宋菲菲，林 凱，蔡 婷，徐顧榕，袁春紅，張 慶，向文良

(西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川省食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，西華大學(xué)古法發(fā)酵(釀造)生物技術(shù)研究所，四川 成都 610039)

·生物工程·

弱化F1F0-ATP酶植物乳桿菌的突變分析及其作為益生添加物在四川泡菜中的應(yīng)用探索

宋菲菲，林 凱，蔡 婷，徐顧榕，袁春紅，張 慶，向文良*

(西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川省食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，西華大學(xué)古法發(fā)酵(釀造)生物技術(shù)研究所，四川 成都 610039)

從退化的植物乳桿菌中篩選到弱化F1F0-ATP酶突變株LPS08、LPS21和LPS24。在LPS08的F1F0-ATP酶β亞基中，Phe-91、Ser-380和Leu-436分別被Leu、Pro和Pro替換，導(dǎo)致F1F0-ATP酶的活性降低了5.61%；LPS21中，Leu-268突變改變了β亞基的構(gòu)像，導(dǎo)致F1F0-ATP酶活性降低43.44%；LPS24中Asn-205、Ser-380和Pro-419分別被Ser、Leu和Leu所取代，降低F1F0-ATP酶活性19.46%。LPS08、LPS21和LPS24分別接入初始pH6.5的MRS液體培養(yǎng)基中37 ℃培養(yǎng)72 h后，pH值分別為3.73、3.82和4.25，酸度(乳酸計(jì))分別為2.0、1.56和0.95 g/100mL。按106CFU/mL鹽鹵量分別將3株突變株接入pH4.6的無(wú)菌泡菜中，30 °C孵育7 d后，僅有LPS21的泡菜鹽鹵pH維持在4.2以上，滿足四川泡菜對(duì)酸味口感的要求。同時(shí)，鹽鹵中LPS21菌體的含量(7.27 log CFU/mL)滿足國(guó)際上益生菌食品中關(guān)于活菌量的要求。因此，弱化F1F0-ATP酶LPS21突變株作為益生添加物添加到泡菜中生產(chǎn)益生菌泡菜時(shí)，能夠從根本上解決益生菌泡菜在常溫下貯存、運(yùn)輸和銷(xiāo)售過(guò)程中的后酸化問(wèn)題。

植物乳桿菌；F1F0-ATP酶；突變分析；益生添加物；四川泡菜

四川泡菜作為中國(guó)泡菜的典型代表，以其獨(dú)特的風(fēng)味享譽(yù)國(guó)內(nèi)外。近年來(lái)，隨著我國(guó)泡菜產(chǎn)業(yè)的高速發(fā)展和人們泡菜消費(fèi)量的急劇增加，富含乳酸的傳統(tǒng)益生泡菜由于貨架期短，銷(xiāo)售區(qū)域狹窄，已不能滿足行業(yè)發(fā)展的要求；因而，國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)泡菜企業(yè)開(kāi)始生產(chǎn)滅菌泡菜。滅菌泡菜產(chǎn)品中不含活的乳酸菌，延長(zhǎng)了產(chǎn)品貨架期、拓展了銷(xiāo)售區(qū)域，但也因此失去了乳酸菌帶來(lái)的益生功能。將益生菌作為益生添加物添加到食品中是目前國(guó)際上生產(chǎn)非奶益生食品的重要方法[1-2]。為了彌補(bǔ)泡菜因滅菌而失去的益生功能，國(guó)內(nèi)部分企業(yè)也開(kāi)始嘗試向滅菌后的泡菜中添加乳酸菌；但是，這些企業(yè)為了節(jié)約成本，對(duì)添加了益生菌的泡菜產(chǎn)品往往不愿意采用冷鏈貯存、運(yùn)輸和銷(xiāo)售，因此產(chǎn)品常常出現(xiàn)后酸化。后酸化是制約滅菌泡菜添加益生菌以生產(chǎn)益生菌泡菜的關(guān)鍵難題。那么，能否尋找到一種既能在滅菌泡菜中正常繁殖，又防治后酸化的乳酸菌作為益生添加物呢？

植物乳桿菌是泡菜發(fā)酵中后期的優(yōu)勢(shì)菌種[3-4]，也是非奶益生食品常選用的益生添加物[1-2]。植物乳桿菌具有較強(qiáng)的產(chǎn)酸能力和耐酸性[5]，當(dāng)外界環(huán)境的pH值降低時(shí)，植物乳桿菌質(zhì)膜上的F1F0-ATP酶通過(guò)水解ATP提供能量將細(xì)胞內(nèi)的H+泵出胞外，維持胞內(nèi)pH接近中性，胞內(nèi)代謝不受影響，從而能夠在低pH值環(huán)境中繼續(xù)生長(zhǎng)和產(chǎn)酸。這是導(dǎo)致滅菌泡菜添加植物乳桿菌后在常溫下貯存、運(yùn)輸和銷(xiāo)售發(fā)生后酸化的主要原因。F1F0-ATPase是一種跨膜蛋白酶復(fù)合物，由胞外的F1和嵌入細(xì)胞膜的F02部分構(gòu)成[6]。其中，F(xiàn)1由α、β、γ、δ和ε 5種亞基構(gòu)成。所有乳酸菌中都含有F1F0-ATP酶，它不僅可以調(diào)控乳酸菌胞內(nèi)的pH，還可以增強(qiáng)細(xì)胞的耐酸性[7-8]，促進(jìn)能量ATP轉(zhuǎn)化。Jaichumjai等[9]研究表明：低活性的F1F0-ATP酶變異株對(duì)酸性環(huán)境非常敏感，當(dāng)外界環(huán)境pH值降到一定程度時(shí)，細(xì)胞內(nèi)H+的泵出效率降低，代謝受到影響，產(chǎn)酸能力下降。因此，選用低活性F1F0-ATP酶的植物乳桿菌突變菌株作為益生添加物，成為了滅菌泡菜添加乳酸菌后防治在常溫下貯存、運(yùn)輸和銷(xiāo)售環(huán)節(jié)發(fā)生后酸化的有效方法。

基于此，我們以產(chǎn)酸退化的植物乳桿菌為研究對(duì)象，篩選弱化F1F0-ATP酶突變株，分析F1F0-ATP酶β亞基的突變以及突變對(duì)F1F0-ATP酶活性的影響，評(píng)估無(wú)菌四川泡菜中添加弱化F1F0-ATP酶植物乳桿菌后的后酸化和菌體生長(zhǎng)繁殖情況，為四川泡菜篩選益生添加物提供新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

產(chǎn)酸退化的植物乳桿菌和出發(fā)菌株CCTCC 207202，由四川高福記生物科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 弱化F1F0-ATP酶植物乳桿菌的篩選

100 μL產(chǎn)酸退化植物乳桿菌活化后的懸液分別涂布于含有0 和500 μg/mL新霉素的MRS固體培養(yǎng)基平板上， 37 ℃培養(yǎng)2～3 d，挑選微小的菌落做后續(xù)分析。

1.2.2 弱化F1F0-ATP酶植物乳桿菌的生長(zhǎng)特性分析

過(guò)夜培養(yǎng)的菌體接種到不同初始pH值的MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃靜止培養(yǎng)，560 nm測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間菌懸液的OD值，pH計(jì)測(cè)定培養(yǎng)液pH值。培養(yǎng)液中可滴定酸度以乳酸計(jì)，依據(jù)AOAC 2000方法進(jìn)行。

1.2.3 F1F0-ATP酶的β亞基編碼序列的擴(kuò)增及突變分析

采用CTAB-SDS方法[10]分別提取突變株與出發(fā)株CCTCC 207202的總DNA，PCR擴(kuò)增F1F0-ATP酶 的β亞基部分編碼堿基序列。擴(kuò)增引物atpDf：5′-GTT GGT AAR ACY GTT TTA ATT- 3′；atpDr：5′-TCT TCR GAY AAT TCA TC- 3′[11]。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性1 min，50 ℃退火1 min，72 ℃延伸5 min，35個(gè)循環(huán)后72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物連接到pGM-T載體上，克隆入感受態(tài)E.coliDH5α，提取重組質(zhì)粒DNA，測(cè)序。比較所得序列編碼的氨基酸，探尋突變點(diǎn)。

1.2.4 F1F0-ATP酶活性分析

參見(jiàn)Nannen和Hutkins關(guān)于乳酸菌F1F0-ATP酶活性的測(cè)試方法[12]，分析弱化F1F0-ATPase植物乳桿菌的ATP酶活性。MRS培養(yǎng)基中，37 ℃靜置培養(yǎng)突變株18 h，4 ℃條件下8 000g離心2 min收集菌體，1.0 mM MgCl2溶液洗滌2次。菌體沉淀立即重懸在0.5 M、pH 4.6、2 mM MgCl2的雙甘氨肽氫氧化鉀緩沖液中，添加溶菌酶至1 mg/mL后37 ℃，80 r/min孵育2 h后4 ℃條件下，10 000g離心10 min。沉淀重懸在含10 μg/mLDNA酶的1 mmd/L MgCl2溶液中，37 ℃、80 r/min孵育30 min。4 ℃、5 000g離心5 min除去未裂解的菌體細(xì)胞，4 ℃、12 000g離心10 min收集細(xì)胞膜，1 mmd/L MgCl2溶液洗滌細(xì)胞膜2次后并重懸在1mmd/L MgCl2溶液中。利用比色法測(cè)定F1F0-ATP酶催化的ATP釋放無(wú)機(jī)磷酸(Pi)的量來(lái)判定F1F0-ATP酶的活性[12]。

1.2.5 弱化F1F0-ATP酶菌株對(duì)四川泡菜的酸化評(píng)估

分別將植物乳桿菌CCTCC 207202和突變株接種到100 mL的MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃靜置培養(yǎng)15 h后，4 000g離心5 min收集菌體。 菌體沉淀用無(wú)菌生理鹽水重懸后加入無(wú)菌泡菜產(chǎn)品中，添加106CFU/mL的鹽鹵。添加菌體后的泡菜產(chǎn)品在30 ℃環(huán)境中放置7 d，以泡菜鹽鹵pH值的變化評(píng)估泡菜的后酸化程度。

2 結(jié)果與討論

2.1 弱化F1F0-ATP酶突變株的篩選

利用新霉素作為篩選壓力，從產(chǎn)酸退化的植物乳桿菌中篩選弱化F1F0-ATPase菌株，結(jié)果如圖1所示。500 μg/mL的新霉素MRS平板(圖1(A))上的菌落數(shù)明顯少于0 μg/mL新霉素的對(duì)照MRS平板(圖1(B))上的菌落。這一結(jié)果表明：植物乳桿菌CCTCC 207202在生產(chǎn)或者保藏的過(guò)程中，由于某些不利因素導(dǎo)致某些菌株已經(jīng)發(fā)生了產(chǎn)酸性能的退化。挑選圖1(A)的MRS平板上生長(zhǎng)較好的菌落進(jìn)一步純化后得到編號(hào)為L(zhǎng)PS08、LPS21和LPS24純菌株作后續(xù)分析。

圖1 植物乳桿菌在500μg/mL(A)和0μg/mL(B)的新霉素MRS平板上的菌落分布

2.2 F1F0-ATP酶突變株的表型分析

在初始pH值6.5的MRS液體培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)：植物乳桿菌CCTCC 207202和突變株LPS08培養(yǎng)12 h進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，然而突變株LPS21和LPS24進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期則分別需要培養(yǎng)16 h和14 h；但是進(jìn)入穩(wěn)定期后，LPS21和LPS24的菌體密度與CCTCC 207202和LPS08的菌體密度相差不大，皆在OD560nm2.25～2.45之間。在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，LPS21和LPS24的產(chǎn)酸量明顯低于CCTCC 207202和LPS08的產(chǎn)酸量(圖2)。72 h后，CCTCC 207202和LPS08產(chǎn)酸量約為2.0 g/100 mL, LPS21和LPS24則分別為1.56 g/100 mL和0.95 g/100 mL。培養(yǎng)過(guò)程中，突變株與出發(fā)株的培養(yǎng)液pH值變化也表現(xiàn)出了與產(chǎn)酸類(lèi)似的趨勢(shì) (圖2)。培養(yǎng)8 h時(shí)，3株突變株MRS培養(yǎng)液的pH值皆高于出發(fā)株CCTCC 207202的pH值，然而當(dāng)培養(yǎng)到72 h后，僅有LPS21培養(yǎng)液的pH值維持在泡菜酸味的臨界值4.2以上(pH<4.2,泡菜過(guò)酸)，表明了LPS21對(duì)酸極為敏感。因此，突變株LPS21作為滅菌泡菜的益生添加物時(shí)，是一株極有可能阻止四川泡菜后酸化的優(yōu)良候選菌株。

圖2 接種植物乳桿菌CCTCC 207202和其突變株的MRS液體培養(yǎng)基的pH值和酸度變化(■和□、◆和◇、▲和△、●和○分別指示CCTCC 207202和突變株LPS08、LPS21和LPS24，實(shí)心和空心圖示分別代表pH值和酸度)

2.3 F1F0-ATP酶的活性分析

為了進(jìn)一步調(diào)查突變株酸敏感性的原因，分析3株突變株和出發(fā)株的F1F0-ATP酶在pH4.6(與泡菜產(chǎn)品pH一致)條件下的活性，結(jié)果如表1所示。與出發(fā)株CCTCC 207202相比較，LPS08菌株的F1F0-ATP酶的活性?xún)H下降了5.61%，然而，LPS21和LPS24的F1F0-ATP酶的活性則分別下降了43.44%和19.46%。Vol Ballmoos等[7]認(rèn)為微生物細(xì)胞內(nèi)H+平衡的調(diào)控主要依靠細(xì)胞膜F1F0-ATP酶催化ATP獲得能量進(jìn)行調(diào)節(jié)；因此，3株突變株的F1F0-ATP酶活性的差異表明了它們?cè)贖+跨膜運(yùn)輸能量代謝方面的不同，從而造成了細(xì)胞內(nèi)H+的平衡失調(diào)程度不同，因而菌體在生長(zhǎng)速率、產(chǎn)酸方面存在著差異。同時(shí)，也暗示著突變發(fā)生在F1F0-ATP酶β亞基的不同位點(diǎn)。

注：“*”和“**”表示顯著性差異(*P<0.05, **P<0.01;n= 3)。

2.4 F1F0-ATP酶β亞基的突變分析

PCR分別擴(kuò)增發(fā)株CCTCC207202和突變株LPS08、LPS21和LPS24的F1F0-ATP酶β亞基的編碼序列(GenBanK接收號(hào)：KC592155、KC592156、KC592157和KC592158)，編碼序列編碼的氨基酸序列利用ClustalX1.8對(duì)齊，結(jié)果如圖3所示。與CCTCC 207202相比，突變株F1F0-ATP酶β亞基上某些位點(diǎn)的氨基酸已經(jīng)發(fā)生了突變。其中，在LPS08菌株的F1F0-ATP酶β亞基上，Phe-91、Ser-380和Leu-436分別被Leu、Pro和Pro替換；但是由于這些突變位于F1F0-ATP酶β亞基的保守域外，因此并沒(méi)有顯著影響LPS08菌株的F1F0-ATP酶的活性。然而，在突變株LPS21中， Leu-268突變位于F1F0-ATP酶的β亞基與α亞基相互作用的區(qū)域上，其突變?nèi)菀赘淖儲(chǔ)聛喕臉?gòu)像(圖4)?！皹?gòu)象變化假說(shuō)”認(rèn)為：F1F0-ATP酶的β亞基構(gòu)象的改變是影響酶活性的主要因素[13- 14]；因此，盡管LPS21只有一個(gè)突變，但對(duì)F1F0-ATP酶的活性影響極大。與LPSM21相比，在LPS24的F1F0-ATP酶的β亞基中，Asn-205、Ser-380和Pro-419分別被Ser、Leu和Leu所取代；但是，由于僅有Ser-205突變位于臨近F1F0-ATP酶的β亞基和α亞基的相互作區(qū)域，而其他突變沒(méi)有發(fā)生在ATP接合位點(diǎn)、模體或與α亞基的相互作用區(qū)域，因此LPS24的突變并沒(méi)有引起F1F0-ATP酶活性太大的變化。F1F0-ATP酶β亞基的突變揭示了3株突變株的F1F0-ATP酶活性存在差異的內(nèi)在本質(zhì)。

圖3 植物乳桿菌CCTCC 207202和突變株LPS08、LPS21和LPS24的F1F0-ATP酶β亞基氨基酸突變區(qū)域的序列比對(duì)(*表示突變位點(diǎn))

圖4 植物乳桿菌CCTCC 207202(A)和突變株LPS21(B)F1F0-ATP酶β亞基的莖環(huán)構(gòu)像(氨基酸260～280)

2.5 F1F0-ATP酶突變株在阻止四川泡菜中的后酸化時(shí)所起的作用分析

為了進(jìn)一步了解弱化F1F0-ATP酶突變株作為益生添加物時(shí)能否阻止四川泡菜的后酸化，將3株突變株和出發(fā)株分別按106CFU/mL鹽鹵的標(biāo)準(zhǔn)接入到pH值約為4.6的無(wú)菌四川泡菜中，30 ℃放置7 d，測(cè)定泡菜鹽鹵的pH值，結(jié)果如表2所示。與沒(méi)有添加植物乳桿菌的空白組相比，添加有CCTCC 207202、LPS08 和LPS24菌株的泡菜鹽鹵pH值在30 ℃孵育7 d后下降明顯。相反，添加LPS21的泡菜鹽鹵pH值僅下降了0.3個(gè)單位，仍然維持在pH 4.2以上(表2)。所有菌體添加物均能在泡菜中生長(zhǎng)繁殖，孵育7 d后，添加了CCTCC 207202、LPS08和 LPS24的泡菜鹽鹵中菌體含量分別達(dá)到8.74、8.56和8.05 log CFU/mL。盡管LPS21在四川泡菜產(chǎn)品中繁殖速度不及其他株菌，但孵育7 d后其產(chǎn)品中菌體的含量滿足了國(guó)際上關(guān)于益生菌食品中的菌體含量標(biāo)準(zhǔn)(> 7.0 log CFU/mL)[15]，達(dá)到了7.27 log CFU/mL鹽鹵； 因此，LPS21不僅可以作為益生添加物添加到四川泡菜中，而且與添加其他菌株的泡菜相比，LPS21還可以阻止四川泡菜在常溫條件下儲(chǔ)藏、運(yùn)輸和銷(xiāo)售過(guò)程中的后酸化。

3 結(jié)論

硫酸新霉素能夠與細(xì)菌的30S核糖體亞基結(jié)合，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，從而影響菌體的生長(zhǎng)。新霉素的攝入是一個(gè)耗能過(guò)程，低活性的F1F0-ATP酶突變株不能產(chǎn)生足夠的能量;因此不受新霉素抗性的影響，可以利用這一特性篩選出低活性的F1F0-ATP酶突變株[9]。本研究利用新霉素為篩選壓力，從退化的植物乳桿菌中分別篩選到了弱化F1F0-ATP酶的突變株LPS08、LPS21和LPS24。

與出發(fā)菌株CCTCC 207202相比，LPS08、LPS21和LPS24的F1F0-ATP酶β亞基的氨基酸序列上發(fā)生了不同位點(diǎn)的突變。其中，LPS08的F1F0-ATP酶β亞基上的Phe-91、Ser-380和Leu-436分別被Leu、 Pro和Pro替換；但是這些突變位于F1F0-ATP酶β亞基的保守域之外，因此并沒(méi)有顯著影響F1F0-ATP酶的活性，僅下降了5.61%。在LPS21中，Leu-268突變位于F1F0-ATP酶的β亞基和α亞基相互作用的區(qū)域內(nèi)，該突變改變了β亞基的構(gòu)像，引起了F1F0-ATP酶活性的顯著下降，達(dá)到了43.44%。在LPS24的F1F0-ATP酶β亞基中，Asn-205、Ser-380和Pro-419分別被Ser、Leu和Leu所取代，由于僅有Ser-205突變位于臨近F1F0-ATP酶的β亞基和α亞基的相互作區(qū)域，而其他突變沒(méi)有發(fā)生在ATP接合位點(diǎn)、模體以及與α亞基的相互作用區(qū)域;因此，LPS24的突變僅導(dǎo)致F1F0-ATP酶活性下降19.46%。

在初始pH6.5的MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)72 h后，LPS08、LPS21和LPS24的產(chǎn)酸量分別為2.0、1.56和0.95 g/100mL，培養(yǎng)液的pH值分別為3.73、3.82和4.25。當(dāng)3株突變株作為益生添加物按106CFU/mL鹽鹵的量接入無(wú)菌泡菜產(chǎn)品中，30 ℃孵育7 d后，僅有LPS21泡菜鹽鹵的pH仍然維持在pH 4.2以上，滿足四川泡菜對(duì)酸味口感要求；同時(shí)，LPS21泡菜鹽鹵中菌體的含量符合國(guó)際上關(guān)于益生菌食品中的菌體含量標(biāo)準(zhǔn)(>7.0 log CFU/mL)，達(dá)到了7.27 log CFU/mL：因此，弱化F1F0-ATP酶LPS21突變株作為益生添加物添加到泡菜中生產(chǎn)益生菌泡菜時(shí)，能夠從根本上解決益生菌泡菜在常溫下貯存、運(yùn)輸和銷(xiāo)售過(guò)程中的后酸化問(wèn)題。該研究為開(kāi)發(fā)富含乳酸菌的益生泡菜提供了新的思路，對(duì)推動(dòng)四川泡菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有一定的積極意義。

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(編校：葉超)

Reduced F1F0-ATPase Mutation Analysis of Lactobacillus Plantarum and Its Application in Sichuan Pickle as Probiotics Adjunct

SONG Fei-fei，LIN Kai，CAI Ting，XU Gu-rong， YUAN Chun-hong，ZHANG Qing，XIANG Wen-liang*

(ProvincialKeyLaboratoryofFoodBiotechnologyofSichuan,SchoolofFoodandBioengineering,

InstituteofTraditionalBrewingTechnology,XihuaUniversity,Chengdu610039China)

Three mutation strainsL.plantarumLPS08, LPS21 and LPS24 with reduced F1F0-ATPase activity were screened from acid production degenerationL.plantarumCCTCC 207202. In F1F0-ATPaseβ-subunit of LPS08, Phe-91, Ser-380 and Leu-436 were replaced by Leu, Pro and Pro, respectively. But these mutations do not markedly affect F1F0-ATPase activity, only lead to reduction of activity of 5.61%. In mutant strain LPS21, Leu-268 mutation has changed the F1F0-ATPase β-subunit, and thus it triggered a great change with 43.44% F1F0-ATPase activity reduction. In LPS24, the Asn-205, Ser-380 and Pro-419 were respectively replaced by Ser, Leu and Leu. For these mutations, F1F0-ATPase activity decreased 19.46% . In initial pH 6.5 MRS liquid medium, the pH values respectively mediated by mutation strain LPS08, LPS21 and LPS24 were 3.73, 3.68 and 4.25, and their acidities were 2.0 g/100 ml, 1.56 g/100 ml and 0.95g/100 ml after cultured at 37 °C for 72h. Compared with parent strain CCTCC 207202, only the mutation strain LPS21 could overcome post-acidification when their cultures were incorporated into aseptic Sichuan pickle products at 6 log CFU/ml salt brine level and kept at 30 °C up to 7 days, and its viable count in products(7.27 log CFU/ml) also satisfied the criteria for a probiotic food product. Therefore, the F1F0-ATPase mutant strain LPS21 is attractive as probiotics cultures adjunct in Sichuan pickle products to prevent post-acidification during the product handing, transportation and storage at ambient temperature.

L.plantarum; F1F0-ATPase; mutant analysis; probiotics adjunct; Sichuan pickle

2014-09-18

教育部春暉項(xiàng)目(Z2014061)；四川省應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目(2014JY0045)；四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(14ZA0110)；四川省食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(SZJJ2014-007)

TS201.3

A

1673-159X(2015)05-0097-06

10.3969/j.issn.1673-159X.2015.05.018

*通信作者：向文良(1973—)，男，副教授，博士，主要研究方向?yàn)橹袊?guó)西南地區(qū)特色發(fā)酵食品微生物分子生態(tài)與生物過(guò)程學(xué)。E-mail：biounicom@mail.xhu.edu.cn