張利群，陳詠君，崔仁善，齊國先

（1.沈陽醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院人文教研室，沈陽 110034；2.沈陽醫(yī)學(xué)院沈洲醫(yī)院檢驗(yàn)科，沈陽 110002；3.中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科，沈陽 110001）

·論著·

低劑量靜脈注射米諾環(huán)素后處理對大鼠缺血再灌注心肌的保護(hù)作用

張利群1，陳詠君2，崔仁善1，齊國先3

（1.沈陽醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院人文教研室，沈陽 110034；2.沈陽醫(yī)學(xué)院沈洲醫(yī)院檢驗(yàn)科，沈陽 110002；3.中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科，沈陽 110001）

目的探討低劑量靜脈注射米諾環(huán)素后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制。方法48只雄性Wistar大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組（SO組）、缺血再灌注組（IR組）、低劑量米諾環(huán)素組（3 mg/kg，IR+LM組）和高劑量米諾環(huán)素組（10 mg/kg，IR+HM組）。通過結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支45 min，復(fù)灌120 min，建立心肌缺血再灌注損傷模型。再灌注后，檢測各組大鼠心臟血流動力學(xué)、血清肌酸激酶MB型（CK-MB）和心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ）的水平、血清及缺血心肌丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性、心肌凋亡指數(shù)（AI）以及HE染色，觀察心肌病理改變。結(jié)果與IR組比較，低、高劑量米諾環(huán)素均能降低左心室舒張末壓、CK-MB、cTn-Ⅰ、AI以及MDA含量，升高左心室收縮壓、左心室變化速率最大值及SOD活性（P均＜0.05）。IR+HM組與IR+LM組比較上述指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論低劑量米諾環(huán)素后處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷，其機(jī)制與清除氧自由基、抑制脂質(zhì)氧化反應(yīng)和抑制凋亡有關(guān)。

米諾環(huán)素；缺血后處理；心肌缺血再灌注損傷

近年發(fā)現(xiàn)米諾環(huán)素（minocycline，M）對缺血心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，研究中米諾環(huán)素多采用預(yù)處理與腹腔注射，應(yīng)用劑量是臨床用于抗感染、抗炎常規(guī)劑量的30倍［1，2］。目前尚不清楚相當(dāng)于人類安全應(yīng)用的較低劑量米諾環(huán)素靜脈注射是否仍具有心肌保護(hù)作用。本研究首次采用低劑量米諾環(huán)素（3 mg/kg），相當(dāng)于臨床應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)劑量200 mg的給藥劑量［3］，觀察其后處理對缺血再灌注（ischemia-reperfusion，IR）心肌的作用，探討其對氧化應(yīng)激的影響，為米諾環(huán)素防治心肌再灌注損傷的可行性和臨床轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組

雄性Wistar大鼠48只，體質(zhì)量250～280 g，由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK（遼）2008-0005。隨機(jī)分為假手術(shù)（sham-operation，SO）組、缺血再灌注（IR）組、低劑量米諾環(huán)素后處理（IR+LM）組、高劑量米諾環(huán)素后處理（IR+ HM）組，每組各12只。（1）SO組：冠狀動脈左前降支只穿線，不結(jié)扎，穿線后35 min由股靜脈緩慢注入生理鹽水（1 mL/100 g）；（2）IR組：結(jié)扎冠狀動脈左前降支45 min，再灌注120 min，再灌注前10 min由股靜脈緩慢注入生理鹽水（1 mL/100 g）；（3）IR+LM組：再灌注前10 min由股靜脈緩慢注入鹽酸米諾環(huán)素（3 mg/kg，0.3 mg/mL生理鹽水，1 mL米諾環(huán)素溶液/100 g）；（4）IR+HM組：再灌注前10 min由股靜脈注入鹽酸米諾環(huán)素（10 mg/kg，1 mg/mL生理鹽水，1 mL米諾環(huán)素溶液/100 g）。

1.2 試劑及儀器

鹽酸米諾環(huán)素（美國sigma公司），大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cardiac troponin-Ⅰ，cTn-Ⅰ）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒（北京尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司），肌酸激酶MB型（creatine kinase MB，CK-MB）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化（superoxide dismutase，SOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所），TUNEL試劑盒（南京凱基生物科技發(fā)展有限公司）。小動物呼吸機(jī)（HX-300，成都泰盟科技有限公司），八導(dǎo)生理記錄儀（日本RM6000），石蠟切片機(jī)（德國LEICA公司），光學(xué)顯微鏡（日本OLYMPUS公司），酶標(biāo)儀（MpltiskanMK3芬蘭Thermo Lab System），全自動生化分析儀（Cobase501德國Roehe）。

1.3 指標(biāo)與方法

1.3.1 血流動力學(xué)指標(biāo)測定：再灌注120 min經(jīng)右側(cè)頸總動脈插管至左心室，連接至八導(dǎo)生理記錄儀，記錄心率（heart rate，HR）、左心室收縮壓（left ventricular systolic pressure，LVSP）、左心室舒張末期壓（left ventricular end diastolic pressure，LVEDP）、左心室變化速率最大值（±dp/dtmax）。

1.3.2 血清CK-MB和cTn-Ⅰ含量測定：再灌注120 min后收集右頸總動脈血4 mL，4℃下3 000 r/min，離心10 min，分離出血清，分別用全自動生化分析儀和ELISA法測血清CK-MB活性和cTn-Ⅰ含量。具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 心肌組織病理形態(tài)學(xué)的測定：再灌注結(jié)束，迅速留取左心室前壁心肌組織，于4%的多聚甲醛固定12 h，石蠟包埋，HE染色觀察再灌注心肌組織的病理變化。

1.3.4 心肌凋亡細(xì)胞原位測定：應(yīng)用TUNEL凋亡測試試劑盒嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。光鏡下正常心肌細(xì)胞核呈藍(lán)色，棕色為TUNEL染色陽性細(xì)胞，每張切片隨機(jī)選取l0個(gè)視野（×400倍），計(jì)數(shù)凋亡陽性細(xì)胞，以凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)/所有細(xì)胞個(gè)數(shù)作為凋亡指數(shù)（apoptotic index，AI），AI反映各組心肌細(xì)胞凋亡的情況。

1.3.5 血清、心肌組織MDA含量及SOD活性測定：再灌注120 min頸動脈取血2 mL，靜置后3 000 r/min，離心10 min分離出血清；取大鼠左心室結(jié)扎線以下心尖部缺血區(qū)心肌組織，每20 mg組織加入150 μL裂解液，與生理鹽水混合后研磨勻漿，4℃15 000 g離心5 min，取上清液；硫代巴比妥酸法測定MDA含量，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶SOD活性，根據(jù)說明書檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用SNK法。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 米諾環(huán)素后處理對大鼠心臟血流動力學(xué)影響

與SO組比較，IR組HR、LVSP、±dp/dtmax指標(biāo)均降低（P均＜0.01），LVEDP升高（P＜0.01）；與IR組比較，IR+LM、IR+HM組顯著升高LVSP和±dp/dtmax（P＜0.05或P＜0.01），降低LVEDP（P＜0.05）。IR+HM組與IR+LM組比較有進(jìn)一步改善趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 米諾環(huán)素后處理對大鼠心肌組織病理形態(tài)學(xué)的影響

光鏡下觀察，SO組心肌細(xì)胞排列整齊，著色均勻，肌纖維橫紋清晰，無細(xì)胞腫脹，未見變性壞死和炎性細(xì)胞浸潤（圖1A）；IR組心肌肌纖維排列紊亂，著色不均勻，細(xì)胞腫脹明顯，心肌細(xì)胞間隙水腫嚴(yán)重，肌纖維部分?jǐn)嗔?，橫紋模糊或消失，可見心肌細(xì)胞呈片狀壞死，壞死區(qū)細(xì)胞核碎裂或崩解，周圍有炎性細(xì)胞浸潤，紅細(xì)胞漏出明顯（圖1B）；IR+LM組和IR+HM組心肌細(xì)胞排列基本規(guī)整，部分心肌細(xì)胞水腫變性，肌纖維間隙水腫，偶爾可見散在的紅細(xì)胞，但明顯少于IR組，少見炎性細(xì)胞浸潤；與IR組比較心肌組織結(jié)構(gòu)明顯改善（圖1C、1D）。

表1 米諾環(huán)素后處理對大鼠心臟血流動力學(xué)的影響（）Tab.1 Effects of minocycline postconditioning on the cardiac parameters of haemodynamics in rats（）

表1 米諾環(huán)素后處理對大鼠心臟血流動力學(xué)的影響（）Tab.1 Effects of minocycline postconditioning on the cardiac parameters of haemodynamics in rats（）

Compared with SO group，1）P＜0.01，2）P＜0.05；compared with I/R group，3）P＜0.05，4）P＜0.01.

Group n HR LVSP LVEDP +dp/dtmax -dp/dtmax（beats/min） （mmHg） （mmHg） （mmHg/s） （mmHg/s）SO 6 368±39 145.5±12.1 10.3±2.1 4 833.3±321.7 2 847.5±224.9 IR 6 297±481） 107.0±14.71） 15.3±1.91） 2 954.2±305.31） 2 096.0±309.31）IR+LM 6 319±512） 134.8±12.43） 11.8±2.53） 3 924.3±240.91），4） 2 679.8±286.33）IR+HM 6 329±47 141.7±13.54） 11.0±1.83） 4 221.3±204.31），4） 2 744.5±282.84）

2.3 米諾環(huán)素后處理對大鼠血清cTn-Ⅰ、CK-MB的影響

與SO組比較，IR組血清cTn-Ⅰ水平、CK-MB活性顯著升高（P＜0.01）；與IR組比較，IR+LM組和IR+HM組能顯著降低血清cTn-Ⅰ水平和CKMB活性（P＜0.01）。IR+HM組與IR+LM組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

2.4 米諾環(huán)素后處理對大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

Fig.1 米諾環(huán)素后處理對大鼠心肌組織病理形態(tài)學(xué)的影響 HE染色×400Fig.1 Effects of minocycline postconditioning on the myocardial tissue morphology in rats HE dyeing×400

表2 米諾環(huán)素后處理對大鼠血清cTn-Ⅰ、CK-MB及AI的影響（）Tab.2 Effects of minocycline postconditioning on the cTn-Ⅰ，CK-MB in serum and AI in rats（）

表2 米諾環(huán)素后處理對大鼠血清cTn-Ⅰ、CK-MB及AI的影響（）Tab.2 Effects of minocycline postconditioning on the cTn-Ⅰ，CK-MB in serum and AI in rats（）

Compared with SO group，1）P＜0.01；compared with I/R group，2）P＜0.01.

Group n cTn-Ⅰ（ng·mL-1） CK-MB（U·L-1） AI（%）SO 6 0.19±0.07 384.83±61.19 2.16±1.14 IR 6 1.04±0.151） 905.67±94.461） 37.36±4.251）IR+LM 6 0.32±0.072） 479.50±41.382） 22.15±6.171），2）IR+HM 6 0.23±0.062） 438.67±64.532） 18.93±4.521），2）

TUNNEL染色后正常細(xì)胞核染藍(lán)色，凋亡細(xì)胞核呈棕色。如圖2所示，SO組大鼠心肌中極少量TUNEL染色陽性細(xì)胞，與SO組比較，IR組大鼠染色陽性細(xì)胞明顯增多，AI明顯增高（P＜0.01），與IR組比較，IR+LM組和IR+HM組染色陽性細(xì)胞明顯減少，AI明顯降低（P＜0.01）。IR+HM組與IR+LM組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

圖2 米諾環(huán)素后處理對大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響 TUNEL染色×400Fig.2 Effects of minocycline postconditioning on the myocardial apoptosis in rats TUNEL dying×400

2.5 米諾環(huán)素后處理對大鼠血清、心肌組織MDA含量和SOD活性的影響

與SO比較，IR組血清、心肌組織MDA含量均明顯增高（P＜0.01），血清、心肌組織SOD活性明顯降低（P＜0.01）；與IR組比較，IR+LM組和IR+HM組血清、心肌組織MDA含量明顯降低（P＜0.01），血清、心肌組織SOD活性明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。IR+HM組與IR+LM組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 米諾環(huán)素后處理對大鼠血清、心肌組織MDA含量和SOD活性的影響（）Tab.3 Effects of minocycline postconditioning on the MDA and SOD in serum and myocardium in rats（）

表3 米諾環(huán)素后處理對大鼠血清、心肌組織MDA含量和SOD活性的影響（）Tab.3 Effects of minocycline postconditioning on the MDA and SOD in serum and myocardium in rats（）

Compared with SO group，1）P＜0.01；compared with I/R group，2）P＜0.05，3）P＜0.01.

Group n Serum MDA Serum SOD Myocardial MDA Myocardial SOD（nmol/mL） （U/mL） （nmol/mg pro） （U/mg pro）SO 6 1.96±0.78 117.35±12.01 2.96±0.48 198.7±17.24 IR 6 5.17±0.971） 51.36±10.631） 8.47±1.271） 97.4±8.631）IR+LM 6 2.45±0.83） 72.54±13.081），2） 6.15±1.091），3） 141.5±15.291），3）IR+HM 6 2.04±0.673） 81.67±12.201），3） 5.54±1.311），3） 167.1±13.373）

3 討論

心肌再灌注治療是限制急性缺血性心肌壞死最有效的方法，而伴隨再灌注出現(xiàn)的活性氧的產(chǎn)生、鈣超載、炎性介質(zhì)釋放所介導(dǎo)的心肌缺血/再灌注損傷（myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI）削弱了再灌注治療的凈效益［4，5］。米諾環(huán)素是一種半合成的四環(huán)素衍生物，在臨床上主要用于治療關(guān)節(jié)炎及其它感染性疾病，除抗菌作用外還具有抗炎、抗凋亡、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑以及氧自由基清除等多效性，近年發(fā)現(xiàn)它對多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用［6，7］。動物試驗(yàn)也證實(shí)了米諾環(huán)素預(yù)處理對腎臟［8］及心肌缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。然而，在急性缺血性心肌損傷中米諾環(huán)素應(yīng)用劑量（45～90 mg/kg）較高［1，2］，而且多采用腹腔注射或經(jīng)口途徑給藥，而研究發(fā)現(xiàn)腹腔注射米諾環(huán)素將導(dǎo)致藥物延遲吸收及腹膜激惹［9］，而急性心肌保護(hù)中靜脈給藥途徑更能快速達(dá)到有效血藥濃度進(jìn)而滲透心肌發(fā)揮作用。因此，本研究選擇與米諾環(huán)素臨床應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)劑量200 mg相當(dāng)?shù)慕o藥劑量（3 mg/kg）［3］，再灌注前10 min經(jīng)靜脈注射給藥，檢測血清cTn-Ⅰ、CK-MB評價(jià)心肌組織損傷程度，cTn-Ⅰ特異性存在于心肌細(xì)胞內(nèi)，是橫紋肌收縮的重要調(diào)節(jié)蛋白，在心肌細(xì)胞膜完整狀態(tài)下，cTn-Ⅰ不能透過細(xì)胞膜進(jìn)入血循環(huán)，當(dāng)心肌缺血缺氧，發(fā)生變性壞死、細(xì)胞膜破損時(shí)，cTn-Ⅰ因其分子量較小而彌散進(jìn)入細(xì)胞間質(zhì)，從而能較早釋放到外周血，對診斷心肌損傷具有高度的特異性和敏感性［10］。同時(shí)監(jiān)測再灌注后心臟血流動力學(xué)參數(shù)-dp/dtmax和LVEDP評價(jià)心臟舒張功能，結(jié)果顯示，cTn-Ⅰ、CK-MB在IR組與米諾環(huán)素組均顯著高于SO組，提示缺血再灌注導(dǎo)致明顯的心肌損傷。MIRI使心臟舒張功能減低同時(shí)損害了心肌收縮能力，低、高劑量米諾環(huán)素后處理均明顯減少心肌壞死，同時(shí)改善了受損心肌的舒張、收縮功能，其心肌保護(hù)作用具有劑量依賴性。

凋亡是一種主動地、程序性細(xì)胞死亡，是在一定條件下，核細(xì)胞通過啟動內(nèi)部機(jī)制，激活內(nèi)源性DNA內(nèi)切酶而發(fā)生的細(xì)胞自然死亡過程，主要表現(xiàn)為細(xì)胞核變化，包括：染色質(zhì)斷裂、固縮、崩解、細(xì)胞質(zhì)空泡變、凋亡小體形成。MIRI導(dǎo)致心肌細(xì)胞過度凋亡是心肌細(xì)胞死亡的重要因素，減少心肌細(xì)胞凋亡能減輕心肌損傷和改善心功能。本研究應(yīng)用TUNEL法染色，結(jié)果表明SO組可見少量散在凋亡細(xì)胞，IR組凋亡細(xì)胞顯著增多，提示心肌缺血或再灌注過程有促進(jìn)或加速心肌細(xì)胞凋亡的作用，而低、高劑量米諾環(huán)素后處理均能有效減少心肌細(xì)胞凋亡，米諾環(huán)素的心肌保護(hù)作用與抑制心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)。

在MIRI過程中，大量氧自由基產(chǎn)生導(dǎo)致的氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是造成心肌細(xì)胞損傷的重要因素之一［11］。MDA和SOD是反映自由基損傷的指標(biāo)［12］，MDA作為脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性，其含量與體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的速率和強(qiáng)度直接相關(guān)，在一定程度上能反映細(xì)胞損傷的程度。MDA通過促使蛋白質(zhì)和DNA等生命大分子發(fā)生交聯(lián)聚合；與磷脂反應(yīng)破壞生物膜結(jié)構(gòu)，使膜通透性增大而引起一系列細(xì)胞損傷。SOD即為機(jī)體內(nèi)抗氧化活性重要物質(zhì)，能特異性清除超氧自由基，阻斷自由基產(chǎn)生，提高抗氧化物酶的活性，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，SOD活性可間接反映機(jī)體清除自由基和抗氧化損傷的能力?？寡趸瘧?yīng)激，抑制體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，能保護(hù)缺血心肌，促進(jìn)缺血再灌注心臟的心功能恢復(fù)［12］。本研究結(jié)果顯示，MIRI使血清與心肌內(nèi)MDA含量明顯升高，SOD活性顯著降低，證明了氧自由基爆發(fā)在心肌再灌注的病理生理改變中起關(guān)鍵作用。而低、高劑量米諾環(huán)素后處理均能顯著維持再灌注期的SOD活性且不增加MDA的含量，提示米諾環(huán)素可改善缺血再灌注時(shí)機(jī)體的抗氧化能力，減輕心肌細(xì)胞的損傷程度。

大量證據(jù)表明，再灌注損傷是缺血后炎性反應(yīng)的結(jié)果，再灌注損傷可能存在時(shí)間的依賴性，因此，缺血和再灌注的各自持續(xù)時(shí)間可以影響再灌注損傷的程度，同時(shí)也能影響藥物干預(yù)的有效性。本研究結(jié)果顯示再灌注2 h，高劑量較低劑量米諾環(huán)素組有進(jìn)一步改善趨勢，但其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，本研究為單次給藥，后續(xù)的研究考慮延長再灌注的時(shí)間至24 h，適當(dāng)增加給藥次數(shù)，觀察高、低劑量米諾環(huán)素組的心肌保護(hù)作用是否存在差異。

本研究首次證實(shí)低劑量米諾環(huán)素后處理能減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷，靜脈注射在大鼠急性心肌損傷模型中應(yīng)用安全、可行，其心肌保護(hù)機(jī)制涉及對循環(huán)和心肌氧化應(yīng)激狀態(tài)的調(diào)整，通過降低MDA含量與提升SOD的活性，減少心肌細(xì)胞的凋亡和壞死，進(jìn)而改善心功能，以上結(jié)果對米諾環(huán)素的急性心肌保護(hù)的臨床應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。

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（編輯 武玉欣）

Protective Effectof Intravenous Infusion ofLow Dose Minocycline Postconditioning on Myocardial Ischemia-reperfusion Injury in Rat

ZHANGLi-qun1，CHENYong-jun2，CUIRen-shan1，QIGuo-xian3

（1.Department of Humanity，School of Nursing of Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China；2.Department of Clinical Lab，Shenzhou Hospital，Shenyang MedicalCollege，Shenyang 110002，China；3.DepartmentofCardiology，The FirstHospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110001，China）

Objective To evaluate the effects of low dose intravenous minocycline postconditioning on myocardial ischemia-reperfusion injury in rat，and to investigate the possible mechanisms.MethodsForty-eight male Wistar rats were randomly divided into four groups：sham-operation（SO）group，ischemia-reperfusion（IR）group，low-dose minocycline（3 mg/kg，LM）group and high-dose minocycline（10 mg/kg，HM）group. The rat model of myocardial IR was established by occlusion of the left anterior descending coronary artery for 45 minutes and reperfusion for 120 minutes.Afterthe reperfusion，the parameters ofhaemodynamicswere recorded；creatine kinase MB（CK-MB），cardiac troponin-I（cTn-I），malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD）in serum and myocardium，myocardial apoptosis index（AI）and the myocardial tissue morphology were determined.ResultsCompared with IR group，LM and HM treatment significantly reduced the levels of CK-MB form，cTn-I，AI and MDA，lowered LVEDP，enhanced LVSP and±dp/dtmax，elevated the activity of SOD in serum and myocardium（P＜0.05）.The effect of HM is stronger than LM on these above mentioned indicators，but the difference was not statistical significance（P＞0.05）.ConclusionLM postconditioning can protect against myocardial IR injury，and the protective effect may be related to the scavenging of oxide free radical，which further restrain the reaction oflipid peroxidation and apoptosis.

minocycline；ischemia postconditioning；myocardial ischemia-reperfusion injury

R541.4

A

0258-4646（2015）08-0685-05

遼寧省教育廳科學(xué)研究一般項(xiàng)目（L2013399）；沈陽醫(yī)學(xué)院博士科研啟動基金（20133050）

張利群（1970-），女，副教授，博士. E-mail：sunflowerzlq@163.com

2015-01-16

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