transfected cells was significantly lower than those of the other two groups(P<0.05).Transwell chamber testshowed thatthe migration and invasion capability of transfected cells was significantly lower than control(P<0.05).Cell cycle of Notch4 siRNA transfected group cells was arrested in G0/G1 phase.The expression levels of Hes1,Hey1,c-Myc,cyclinD1 and MMP9 between Notch4 siRNA transfected group and other two groups were statistically different(P<0.05).Conclusion：Notch4 gene by Notch4 siRNA can remarkably inhibitproliferation and migration and invasion activity of cell lines of MDA-MB-231.Notch4 gene may be used as the target for triple-negative breastcancer gene therapy.

Notch4 gene；breast cancer；RNAi;proliferation；migration；invasion

R737.9

A

1006－8147（2015）06-0469-05

任宗娜（1989-），女，碩士在讀，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)；E-mail：zongnaren@163.com。