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荷葉水提取物的降血脂作用實(shí)驗(yàn)探討*

2015-02-25 00:54:19郭慧玲第一作者郭慧玲教授研究方向中藥制劑新技術(shù)與新劑型mailghl66com江蕾胡志方通信作者胡志方教授研究方向中藥制劑新劑型與新技術(shù)mailhzf99com趙曉娟胡律江郭三保江西中醫(yī)藥大學(xué)南昌330004江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校江西撫州344000
關(guān)鍵詞:高血脂癥水提物荷葉

★ 郭慧玲第一作者:郭慧玲,教授。研究方向:中藥制劑新技術(shù)與新劑型。E-mail:ghl66@6.com?!〗佟『痉酵ㄐ抛髡撸汉痉剑淌?。研究方向:中藥制劑新劑型與新技術(shù)。E-mail:hzf99@6.com。 趙曉娟 胡律江 郭三?!?.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌330004;.江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)?!〗?撫州 344000)

荷葉水提取物的降血脂作用實(shí)驗(yàn)探討*

★郭慧玲1*第一作者:郭慧玲,教授。研究方向:中藥制劑新技術(shù)與新劑型。E-mail:ghl6262@126.com。江蕾1胡志方2*通信作者:胡志方,教授。研究方向:中藥制劑新劑型與新技術(shù)。E-mail:hzf9912@126.com。趙曉娟1胡律江1郭三保1(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)南昌330004;2.江西中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校江西 撫州 344000)

摘要:目的:研究荷葉水提物對(duì)高脂血癥小鼠的降血脂作用。方法:將昆明小鼠隨機(jī)分成六組,即空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組(5g/kg)、中劑量組(10g/kg)、高劑量組(20g/kg),除空白組外,其他組均造成高脂血癥模型,并且給予相應(yīng)的藥物,分別測(cè)定各組小鼠的TC、TG和HDL-C含量。結(jié)果:荷葉水提物能顯著降低TC、TG水平,同時(shí)增高HDL-C水平。結(jié)論:荷葉水提物具有顯著的降血脂作用。

關(guān)鍵詞:荷葉;水提物;高血脂癥;降血脂作用

荷葉(Lotus leaf),為睡蓮科植物蓮的葉,屬藥、食兩用植物,由于具有良好的減肥功效引起大眾關(guān)注。荷葉于1991年被列入第二批“既是食品又是藥品”的名單,有清暑化濕、升發(fā)清陽(yáng)、涼血止血的功效[1],主要分布于中國(guó)、日本、印度等亞熱帶和溫帶地區(qū)。荷葉具有調(diào)節(jié)血脂、抑菌、抗氧化、止血、抑制脂肪酶等作用[2]。高血脂主要包括高膽固醇血癥、高甘油酯血癥以及復(fù)合性高脂血癥。隨著現(xiàn)代生活飲食方式的改變,國(guó)人血脂異常率急劇增高,目前高血脂患者極為普遍,是造成動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的主要原因之一[3]。因此,調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝對(duì)防治心腦血管疾病發(fā)生有著極其重要的作用[4],如何防治高脂血癥一直是研究熱點(diǎn)。由于臨床常用的西藥類(lèi)降血脂藥物毒副作用較大,從天然藥物中尋找降血脂有效成分的研究日益受到重視,中藥治療高血脂癥有獨(dú)特效果,作用雖緩慢但毒副作用小。本文主要通過(guò)高脂乳劑飼養(yǎng)小鼠,復(fù)制高血脂模型,探討荷葉水提物的降血脂作用。

1材料與器材

1.1實(shí)驗(yàn)材料荷葉購(gòu)自江西省南昌市樂(lè)康中藥房(生產(chǎn)批號(hào):131201,產(chǎn)地湖南),經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院左月明副教授鑒定為睡蓮科植物蓮的葉(Lotus leaf)。豬膽鹽(索萊寶科技有限公司,批號(hào):604C051,規(guī)格:25g);丙硫氧嘧啶片(上海朝暉藥業(yè)有限公司,規(guī)格:50mg×100片,批號(hào):1309F18),膽固醇(索萊寶科技有限公司,批號(hào):121B106,規(guī)格:100g),蔗糖(西隴化工股份有限公司,批號(hào):1403011,規(guī)格:500g),豬油自制,辛伐他汀片(魯南貝特制藥有限公司,規(guī)格:5mg×24片,批號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H20030705),水為蒸餾水,甘油三酯(TG)試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司,批號(hào):146561),高密度脂蛋白(HDL-C)試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司,批號(hào):130521),總膽固醇(TC)試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司,批號(hào):141661)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康清潔級(jí)昆明種小鼠,體重18~22g,雄性,購(gòu)自江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,許可證號(hào)SCXK(贛)2011-0001。

1.3儀器和設(shè)備BT25S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司),KDM型調(diào)溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司),96孔酶標(biāo)板(美國(guó)Costar公司),Bio Tek ELx800型酶標(biāo)儀(基因有限公司),GZX-9076 MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)),RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生長(zhǎng)儀器廠(chǎng)),SHZ-D(III)型循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司),KQ5200DA型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司),SIGMA 3-18K型高速離心機(jī)(德國(guó)SIGMA公司),HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司),AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1灌胃液樣品的制備

2.1.1藥品的配制低劑量藥品的配制:稱(chēng)取荷葉25g,按料液比1∶30,提取溫度為100℃,蒸餾水連續(xù)回流兩次,每次2h,合并藥液,濃縮定容至100mL,配制成0.25g/mL的藥液,備用;中劑量藥品的配制:稱(chēng)取荷葉50g,同上法得到0.5g/mL中劑量藥液,備用;高劑量藥品的配制:稱(chēng)取荷葉100g,同上法得到1.0g/mL高劑量藥液,備用。

2.1.2陽(yáng)性組對(duì)照藥品的配制取辛伐他汀片50mg,碾碎后用蒸餾水溶解,定容至100mL,配制成0.5mg/mL,備用。

2.1.3脂肪乳劑的配制[5-6]稱(chēng)取20g豬油于37℃水浴鍋融化后置于研缽中,依次加入10g膽固醇,10g蔗糖,1g丙硫氧嘧啶與研缽中,充分研勻,再加入吐溫-80 1mL,丙二醇2mL,研磨均勻后,加入膽鹽20mL研磨至乳化,加蒸餾水稀釋定容至100mL,冷卻,置于4℃冰箱冷藏,備用。

2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組及給藥方法[7]將實(shí)驗(yàn)小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后,隨機(jī)分成六組:空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、荷葉低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組12只,上午除空白組給予灌胃(ig)蒸餾水,其它各組小鼠均ig高脂乳劑,下午除空白組和模型組外,其它各組ig相應(yīng)的藥品,給藥劑量見(jiàn)表1。造模兩周后,各組小鼠禁食不禁水12h,末次給藥2h后,摘眼球取血,靜置2h,離心10min(4 000r/min),取其血清按照試劑盒說(shuō)明,采用酶標(biāo)儀分別測(cè)定小鼠血清中TC、TG、HDL-C的水平。

表1 動(dòng)物分組及給藥劑量

注:表中荷葉給藥劑量均為折合的生藥材量。

±s,n=12)

注:模型組與空白組比較,△P<0.05,△△P<0.01;給藥組與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

2.3測(cè)定方法

2.3.1甘油三酯采用酶比色法(GPO-PAP法),將工作液與樣品以100∶1的比例混合, 37℃保溫10分鐘,用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)490nm處測(cè)定吸光度,根據(jù)計(jì)算公式: CTG=ATG/A校準(zhǔn)品×C校準(zhǔn)品,計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。式中CTG為甘油三酯濃度單位為mmol/L,C校準(zhǔn)品濃度為2.26mmol/L,ATG為甘油三酯吸光度,A校準(zhǔn)品為校準(zhǔn)品吸光度。

2.3.2總膽固醇采用酶比色法(COD-PAP法),將工作液與樣品以100∶1的比例混合, 37℃保溫6分鐘,用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)490nm處測(cè)定TC值,根據(jù)公式:CTC=ATC/A校準(zhǔn)品×C校準(zhǔn)品,計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。式中CTC為總膽固醇濃度單位mmol/L,C校準(zhǔn)品濃度為5.19mmol/L,ATC為總膽固醇吸光度,A校準(zhǔn)品為校準(zhǔn)品吸光度。

2.3.3高密度脂蛋白采用磷鎢酸-鎂沉淀法,將工作液與樣本上清液以40∶1的比例混合, 37℃保溫6分鐘,用酶標(biāo)儀在490nm處測(cè)定HDL-C值,根據(jù)公式:CHDL-C=AHDL-C/A校準(zhǔn)×C校準(zhǔn)×2,計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。式中CHDL-C為高密度脂蛋白濃度單位mmol/L,C校準(zhǔn)品濃度為3.74mmol/L,AHDL-C為高密度脂蛋白吸光度,A校準(zhǔn)品為校準(zhǔn)品吸光度。

3結(jié)果

由表2可知,造模兩周后,模型組小鼠血脂TC、TG水平明顯高于空白組,而HDL-C水平模型組低于空白組,均有顯著性差異(P<0.05),表明造模成功,提示高脂乳劑灌胃法為較理想的造模方法。不同劑量給藥組、對(duì)照組與模型組對(duì)比小鼠血脂TC、TG及HDL-C水平,結(jié)果表明均能顯著降低TC、TG水平,升高HDL-C水平,實(shí)驗(yàn)表明各給藥組均有顯著的調(diào)節(jié)血脂作用。

4討論

目前,造成小鼠高脂血癥的常用方法有兩種,即喂食高脂飼料和灌胃高脂乳劑,這兩種造模方式均通過(guò)消化道吸收而形成,這與人類(lèi)的飲食模式形成高脂血癥相似。但喂食高脂飼料會(huì)使小鼠產(chǎn)生油膩感,易出現(xiàn)厭食,不易于掌握準(zhǔn)確的小鼠攝入量,因此本實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)[7]采用灌胃高脂乳劑法復(fù)制小鼠高脂血模型。由于甲狀腺素具有降血脂功能,為避免其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,在普通高脂乳劑(豬油,膽固醇,吐溫,丙二醇)的基礎(chǔ)上加入一定量的丙硫氧嘧啶,以抑制體內(nèi)甲狀腺素的分泌,并加入一定量的蔗糖使小鼠更容易形成高脂血癥模型[6]。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明荷葉水提物具有一定的降血脂功效,可為荷葉新劑型的開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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The Study on Antihyperlipidemia of Aqueous Extract of Lotus Leaf

GUO Hui-ling1,JIANG Lei1, HU Zhi-fang2,ZHAO Xiao-juan1, HU Lv-jiang1,Guo San-bao1

1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China;

2.JiangxiCollegeofTraditionalChineseMedicine,F(xiàn)uzhou344000,China.

Abstract:Objective:To study the antihyperlipidenmia effect of aqueous extract of lotus leaf on mice's lipids with hyperlipidemia. Methods: Kunming mice were randomly divided into six groups, including blank group, model group, positive control group, low does group (5g/kg aqueous extract of lotus leaf), middle does group (10g/kg), high does group (20g/kg), in addition to blank group, the other groups were established to became hyperlipidemia mice, and gave appropriate medicine, then determine the content of TC, TG, HDL-C. Results: Aqueous extract of lotus leaf could significantly decrease TC and TG levels, at the same time it could also rise the HDL-C level. Conclusion: Aqueous extract of lotus leaf show notable reducing blood lipid of mice.

Key words:Lotus Leaf; Aqueous Extract; Hyperlipidemia; Reducing Blood Lipid

收稿日期:(2014-09-16)編輯:薛鐵瑛

中圖分類(lèi)號(hào):R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

基金項(xiàng)目:*江西省教育廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(GJJ13599)。

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