張平艷， 周小毛

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥研究所，長(zhǎng)沙 410128）

桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪代謝抗性機(jī)制研究

張平艷， 周小毛*

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥研究所，長(zhǎng)沙 410128）

對(duì)桃蚜進(jìn)行室內(nèi)噻蟲(chóng)嗪抗性品系篩選，選育至15代后抗性倍數(shù)達(dá)到75.6倍。對(duì)噻蟲(chóng)嗪敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）桃蚜的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）、酸性磷酸酯酶（ACP）、堿性磷酸酯酶（ALP）、羧酸酯酶（CarE）、多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基活性進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示：敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶比活力分別為3.127 5和3.215 9，差異不顯著，桃蚜抗性品系體內(nèi)酸性磷酸酯酶、堿性磷酸酯酶、羧酸酯酶和多功能氧化酶O-脫甲基活性均顯著高于敏感品系，分別達(dá)到了1.57、2.10、6.12、2.03倍。表明桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪抗性的產(chǎn)生與酸性磷酸酯酶、堿性磷酸酯酶、羧酸酯酶和多功能氧化酶O-脫甲基的活性相關(guān)。

桃蚜； 噻蟲(chóng)嗪； 抗藥性； 解毒酶系

桃蚜［Myzus persicae（Sulzer）］又名煙蚜，屬同翅目蚜科，是多食性害蟲(chóng)，寄主范圍廣，主要取食十字花科、菊科、茄科、豆科等50個(gè)科中的大約400多種植物［1］，同時(shí)也是植物病毒病的傳播媒介［2-3］。一直以來(lái)在桃蚜為害地區(qū)主要是使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行防治，殺蟲(chóng)劑持續(xù)和高劑量的使用致使桃蚜對(duì)多種殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了不同水平的抗藥性［4-7］，其中包括新一代硫代煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑噻蟲(chóng)嗪。噻蟲(chóng)嗪是一種全新結(jié)構(gòu)的第二代煙堿類(lèi)高效低毒殺蟲(chóng)劑，對(duì)害蟲(chóng)具有胃毒、觸殺及內(nèi)吸活性，用于葉面噴霧及土壤灌根處理。其施藥后迅速被根系內(nèi)吸，并傳導(dǎo)到植株各部位，對(duì)刺吸式害蟲(chóng)如蚜蟲(chóng)、飛虱、葉蟬、粉虱等有良好的防效。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)桃蚜對(duì)煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑容易產(chǎn)生抗藥性［8］。

昆蟲(chóng)體內(nèi)多種代謝酶系對(duì)昆蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性起著重要作用。磷酸酯酶是昆蟲(chóng)體內(nèi)重要的水解酶，主要可分為酸性磷酸酯酶（ACP）和堿性磷酸酯酶（ALP）兩種，酯酶對(duì)進(jìn)入昆蟲(chóng)體內(nèi)的外源有毒物質(zhì)起解毒代謝作用，同時(shí)也影響著害蟲(chóng)抗藥性的產(chǎn)生［9］。羧酸酯酶是昆蟲(chóng)抵御外源有毒物質(zhì)的一種重要物質(zhì)，在對(duì)殺蟲(chóng)劑抗性中起著重要的作用，可以使昆蟲(chóng)產(chǎn)生代謝抗性［10］。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶是昆蟲(chóng)體內(nèi)的重要解毒代謝酶系，其與多種解毒機(jī)制密切相關(guān)［11］。多功能氧化酶（MFO）主要對(duì)有毒物質(zhì)進(jìn)行氧化代謝，其底物譜極廣，與許多害蟲(chóng)的抗藥性產(chǎn)生相關(guān)［9，12］。本研究在室內(nèi)篩選得到桃蚜噻蟲(chóng)嗪抗性品系的基礎(chǔ)上，比較了桃蚜抗性和敏感品系4種解毒酶的活性差異，探討桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪抗性形成的生理生化機(jī)制，旨在為防治桃蚜?xí)r合理使用殺蟲(chóng)劑及抗性治理提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

敏感品系：桃蚜（Myzus persicae）敏感品系于2006年10月采自湖南郴州市安仁縣熊蜂山自然保護(hù)區(qū)一野生桃樹(shù)上，該區(qū)域?yàn)樽匀槐Ｗo(hù)區(qū)，方圓10 km內(nèi)從未使用過(guò)化學(xué)農(nóng)藥。室內(nèi)使用自種蘿卜苗繼代飼養(yǎng)桃蚜（光照培養(yǎng)箱設(shè)定溫度為（25±1）℃，光周期L∥D＝16 h∥8 h，相對(duì)濕度70%～80%），作為噻蟲(chóng)嗪相對(duì)敏感品系（THI-S）。

抗性品系：將采回的相對(duì)敏感品系用25%噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑汰選得到。根據(jù)毒力測(cè)定結(jié)果，用25%噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑配制好LC70濃度的藥液置于燒杯中，燒杯中放入適量棉花，將蘿卜苗莖浸入上述燒杯中24 h后飼養(yǎng)桃蚜，飼養(yǎng)1 d后將存活桃蚜用毛筆挑至新種蘿卜苗上飼養(yǎng)，采用此方法進(jìn)行繼代飼養(yǎng)和汰選，每次處理濃度控制在殺死70%左右成蚜，根據(jù)生測(cè)結(jié)果適當(dāng)提高用藥濃度，每代進(jìn)行一次毒力測(cè)定。以幾率值法計(jì)算毒力方程，LC50及95%置信區(qū)間。經(jīng)過(guò)對(duì)桃蚜相對(duì)敏感品系15代汰選后得到桃蚜相對(duì)抗性品系（THI-R）。

1.2 主要試劑及儀器

1.2.1 供試藥劑

98%噻蟲(chóng)嗪（thiamethoxam）原藥（瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司），用于生物測(cè)定試驗(yàn)；25%噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑（瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司），用于抗性篩選。

1.2.2 主要試劑

乙酸-α-萘酯、乙酸-β-萘酯、對(duì)α-萘酚、還原型L-谷胱甘肽（GSH）、對(duì)硝基苯和NADPH均為Sigma公司產(chǎn)品；硝基苯酚（NO2C6H4OH），上海三愛(ài)思試劑有限公司；對(duì)硝基磷酸二鈉（C6H4NNa2O6P· 6H2O），Merck公司；還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司；對(duì)硝基苯甲醚（C7H7NO3），上海三愛(ài)思試劑有限公司；牛血清白蛋白Albumin，上海伯奧生物科技有限公司；考馬斯亮藍(lán)G-250，F(xiàn)luka公司。本試驗(yàn)提取和酶學(xué)測(cè)定部分所用試劑為分析純?cè)噭?/p>

1.2.3 主要儀器

UV-2201型紫外分光光度計(jì)，日本島津公司，Beckman低溫離心機(jī)，德國(guó)貝克曼公司。

1.3 蘿卜苗種植方法

將蘿卜種子浸泡水中5 h后再使用75%百菌清500倍液浸泡0.5 h，種子用清水沖洗干凈后均勻種植在未含農(nóng)藥的濕潤(rùn)土壤中，置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為（25±1）℃，相對(duì)濕度55%，光周期L∥D＝16 h∥8 h，每3～5 d種植一批蘿卜苗。

1.4 生物測(cè)定方法

采用葉柄內(nèi)吸法，將花椰菜（Brassica oleraceavar.botrytisLinn.）葉剪下后立即將葉柄浸入系列濃度藥液（0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128 mg/L）中，24 h后將帶藥葉片剪取d＝5.5 cm的圓片，先向培養(yǎng)皿中倒入12 g/L的瓊脂3～5 mm用以保濕，待瓊脂冷卻后將葉片放置在d＝6 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)培養(yǎng)皿中放入30頭大小一致的桃蚜，用保鮮膜將培養(yǎng)皿封口，封口膜上針扎20～30個(gè)小孔，所有培養(yǎng)皿放入人工氣候箱內(nèi)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)1 d后觀察結(jié)果，毛筆輕觸桃蚜，不動(dòng)者視為死亡。每個(gè)處理設(shè)置4次重復(fù)。用DPS V12.01求出毒力回歸方程、標(biāo)準(zhǔn)誤、LC50及其置信區(qū)間。

1.5 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

參照考馬斯亮藍(lán)G-250法［13］，考馬斯亮藍(lán)染色液的配制：取考馬斯亮藍(lán)G-250 100 mg加入到50 mL 95%C2H5OH中，再加100 mL含量為85%的H2PO4后用蒸餾水定容至1 L。BSA（牛血清蛋白）標(biāo)準(zhǔn)蛋白液配制：準(zhǔn)備6支試管洗凈并干燥，依次用移液器加入BSA液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL后用蒸餾水定容至1 mL；每支試管中加入3 mL考馬斯亮藍(lán)染色液；將加液后的試管放入恒溫水浴鍋（25～30℃），20 min，使用紫外分光光度計(jì)測(cè)定A595。酶蛋白測(cè)定時(shí)，以酶液代替BSA標(biāo)準(zhǔn)液。以光密度值為縱坐標(biāo)，以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6 桃蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）活性測(cè)定

選取無(wú)翅成蚜抗性和敏感品系各100頭放入勻漿器中，向勻漿器中加入PBS（66 mmol/L，p H＝7.0）緩沖液4 mL冰上勻漿，勻漿液于高速低溫離心機(jī)（4℃，12 000 r/min，15 min）離心，取上清稀釋10倍4℃保存，作為酶源備用。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）比活力測(cè)定參照Habig等的方法［14］稍有改進(jìn)。反應(yīng)混合液中含有酶液0.2 mL，PBS緩沖液（66 mmol/L，p H＝7.0）2.4 mL，GSH水溶液（50 mmol/L）0.3 mL，2，4-二硝基氯苯（0.03 mol/L）0.1 mL，27℃水浴5 min，測(cè)定A340，每個(gè)樣品重復(fù)3次取平均值，以每分鐘催化生成1μmol產(chǎn)物為1個(gè)活性單位，按照以下公式計(jì)算酶活力：

GSTs活力單位（μmol/min）＝（ΔA340·v）/（ε·L）

注：ΔA340為每分鐘光吸收的變化值，v是酶促反應(yīng)的體積，ε為產(chǎn)物消光系數(shù)［0.009 6 mol/（L·cm）］，L是比色杯的光程（1 cm）。按0.009 6 mol（L·cm）的消光系數(shù)計(jì)算谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）的比活力，單位為mmol/（mg·min）。

1.7 桃蚜磷酸酯酶活性測(cè)定

1.7.1 酸性磷酸酯酶（ACP）活性測(cè)定

參照Bessey的方法［15］并稍有改進(jìn)，以對(duì)硝基苯酚為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。選取無(wú)翅成蚜抗性和敏感品系各100頭放入勻漿器中，加入醋酸緩沖液（p H＝4.6，0.2 mol/L）1 mL冰上勻漿，勻漿液于高速低溫離心機(jī)（4℃，12 000 r/min，15 min）離心，取上清液4℃保存作為酶源備用。以對(duì)硝基苯基磷酸二鈉作為反應(yīng)底物（終濃度為0.75 mmol/L），酶液用量分別為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，反應(yīng)總體積用0.2 mol/L醋酸緩沖液配至3.0 mL，混合后37℃下水浴0.5 h，然后加入0.2 mol/L NaOH 2.0 m L終止反應(yīng)，室溫靜置10 min測(cè)定A400，每個(gè)樣品重復(fù)3次取平均值，根據(jù)制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線和酶源蛋白含量的測(cè)定結(jié)果計(jì)算酸性磷酸酯酶（ACP）酶活性，以比活力［μmol/（mg·30 min）］表示。

1.7.2 堿性磷酸酯酶（ALP）活性

測(cè)定方法與1.7.1酸性磷酸酯酶（ACP）活性測(cè)定方法基本相同，堿性磷酸酯酶活性測(cè)定使用巴比妥緩沖液（0.4 mol/L，p H＝9.6）代替醋酸緩沖液（0.2 mol/L，p H＝4.6）。

1.8 羧酸酯酶（Car E）活性測(cè)定

選取無(wú)翅成蚜抗性和敏感品系各100頭放入勻漿器中，向勻漿器中加入PBS（0.04 mmol/L，p H＝7.0）緩沖液4 m L冰上勻漿，勻漿液于高速低溫離心機(jī)（4℃，12 000 r/min，15 min）離心，取上清液稀釋25倍4℃保存，作為酶源備用。桃蚜羧酸酯酶（CarE）比活力測(cè)定參照van Asperen的方法［16］并稍有改進(jìn)。反應(yīng)混合液中含有羧酸酯酶酶液1 mL，α-醋酸萘酯（3×10－4mol/L）5 mL，30℃下水浴0.5 h，然后向反應(yīng)體系中加入顯色劑1 mL，室溫靜置0.5 h后測(cè)定A600，每個(gè)樣品重復(fù)3次取平均值。根據(jù)制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線和酶源蛋白含量的測(cè)定結(jié)果計(jì)算羧酸酯酶（CarE）酶活性，以比活力［μmol/（mg·min）］表示。

1.9 多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基活性測(cè)定

參照Hung等的方法［17］并稍有改進(jìn)。選取無(wú)翅成蚜抗性和敏感品系各100頭放入勻漿器中，向勻漿器中加入PBS（0.2 mmol/L，p H＝7.8）緩沖液1.5 mL冰上勻漿，勻漿液于高速低溫離心機(jī)（4℃，10 000 r/min，15 min）離心，取上清液4℃保存，作為酶源備用。以對(duì)硝基苯甲醚為底物，在多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基的作用下，生成對(duì)硝基苯酚鈉，以對(duì)硝基酚制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。反應(yīng)體系含酶液1 mL、1.0 mmol/L NADPH（緩沖液配制）0.5 mL、0.1 mmol/L對(duì)硝基苯甲醚（緩沖液配制）0.1 mL和緩沖液2.5 mL，在30℃水浴0.5 h然后加1.0 mmol/L的HCl 1 mL終止反應(yīng)。向試管中加入氯仿5 mL進(jìn)行萃取，待分層后從氯仿層中移取3 m L到另一試管內(nèi)，加入0.5 mol/L的NaOH 3 m L萃取。取NaOH溶液層2 mL于比色皿中，測(cè)定A400值，根據(jù)對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線和酶源蛋白質(zhì)含量，將A值換算成比活力μmol（mg·30 min），每個(gè)樣品重復(fù)3次取平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 生物測(cè)定結(jié)果

采用葉柄內(nèi)吸法分別測(cè)定桃蚜敏感品系（THIS）和抗性品系（THI-R）對(duì)噻蟲(chóng)嗪的敏感性，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 桃蚜敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）對(duì)噻蟲(chóng)嗪的敏感性Table 1 Susceptibility of resistant and susceptible strains ofMyzus persicaeto thiamethoxam

由表1中數(shù)據(jù)可見(jiàn)，從湖南省郴州市安仁縣熊蜂山自然保護(hù)區(qū)野生桃樹(shù)上采集的桃蚜品系對(duì)噻蟲(chóng)嗪敏感，毒力回歸方程中斜率大于2，表明該品系的同質(zhì)性較高，該品系可以作為相對(duì)敏感品系。該敏感品系分出一部分用25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑進(jìn)行抗性選育，經(jīng)過(guò)15代繼代選育，經(jīng)生物測(cè)定數(shù)據(jù)可以看出已經(jīng)產(chǎn)生了75.6倍的抗性，達(dá)到了高水平抗性。

2.2 桃蚜噻蟲(chóng)嗪抗性和敏感品系谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性測(cè)定結(jié)果

對(duì)桃蚜噻蟲(chóng)嗪敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）體內(nèi)的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性進(jìn)行測(cè)定并比較分析，結(jié)果見(jiàn)表2。敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶比活力分別為3.127 5和3.215 9 mmol/（mg·min），差異不顯著，表明桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪產(chǎn)生抗性與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性不相關(guān)。

2.3 桃蚜噻蟲(chóng)嗪抗性和敏感品系磷酸酯酶活性測(cè)定結(jié)果

桃蚜噻蟲(chóng)嗪敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）體內(nèi)磷酸酯酶的比活力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）酸性磷酸酯酶的比活力分別是105.273 6和164.932 7μmol/（mg ·30 min）?？剐云废担═HI-R）酸性磷酸酯酶的比活力是敏感品系（THI-S）的1.57倍，差異達(dá)到顯著水平。敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）堿性磷酸酯酶的比活力分別是1.686 3和3.548 1μmol/（mg ·30 min）?？剐云废担═HI-R）堿性磷酸酯酶的比活力是敏感品系（THI-S）的2.10倍，差異達(dá)到顯著水平。說(shuō)明桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪產(chǎn)生抗性可能與酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶均有關(guān)。

表2 桃蚜噻蟲(chóng)嗪敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性比較1）Table 2 Comparison of glutathioneS-transferase activity between thiamethoxam-susceptible（THI-S）and thiamethoxam-resistant（THI-R）strains ofMyzus persicae

表3 桃蚜噻蟲(chóng)嗪敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）磷酸酯酶比活力Table 3 Comparison of phosphoesterase activity between THI-Sand THI-R strains ofMyzus persicae

2.4 桃蚜噻蟲(chóng)嗪抗性和敏感品系羧酸酯酶測(cè)定結(jié)果

桃蚜噻蟲(chóng)嗪敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）體內(nèi)羧酸酯酶的比活力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）羧酸酯酶的比活力分別是0.463 5和2.837 6μmol/（mg· min）?？剐云废担═HI-R）羧酸酯酶的比活力是敏感品系（THI-S）的6.12倍，差異達(dá)到顯著水平。

表4 桃蚜敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）羧酸酯酶比活力Table 4 Comparison of carboxylesterase activity between THI-Sand THI-R strains ofMyzus persicae

2.5 桃蚜噻蟲(chóng)嗪抗性和敏感品系多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基活性測(cè)定結(jié)果

通過(guò)測(cè)定和比較桃蚜噻蟲(chóng)嗪敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）體內(nèi)的多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基比活力（表5），結(jié)果表明兩個(gè)品系的比活力差異顯著，THI-R體內(nèi)多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基比活力是THI-S的2.03倍，說(shuō)明桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪的抗性可能與多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基活性有關(guān)。

表5 桃蚜敏感品系（THI-S）和抗性品系（THI-R）多功能氧化酶O-脫甲基比活力Table 5 Comparison of MFOO-demethylation activity between THI-Sand THI-R ofMyzus persicae

3 討論

害蟲(chóng)抗藥性產(chǎn)生主要涉及解毒酶代謝能力增強(qiáng)導(dǎo)致的代謝抗性和殺蟲(chóng)劑作用靶標(biāo)敏感性降低導(dǎo)致的靶標(biāo)抗性?xún)煞矫妫?8］。楊煥青等發(fā)現(xiàn)吡蟲(chóng)啉抗性達(dá)到24.38倍的棉蚜體內(nèi)谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的比活力是敏感品系的1.57倍［19］；史曉斌等發(fā)現(xiàn)對(duì)吡蟲(chóng)啉抗性達(dá)到42.19倍的棉蚜體內(nèi)谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的比活力是敏感品系的1.58倍［20］，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活力增加較緩慢；噻蟲(chóng)嗪作為第二代煙堿類(lèi)高效低毒殺蟲(chóng)劑，筆者研究發(fā)現(xiàn)桃蚜敏感品系和抗性品系的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶比活力分別為3.127 5和3.215 9，差異不顯著，桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪產(chǎn)生抗性與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶不相關(guān)。

害蟲(chóng)體內(nèi)水解酶數(shù)量與其他變化都是導(dǎo)致害蟲(chóng)抗藥性的重要因子，帥霞等發(fā)現(xiàn)桃蚜對(duì)高效氯氰菊酯抗性品系的形成與堿性磷酸酯酶活性增強(qiáng)相關(guān)［9］。本研究發(fā)現(xiàn)桃蚜抗性品系中的酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶活性顯著高于敏感品系，表明酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶是桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪產(chǎn)生抗藥性的重要因素。

細(xì)胞色素P450主要依靠微粒體多功能氧化酶起作用，且該酶存在非常廣泛底物的同工酶系，對(duì)進(jìn)入害蟲(chóng)體內(nèi)的有毒物質(zhì)通過(guò)氧化代謝進(jìn)行解毒。研究發(fā)現(xiàn)羧酸酯酶和細(xì)胞色素P450解毒代謝增強(qiáng)是害蟲(chóng)對(duì)煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生抗性的重要機(jī)制。邱高輝等發(fā)現(xiàn)用吡蟲(chóng)啉室內(nèi)篩選麥長(zhǎng)管蚜種群至25.22倍時(shí)，低水平抗性的代謝機(jī)理是多功能氧化酶和羧酸酯酶活力增強(qiáng)［21］；羧酸酯酶在昆蟲(chóng)代謝藥物的過(guò)程中起著重要的作用［22］，隨著棉蚜對(duì)吡蟲(chóng)啉抗性的增加，棉蚜體內(nèi)的解毒酶活力逐漸增加，其中羧酸酯酶增長(zhǎng)較快；利用PBO進(jìn)行抑制試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：PBO對(duì)吡蟲(chóng)啉有顯著增效作用，推測(cè)多功能氧化酶活力升高是棉蚜對(duì)吡蟲(chóng)啉產(chǎn)生抗性的機(jī)理之一［20］。桃蚜對(duì)有機(jī)磷類(lèi)、氨基甲酸酯類(lèi)、菊酯類(lèi)藥劑和吡蟲(chóng)啉抗藥性的產(chǎn)生主要是其多功能氧化酶活性提高所引起［23-25］。本研究發(fā)現(xiàn)抗性品系羧酸酯酶、多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基的比活力分別是敏感品系的6.12倍和2.03倍，說(shuō)明羧酸酯酶、多功能氧化酶（MFO）O-脫甲基活性升高與桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪的抗性密切相關(guān)。

單因子抗性發(fā)展速度快于多因素引起的抗性發(fā)展速度［26］，本研究通過(guò)室內(nèi)選育建立桃蚜抗噻蟲(chóng)嗪種群屬于單因子抗性，可以明確桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪抗性發(fā)展趨勢(shì)，進(jìn)而合理施藥提高防治效果，延緩抗藥性的發(fā)展；根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪的抗藥性與4種解毒代謝酶相關(guān)，使用殺蟲(chóng)劑時(shí)可以適當(dāng)加入增效劑，如增效磷、增效醚等起到增效效果。本文僅在生化水平初步研究了桃蚜對(duì)噻蟲(chóng)嗪代謝的抗性機(jī)制，有待進(jìn)一步在分子水平進(jìn)行更深入系統(tǒng)的研究。

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Metabolic mechanism of resistance to thiamethoxam inMyzus persicae

Zhang Pingyan， Zhou Xiaomao
（Institute of Pesticide Research，Hunan Agricultural University，Changsha410128，China）

Resistance screening ofMyzus persicae（Sulzer）to thiamethoxam was conducted in the laboratory.After 15 generations of selection，the resistance index ofM.persicaeto thiamethoxam was 75.6 folds.The activities of GSTs，ACP，ALP，CarE and MFOO-demethylation were tested in both sensitive（THI-S）and resistant（THIR）biotypes ofM.persicae.The results showed that the activity of GSTs in THI-Sand THI-R had no significant difference，with specific activity indexes of 3.127 5 and 3.215 9，respectively.However，the activities of ACP，ALP，CarE and MFOO-demethylation in THI-R were higher than those in THI-S，with indexes of 1.57，2.10，6.12 and 2.03，respectively.These results indicated that the resistance ofM.persicaeto thiamethoxam was related to the activities of ACP，ALP，CarE and MFOO-demethylation.

Myzus persicae； thiamethoxam； resistance； detoxification enzyme system

S 481.4

A

10.3969/j.issn.0529 1542.2015.01.007

2014 01 16

2014 05 21

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31071716）；教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃項(xiàng)目（NCET-10 0163）；公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專(zhuān)項(xiàng)（201203038）

*通信作者 E-mail：zhouxm1972@126.com