王穎欣，李昌英，何勝利

(1．河北省唐山市工人醫(yī)院分院，河北唐山063000;2．河北省灤縣食品藥品監(jiān)督管理局，河北灤縣063700;3．河北省灤縣人民醫(yī)院，河北灤縣063700)

目前，對于原發(fā)性上皮性卵巢癌患者術(shù)后給予以鉑類為基礎(chǔ)的化療是國際公認推薦的一線化療方案，但腫瘤對鉑類藥物耐藥是卵巢癌化療失敗的關(guān)鍵原因。卵巢癌耐藥機制與細胞凋亡異常有關(guān)，bcl－2蛋白和bax蛋白是重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白。CA125是重要的卵巢癌腫瘤標記物［1］，有研究顯示，CA125半衰期對監(jiān)測卵巢癌化療耐藥具有預(yù)測價值。筆者探討了bcl－2/bax比值及CA125半衰期與卵巢癌患者化療耐藥的關(guān)系，預(yù)測卵巢癌患者耐藥情況，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2003年1月—2007年12月唐山市工人醫(yī)院收治的有完整病史和隨訪資料的原發(fā)性上皮性卵巢癌患者84例，早期患者(Ⅰ～Ⅱa期)行卵巢癌根治術(shù)，晚期患者(Ⅱb～Ⅳ期)行腫瘤細胞減滅術(shù)，手術(shù)均由高年資醫(yī)生完成，均經(jīng)組織病理學(xué)確診，術(shù)后給予以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療4個療程以上，其中23例術(shù)前給予1～2個療程以鉑類為基礎(chǔ)的腹腔聯(lián)合靜脈化療者作為術(shù)前化療組，術(shù)前未給予化療者61例作為未化療組。將化療有效者38例列入化療敏感組，將化療無效者46例列入化療耐藥組。

1.2 研究方法 ①術(shù)前及術(shù)后每周用放射免疫法動態(tài)監(jiān)測患者血清CA125水平，CA125半衰期從術(shù)后首次使用化療藥物當日算起。②采用SP免疫組化染色方法，按試劑盒說明操作檢測bcl－2蛋白和bax蛋白表達情況。bcl－2單克隆抗體、bax多克隆抗體、SP免疫組化染色超敏試劑盒、DAB染色試劑盒均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。用已知bcl－2陽性表達、bax陽性表達的淋巴瘤切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 bcl－2蛋白和bax蛋白表達判定標準 請2位有經(jīng)驗的病理學(xué)專家閱片，判定染色結(jié)果。bcl－2、bax染色均定位于細胞漿，鏡下組織細胞結(jié)構(gòu)清晰、細胞漿有棕黃色顆粒沉著且染色明顯高于背景為陽性表達。高倍鏡下綜合染色強度和陽性細胞所占比例用組織學(xué)評分(∑Pi)計算。其中i代表細胞染色深淺，不顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分;P代表將陽性細胞的百分數(shù)值進行半定量分級:＜5%為0分，5%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～75%為3分，＞75%為4分。所得積分在1～3分為弱陽性(+)，4～8分為中度陽性(?)，9～12分為強陽性(?)。(?)及以上為陽性表達，用以計算陽性率。將bcl－2、bax蛋白表達積分相除計數(shù)bcl－2/bax比值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19．0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 bcl－2/bax比值與化療敏感性的關(guān)系 化療耐藥組中bcl－2/bax比值＞1者36例，bcl－2/bax比值≤1者10例;化療敏感組中bcl－2/bax＞1者9例，bcl－2/bax比值≤1者29例?；熌退幗M中bcl－2/bax比值＞1者所占比例明顯高于化療敏感組(χ2=24．624，P=0．000)。

2.2 CA125半衰期與化療敏感性的關(guān)系 化療耐藥組中CA125半衰期＞4周者32例，≤4周者14例;化療敏感組中CA125半衰期＞4周者17例，≤4周者21例?；熌退幗M中CA125半衰期＞4周者所占比例明顯高于化療敏感組(χ2=5．215，P=0．022)。剔除術(shù)前化療因素對 CA125數(shù)值的影響，單獨分析61例術(shù)前未經(jīng)化療患者的術(shù)前及術(shù)后每周CA125水平，化療耐藥者34例，其中CA125半衰期＞4周者26例，≤4周者8例;化療敏感者27例，其中CA125半衰期＞4周者12例，≤4周者15例。化療耐藥組中CA125半衰期＞4周者所占比例明顯高于化療敏感組(χ2=6．464，P=0．011)。

2.3 bcl－2/bax比值與術(shù)前是否化療的關(guān)系 術(shù)前未行化療組中bcl－2/bax比值＞1者38例，≤1者23例;術(shù)前化療組中bcl－2/bax比值＞1者7例，≤1者16例。術(shù)前未行化療組中bcl－2/bax比值＞1者所占比例高于術(shù)前化療組(χ2=6.735，P=0．009)。

2.4 CA125半衰期與術(shù)前是否化療的關(guān)系 術(shù)前未行化療組中CA125半衰期＞4周者38例，≤4周者23例;術(shù)前化療組中CA125半衰期＞4周者11例，≤4周者12例。2組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1．422，P=0．233)。

2.5 bcl－2/bax比值與CA125半衰期的關(guān)系 84例上皮性卵巢癌患者中CA125半衰期＞4周者49例，其中bcl－2/bax比值＞1者35例，≤1者14例;CA125半衰期≤4周者35例，其中bcl－2/bax比值＞1者10例，≤1者25例。CA125半衰期＞4周者中bcl－2/bax比值＞1者所占比例高于半衰期≤4周者(χ2=14．897，P=0．000);bcl－2/bax比值與 CA125 半衰期之間呈正相關(guān)(r=0．424)。

3 討 論

CA125是一種不均一的高分子黏蛋白樣糖蛋白，兼有膜結(jié)合型與游離型2種形態(tài)。CA125被認為是判斷預(yù)后的一個重要指標［2－3］，對血清 CA125進行動態(tài)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)完全緩解和部分緩解的上皮性卵巢癌患者CA125水平均明顯下降，而病情進展者均上升。由于血清CA125水平降至一半所需時間比較全面地反映了術(shù)后血清CA125水平的變化速率，也可說明卵巢癌組織對化療的反應(yīng)性，所以可以認為血清CA125水平降至一半所需時間有助于判斷卵巢癌的耐藥情況。目前血清CA125水平的監(jiān)測方法簡單，已成為卵巢癌治療中的一項常規(guī)檢查，在臨床中也可以通過觀察化療過程中血清CA125水平的變化對卵巢癌患者的耐藥及預(yù)后作出及時正確的判斷，進而改變治療策略，以期改善患者的預(yù)后。Boivin等［4］研究認為，腫瘤細胞CA125的表達可能與患者對鉑類化療耐藥相關(guān);賈美群等［5］研究發(fā)現(xiàn)，耐藥組患者血清CA125半衰期明顯長于敏感組(P=0．000 1)。本研究結(jié)果與之相似，即化療耐藥組中CA125半衰期＞4周者所占比例高于化療敏感組，說明在術(shù)后的化療過程中如果血清CA125半衰期＞4周，可能提示耐藥。

bcl－2蛋白和bax蛋白是重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白，bcl－2蛋白抑制凋亡，而bax蛋白促進凋亡，二者的比例調(diào)控著細胞的凋亡［6］。抗癌藥物可以通過降低bcl－2/bax比值引起凋亡的發(fā)生［7］。本研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)前未化療組中bcl－2/bax比值＞1者所占比例高于術(shù)前化療組，提示化療藥物可以調(diào)節(jié)bcl－2蛋白和bax蛋白表達，且朝向bcl－2蛋白低表達及bax蛋白高表達方向調(diào)節(jié)，使bcl－2/bax比值下降，誘導(dǎo)細胞凋亡，發(fā)揮抗腫瘤作用。但術(shù)前化療并不能使患者術(shù)后CA125水平下降更快，推測可能與術(shù)前化療患者手術(shù)病理期別較晚以及更易產(chǎn)生化療耐藥有關(guān)。

大量研究證實，腫瘤化療耐藥性的產(chǎn)生是腫瘤細胞凋亡受抑或凋亡易感性降低的結(jié)果。張潔等［8］檢測了順鉑作用下卵巢癌敏感細胞A2780與耐藥細胞A2780/DDP凋亡水平的變化，結(jié)果證實卵巢癌敏感細胞和耐藥細胞發(fā)生凋亡是順鉑發(fā)揮細胞毒效應(yīng)的主要作用機制。耐藥細胞A2780/DDP的耐藥系數(shù)RI=5，說明與親代敏感細胞相比，順鉑誘導(dǎo)卵巢癌細胞發(fā)生凋亡的能力顯著下降。Pepper等［9］在對慢性淋巴細胞白血病患者的研究中，發(fā)現(xiàn)bcl－2/bax比值與細胞凋亡及藥物敏感性有關(guān)，體外實驗發(fā)現(xiàn)bcl－2/bax比值高的細胞可以抑制化療藥物引起的細胞凋亡，在臨床上表現(xiàn)為化療耐藥。另有研究發(fā)現(xiàn)，急性髓內(nèi)淋巴瘤、B細胞非何杰金淋巴瘤、卵巢癌中bcl－2/bax相對比例增高者對化療不敏感，并可作為預(yù)后不良的指標［10－12］。本研究發(fā)現(xiàn)，bcl－2/bax比值＞1的患者耐藥發(fā)生率高于bcl－2/bax≤1者，提示bcl－2高表達和bax低表達(bcl－2/bax＞1)與上皮性卵巢癌化療耐藥有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，bcl－2/bax比值與CA125半衰期呈正相關(guān)，即CA125半衰期越長，bcl－2/bax比值越大。

綜上所述，檢測bcl－2蛋白及bax蛋白表達并計算其比值，聯(lián)合CA125半衰期可以預(yù)測上皮性卵巢癌對鉑類藥物化療的敏感性，從而及早篩選耐藥者，調(diào)整治療方案，以期取得更好的預(yù)后。

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