張奕恂，韋永愛，王 華，郭 瑾，梅 超，羅 剛，王志鳳

(1.天津華津制藥有限公司，天津 300241； 2.天津市漢康醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司，天津 300409)

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頂空氣相色譜法測定甲磺酸加雷沙星中的甲磺酸乙酯殘留

張奕恂1，韋永愛2，王 華2，郭 瑾2，梅 超2，羅 剛2，王志鳳2

(1.天津華津制藥有限公司，天津 300241； 2.天津市漢康醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司，天津 300409)

目的：建立甲磺酸加雷沙星中甲磺酸乙酯的氣相色譜檢測方法。 方法：色譜系統(tǒng)采用AT-1000(30 m×0.53 mm，1 μm)氣相色譜柱，ECD檢測器，分流比為20∶1。結(jié)果：甲磺酸乙酯在37.56～338.04 ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 4)，平均回收率為99.5%，最低檢測濃度為2.5 ng/ml。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好且專屬性強(qiáng)。

氣相色譜法，甲磺酸加雷沙星，甲磺酸乙酯

甲磺酸加雷沙星一水合物是一種新的脫氟(6)喹諾酮類抗菌藥，化學(xué)名為：1-環(huán)丙基-8-(二氟甲氧基)-7-[(1R)-2,3-二氫-1-甲基-1H-異吲哚-5-基]-1,4-二氫-4-氧代-3-喹啉甲酸甲磺酸鹽一水合物，由富山化學(xué)公司與大正制藥共同研發(fā)，于2007年10月首次在日本上市，商品名為GENINAX○R。甲磺酸加雷沙星主要作用于細(xì)菌DNA螺旋酶和DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ，從而抑制DNA的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，對(duì)引起呼吸系統(tǒng)和耳鼻喉感染的金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌有較強(qiáng)的抗菌活性，對(duì)非致病菌，如肺炎支原體和肺炎衣原體的抗菌活性也較好[1，2]，臨床上用于治療咽炎、喉炎、扁桃體炎、急性支氣管炎等呼吸系統(tǒng)和耳鼻喉科系統(tǒng)感染。甲磺酸加雷沙星中的雜質(zhì)甲磺酸乙酯具有遺傳毒性，對(duì)于其分析方法尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道，本文通過建立氣相色譜法測定甲磺酸加雷沙星中的甲磺酸乙酯，對(duì)甲磺酸加雷沙星進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

GC2010氣相色譜儀，由日本島津公司生產(chǎn)；ECD檢測器，由日本島津公司生產(chǎn)；梅特勒AE 100 電子天平；AT-1000(酸改性聚乙二醇20 M毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.53 mm，1 μm)。甲磺酸乙酯(百靈威科技有限公司，批號(hào)10169291)； 無水硫代硫酸鈉(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠)；碘化鈉(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠)；甲苯為分析純，乙腈為色譜純。甲磺酸加雷沙星樣品(天津市漢康醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司，批號(hào)120507、120509、120511)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：AT-1000酸改性聚乙二醇20 M毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.53 mm，1 μm)；電子俘獲檢測器(ECD)；頂空瓶平衡溫度：60 ℃；平衡時(shí)間30 min；傳輸溫度：120 ℃；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：240 ℃；程序升溫：起始溫度40 ℃，以10 ℃/min升溫至130 ℃，再以70 ℃/min升溫至220 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口分流比為20∶1；載氣為氮?dú)猓皦?0 kPa。

2.2 溶液的制備

2.2.1 衍生試劑溶液A的配制 稱取無水硫代硫酸鈉30 mg與碘化鈉60.0 g，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.2.2 供試品溶液的配制 精密稱取本品50 mg，置頂空瓶中并加入0.50 ml的溶液A和0.50 ml乙腈溶劑，立即密封，即得。

2.2.3 對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制 分別取甲磺酸乙酯對(duì)照品75 mg，置10 ml量瓶中，加甲苯溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取50 μl，置100 ml量瓶中，加乙腈溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅰ。精密量取對(duì)照儲(chǔ)備液Ⅰ 5 ml，置50 ml量瓶中，加乙腈溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ。

2.2.4 對(duì)照品溶液的配制 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ 0.50 ml與溶液A 0.50 ml，置頂空瓶中，立即密封，即得。照殘留溶劑測定法測定，取空白溶劑、對(duì)照品溶液和供試品溶液分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

1.甲磺酸乙酯

2.3 線性關(guān)系考查 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ 0.10、0.30、0.50、0.70與0.90 ml，置頂空瓶中，加入溶液A至1 ml，立即密封；取上述密封好的溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，試驗(yàn)結(jié)果按照峰面積與濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1 353.0X-1 611.5(n=5，r=0.999 4)。表明甲磺酸乙酯在37.56～338.04 ng/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ 0.50 ml與溶液A 0.50 ml，置頂空瓶中，立即密封，作為對(duì)照溶液。照上述測定方法，取對(duì)照品溶液頂空進(jìn)樣，重復(fù)測定6次，得到對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.75%(n=6)。

2.5 中間精密度試驗(yàn) 按“2.4”項(xiàng)下的方法于不同時(shí)間、不同儀器及不同操作人員，再測定6次，得到對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.69%(n=6)。

2.6 最低檢測限 取對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ，按主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比為3∶1進(jìn)行定量稀釋，精密量取0.50 ml與溶液A 0.50 ml，置頂空瓶中，立即密封，依法測定，記錄色譜圖。甲磺酸乙酯的檢測限為2.5 ng/ml，相當(dāng)于0.05 μg/g的雜質(zhì)可檢出。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液和供試品溶液頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。取本品約50 mg，精密稱定，分別置于9個(gè)頂空瓶中，依次分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ0.40、0.50和0.60 ml，每個(gè)濃度平行3份，再分別加入溶液A至1 ml，立即密封；分別取上述溶液頂空進(jìn)樣，以測得量/添加量×100%計(jì)算回收率。測得回收率平均值為99.5%，RSD為1.22%。見表1。

表1 甲磺酸乙酯回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品檢測結(jié)果 取對(duì)照品溶液及供試品溶液頂空進(jìn)樣，照上述殘留溶劑測定法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。試驗(yàn)結(jié)果三批樣品中均未檢出甲磺酸乙酯。

3 討論

甲磺酸加雷沙星因含有甲磺酸根，在其藥物合成過程的第一和第二步反應(yīng)過程中使用了乙醇作為溶劑，少量殘存的乙醇會(huì)與甲磺酸反應(yīng)生成雜質(zhì)甲磺酸乙酯，因其含有遺傳毒性，在低濃度時(shí)可造成人體遺傳物質(zhì)的損傷，進(jìn)而導(dǎo)致基因突變并可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，對(duì)人體潛在危害不可低估。

甲磺酸加雷沙星片在日本上市的說明書描述，其日最大劑量為400 mg，根據(jù)EMA (European Medicines Agency)在2006年公布的遺傳毒性雜質(zhì)限度指南可知，該TTC估計(jì)值為每人1.5 μg/d，故通過計(jì)算甲磺酸乙酯的限度應(yīng)不得過3.75 μg/g。

在加雷沙星與甲磺酸成鹽之前也可以對(duì)中間體乙醇的殘留量進(jìn)行監(jiān)控，成鹽后經(jīng)過多次精制，亦能除去反應(yīng)可能產(chǎn)生的甲磺酸乙酯，并且3批樣品中均未檢出甲磺酸乙酯，上述檢測方法甲磺酸乙酯的檢測限為2.5 ng/ml，相當(dāng)于0.05 μg/g的雜質(zhì)可檢出，可有效檢出甲磺酸加雷沙星原料藥中可能殘留的甲磺酸乙酯，該方法專屬性好、靈敏度高，可有效監(jiān)測藥物的質(zhì)量，以保證用藥的安全性。

1 汪令. 加雷沙星的臨床研究[J]. 國外醫(yī)藥·抗生素分冊(cè)，2010,31(1):42-47

2 劉鑫榮.加雷沙星的臨床研究[J]. 國外醫(yī)藥·抗生素分冊(cè)， 2011,32(4):184-187

Determination of residues of ethyl methanesulfonate in garenoxacin mesylate by headspace gas chromatography

Zhang Yixun1,Wei Yongai2,Wang Hua2,Guo Jin2,Mei Chao2,Luo Gang2,Wang Zhifeng2

(1.Tianjin Huajin Pharmaceutical Co Ltd, Tianjin 300462;2.Tianjin Hankang Medicinal&Biological Technology Co Ltd, Tianjin 300409)

Objective： To establish a gas chromatography (GC)method for determining residues of ethyl methanesulfonate in garenoxacin mesylate. Methods： Ethyl methanesulfonate was quantitatively determined on a AT-1000 column was (30 m×0.53 mm,1 μm) with column temperature being increased by programmed control; ECD was used as the detector with a split flow ratio of 20∶1. Results： The calibration curve was linear over the range of 37.56～338.04 ng/ml(r>0.999);the average recovery was 99.5%. Conclution： The method is sample, accurate, reproducible and specific for determination of ethyl methanesulfonate in garenoxacin mesylate.

gas chromatography，genotoxic impurities，ethyl methanesulfonate

2015-05-19

R927.11

A

1006-5687(2015)04-0020-03