泰國葛根化學(xué)成分研究

劉喜舞1，葉惠煊2，戴玲3，劉向前2*

(1.武警湖南省總隊醫(yī)院藥劑科，長沙 410006；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長沙 410208；3.長沙博海生物科技有限公司，長沙 410205)

摘要：目的研究泰國葛根的化學(xué)成分。方法泰國葛根樣品用正己烷提取除雜后，藥渣用乙酸乙酯提取，得到的濾液濃縮后，用甲醇提取得到精制乙酸乙酯部位；乙酸乙酯提取后的藥渣用甲醇提取，濃縮后再用正丁醇萃取得正丁醇部位；利用正相硅膠、MDS-5等常規(guī)柱色譜技術(shù)分離得到單體化合物，根據(jù)其理化性質(zhì)及波譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果分離得到5個單體化合物，分別被鑒定為Mirificoumestan(1)，十七烷酸(2)，去氧葛雌素(3)，葛根素(4)，大豆苷(5)。結(jié)論化合物2是首次從該植物中分離得到。

關(guān)鍵詞：葛屬；泰國葛根；化學(xué)成分

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.002

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

基金項目：長沙市科技局科技計劃重點項目(編號：K1207010-21)

作者簡介：劉喜舞，男，副主任藥師

收稿日期：(2015-05-11)

Study on chemical constituents ofPuerariamirifica

LIU Xiwu1，YE Huixuan2，DAI Ling3，LIU Xiangqian2*(1.Department of Pharmacy，Hospital of Hu′nan Armed Police Corps，Changsha 410006，China；2.School of Pharmacy，Hu′nan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，China；3.Changsha Broad-Ocean Bio-Science and Technique Limited Company，Changsha 410205，China)

Abstract:ObjectiveTo study the chemical constituents of Pueraria mirifica.MethodsPueraria mirificawas extracted with n-hexane to remove impurity，then the filtrate and residue were extracted with methanol，and the concentrated solutions were extracted with ethyl acetate and n-butyl alcohol，respectively. The compounds were isolated and obtained by column chromatography including silica gel and MDS-5. Their structures were elucidated by means of physiochemical properties and spectral analysis. Results 5 compounds were isolated from Pueraria mirifica. And their structures were elucidated as: mirificoumestan(1)，heptadecanoic acid(2)，deoxymiroestrol (3)，puerarin (4)，and daidzin(5)，respectively. ConclusionCompound 2 was isolated from this plant for the first time.

Key words:PuerariaDC；Puerariamirifica；chemical constituents

*通信作者：劉向前，男，教授，博士研究生導(dǎo)師

泰國葛根Puerariamirifica是豆科葛屬植物的塊根，該植物是生長于泰國北部的一種神奇的植物，有很強的雌激素樣作用，常被用來研究治療骨質(zhì)疏松癥、更年期綜合征的荷爾蒙替代療法及豐胸[1-2]。其特有成分葛雌素是目前發(fā)現(xiàn)的最強植物雌激素，對心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等疾病都有較好的治療作用[3-5]。為了更全面地研究泰國葛根資源，本課題對其化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到5個單體化合物，分別鑒定為mirificoumestan(1)，十七烷酸(2)，去氧葛雌素(3)，葛根素(4)，大豆苷(5)。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent 1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；AUW220D分析天平(日本島津公司)；FW177中草藥粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)；予華HH-S型水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)。

1.2材料甲醇、乙酸乙酯、正己烷、氯仿等均為分析純(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)；薄層層析硅膠G、GF254(青島海洋硅膠干燥劑廠)；CMC-Na(天津科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心)；柱層析硅膠200～300目(青島海洋硅膠干燥劑廠)；MDS-5型反相制備色譜固定相200～300目(北京麥迪生新技術(shù)開發(fā)中心)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(瑞典Pharmacia公司)。泰國葛根由韓國L&P飼料公司提供，經(jīng)韓國慶熙大學(xué)藥學(xué)院YOOK CHANGSOO教授鑒定為豆科葛屬植物泰國葛根Puerariamirifica的干燥塊根。

2提取與分離

取泰國葛根藥材，干燥，粉碎過一號篩得到泰國葛根粗粉。取粗粉約350 g，加入4倍量正己烷，用索氏提取器提取8 h，提取2次。藥渣用4倍量乙酸乙酯回流提取8 h，提取2次。濾過后合并2次濾液，并將濾液濃縮至適當(dāng)體積，置于水浴上蒸干，得到乙酸乙酯部位浸膏，再加入約200 mL甲醇，超聲充分溶解，濾過，濾液濃縮至浸膏，得到精制后的乙酸乙酯部位浸膏3.8 g。乙酸乙酯提取后剩余的殘渣繼續(xù)用8倍量工業(yè)甲醇回流提取3次，濾過后回收溶劑，濃縮至浸膏，用水飽和的正丁醇萃取，得到正丁醇部位8.5 g。

乙酸乙酯精制部位浸膏3.8 g，經(jīng)硅膠柱色譜以正己烷-乙酸乙酯(1∶3)等度洗脫，得到3個粗餾分Re1(1.0 g)、Re2(0.8 g)、Re3(23 mg)。Re1經(jīng)反相柱色譜，以體積分?jǐn)?shù)30%～100%甲醇梯度洗脫，經(jīng)甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得到化合物1(21 mg)和化合物2(23 mg)。Re3用甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得到化合物3(6.4 mg)。正丁醇部位浸膏8.5 g，經(jīng)硅膠柱色譜以氯仿-甲醇(20∶1→1∶1)梯度洗脫，得到2個粗餾分Rb1(800 mg)和Rb2(153 mg)。Rb1經(jīng)反相柱色譜，以體積分?jǐn)?shù)70%甲醇等度洗脫，經(jīng)甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得到化合物4(80 mg)；Rb2經(jīng)反相柱色譜，以體積分?jǐn)?shù)70%甲醇等度洗脫，經(jīng)甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得到化合物5(35 mg)。

3結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1淡黃色針狀結(jié)晶，F(xiàn)eCl3顯色陽性。由1H-NMR中的δ5.27、δ4.13、δ1.81、δ1.62可知有異戊烯基，δ3.80為典型的甲氧基基團(tuán)。低場δ：7.86(d，J=8.4 Hz)、6.98(dd，J=8.4，1.8 Hz)、6.90(d，J=1.8 Hz)證明3個氫在B環(huán)，COSY譜也印證了這點。1H-NMR(C3D6O，500 MHz)δ：7.86(1H，d，J=8.4 Hz)，6.98(1H，dd，J=8.4，1.8 Hz)，6.90(d，J=1.8 Hz)；13C-NMR(C3D6O，125 MHz)δ：154.2(C-2)，105.6(C-3)，198.1(C-4)，123.4(C-5)，114.1(C-6)，161.1(C-7)，103.3(C-8)，161.8(C-9)，104.3(C-10)，124.5(C-1′)，152.7(C-2′)，97.8(C-3′)，145.4(C-4′)，150.9(C-5′)，115.5(C-6′)，28.6(C-7′)，125.5(C-8′)，130.4(C-9′)，25.7(C-10′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]比較基本一致，故確定化合物1為mirificoumestan。

化合物2白色片狀結(jié)晶，10%硫酸乙醇顯紫紅色。1H-NMR在低場區(qū)中有活潑氫質(zhì)子信號，提示可能有羧基。在高場區(qū)的一個亞甲基信號δ2.80(4H，d，J=13.37 Hz)、一個δ0.86(3H，t，J=13.62 Hz)的甲基信號及多個相互重疊的亞甲基信號δ1.28～2.84。13C-NMR有一個甲基信號δ14.31和多個亞甲基信號。多種信息提示該化合物為飽和長鏈脂肪酸類化合物。與文獻(xiàn)[7]比較基本一致，鑒定化合物2可能為十七烷酸。

化合物3白色無定形粉末，F(xiàn)eCl3顯色陽性。由δ7.05和δ6.58、δ6.58和δ6.36有相近的耦合常數(shù)，并通過COSY譜可知它們相互耦合，結(jié)合DEPT譜推斷為CH。其余的δ6.23、δ3.32、δ3.66、δ0.55和δ1.23均為單一峰，結(jié)合COSY譜確認(rèn)無任何耦合情況。δ2.74出現(xiàn)多重峰，推測是H-12和H-19耦合的結(jié)果，并結(jié)合COSY譜驗證了這種情況。1H-NMR(C3D6O，400 MHz)δ：7.05(d，J=8.6 Hz，H-1)，6.58(dd，J=8.4，2.4 Hz，H-2)，6.36(d，J=2.5 Hz，H-4)，6.23(s，H-7)，3.32(s，H-9)，2.74(m，H-12)，2.79(m，H-13)，2.56(1H，d，J=18.6 Hz，H-16)，2.83(1H，d，J=18.4 Hz，H-16)，3.66(s，H-18)，1.97(2H，m，H-19)，0.55(s，H-20)，1.23(s，H-21)；13C-NMR(C3D6O，100 MHz)δ131.0(C-1)，111.8(C-2)，157.2(C-3)，103.4(C-4)，153.6(C-5)，138.4(C-7)，117.3(C-8)，40.9(C-9)，113.5(C-10)，38.0(C-11)，45.1(C-12)，45.1(C-13)，79.0(C-14)，210.2(C-15)，54.7(C-16)，77.8(C-17)，79.0(C-18)，40.9(C-19)，32.2(C-21)。以上數(shù)據(jù)通過與文獻(xiàn)[8]比較基本一致，故確定化合物3為去氧葛雌素。

化合物4白色無定形粉末(甲醇)，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽性，提示結(jié)構(gòu)中含有酚羥基。根據(jù)1H-NMR(CD3OD，400 MHz)譜中的δ8.17(1H，s)是異黃酮2位質(zhì)子的特征信號，結(jié)合13C-NMR(CD3OD，100 MHz)譜中的δ175.9判斷該化合物為異黃酮類物質(zhì)。1H-NMR中9.08(1H，s)、8.51(1H，s)為酚羥基信號，8.02(d，J=8.8 Hz)，6.94(d，J=8.8 Hz)為A環(huán)氫信號，7.46(d，J=8.8 Hz)，6.87(d，J=8.6 Hz)為B環(huán)的H-2′，6′和H-3′，H-5′。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：8.17(1H，s，H-2)，8.02(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.46(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.94(1H，d，J=8.8 Hz，H-6)，6.87(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，5.19(1H，d，J=9.7 Hz，Glc-H-1″)，3.55～3.88(6H，m，Glc-H-2″～6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：153.0(C-2)，124.3(C-3)，175.9(C-4)，127.7(C-5)，118.6(C-6)，161.8(C-7)，112.9(C-8)，156.4(C-9)，115.9(C-10)，124.3(C-1′)，131.0(C-2′，6′)，116.5(C-3′，5′)，158.2(C-4′)，76.0(C-1″)，73.7(C-2″)，79.7(C-3″)，70.7(C-4″)，82.1(C-5″)，61.7(C-6″)。與文獻(xiàn)[9]比較基本一致，故鑒定化合物4為葛根素。

化合物5白色針狀結(jié)晶(DMSO)，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽性，提示結(jié)構(gòu)中含有酚羥基。根據(jù)1H-NMR(DMSO，400 MHz)譜中的δ8.39(1H，s)是異黃酮2位質(zhì)子的特征信號，結(jié)合13C-NMR(DMSO，100 MHz)譜中的δ174.7判斷該化合物為異黃酮類物質(zhì)。1H-NMR中9.56(1H，s)為酚羥基信號，8.04(d，J=8.8 Hz)，7.14(d，J=8.8 Hz)，7.23(d，J=2.2 Hz)為A環(huán)氫信號，7.40(d，J=8.6 Hz)，6.81(d，J=8.6 Hz)為B環(huán)的H-2′，6′和H-3′，H-5′。1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：8.39(1H，s，H-2)，8.04(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.40(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′)，7.23(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，7.14(1H，dd，J=8.8，2.2 Hz，H-6)，6.81(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，5.10(1H，d，J=7.2 Hz，Glc-H-1″)，3.40～3.90(6H，m，Glc-H-2″～6″)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：153.3(C-2)，123.7(C-3)，174.7(C-4)，126.9(C-5)，115.6(C-6)，161.4(C-7)，103.3(C-8)，157.0(C-9)，118.5(C-10)，122.3(C-1′)，130.1(C-2′，6′)，115.0(C-3′，5′)，157.2(C-4′)，100.0(C-1″)，73.0(C-2″)，77.2(C-3″)，69.6(C-4″)，76.5(C-5″)，60.6(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10-11]比較基本一致，故鑒定化合物5為大豆苷。

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