劉衛(wèi)梅

VEGF-C在食管鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義

劉衛(wèi)梅

目的 檢測血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)在食管正常上皮、食管上皮非典型增生及食管鱗狀細(xì)胞癌(鱗癌)組織中的表達(dá), 探討VEGF-C與食管鱗癌發(fā)生、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和發(fā)展的相互聯(lián)系。方法 采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測25例正常食管、70例食管鱗狀上皮非典型增生、55例食管鱗癌組織中VEGF-C的表達(dá)。結(jié)果 VEGF-C在正常食管鱗狀上皮、食管鱗狀上皮非典型增生及食管鱗癌組織中的表達(dá)依次增高, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌組織中VEGF-C的陽性表達(dá)明顯低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例(P＜0.05), VEGF-C在低分化鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于中高分化鱗癌組織(P＜0.05), 但與臨床分期無關(guān)。結(jié)論 VEGF-C蛋白表達(dá)與食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

食管癌；血管內(nèi)皮生長因子C；免疫組織化學(xué)；腫瘤發(fā)生發(fā)展；轉(zhuǎn)移

食管癌是我國許多地區(qū), 特別是華北地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一, 發(fā)病率隨年齡的增長不斷升高, 腫瘤細(xì)胞的擴散和轉(zhuǎn)移是腫瘤致死的主要原因, 新生淋巴管和血管的生成是腫瘤轉(zhuǎn)移的依靠, 淋巴管生成受VEGF-C的影響［1］, 在腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起非常重要的作用。本文應(yīng)用免疫組化S-P法檢測VEGF-C在食管正常上皮、食管上皮非典型增生及食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況, 目的在于探討其在食管癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移和發(fā)展中的重要意義, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院病理科2012年3月～2014年3月手術(shù)切除標(biāo)本150例, 患者年齡41～82歲, 平均年齡56.8歲。術(shù)前均沒有放療和化療, 其中食管正常上皮25例, 食管上皮非典型增生70例(輕度非典型增生18例, 中度非典型增生24例, 重度非典型增生28例), 食管鱗狀細(xì)胞癌組織55例,臨床Ⅰ期食管鱗癌病例13例, 臨床Ⅱ期30例, 臨床Ⅲ期9例,臨床Ⅳ期3例；組織病理分級：6例高分化.15例中分化.34例低分化.30例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.25例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.2 試劑 兔抗人VEGF-C多克隆抗體、DAB顯色劑、S-P試劑盒均購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 方法 免疫組化步驟 ：腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定, 常規(guī)石蠟包埋, 切片厚度為3 μm, 脫蠟、水洗, 滴加一抗、二抗, DAB顯色, 蘇木素復(fù)染, 中性樹膠封片, 以已知抗體陽性組織作為陽性對照, 用PBS替代一抗作陰性對照。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn) VEGF-C蛋白在癌細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性, 細(xì)胞核著色無意義, 低倍鏡下(×100)分別選取VEGF-C密度最高癌細(xì)胞陽性區(qū)域, 計數(shù)10個視野中的500個癌細(xì)胞, 以細(xì)胞陽性數(shù)占腫瘤細(xì)胞數(shù)的百分率來表示, 陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性［2］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗；相關(guān)性采用線性相關(guān)分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C在食管正常上皮、食管上皮非典型增生及食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá) VEGF-C陽性標(biāo)記是棕色顆粒定位于食管癌細(xì)胞或食管非典型增生細(xì)胞的胞漿中, 陽性對照有明顯的陽性標(biāo)記, 陰性對照沒有陽性標(biāo)記。

2.2 VEGF-C與食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、進(jìn)展的聯(lián)系 隨著食管病變的進(jìn)展(正常-非典型增生-癌), VEGF-C的陽性表達(dá)率顯著增高, 食管正常鱗狀上皮表達(dá)呈陰性, 食管鱗狀上皮輕-中度非典型增生陽性率為2.4%(1/42), 食管鱗狀上皮重度非典型增生陽性率為32.1%(9/28), 鱗癌組織陽性率為45.5%(25/55), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 VEGF-C陽性表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的聯(lián)系 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF-C陽性表達(dá)率33.3%(10/30)明顯低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組60.0%(15/25), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 VEGF-C表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌分期及分級的聯(lián)系 高分化鱗癌6例中陽性反應(yīng)1例, 中分化鱗癌15例中陽性反應(yīng)4例, 低分化鱗癌34例中陽性反應(yīng)20例。VEGF-C表達(dá)與食管癌的分級呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05), VEGF-C在不同分期的食管鱗癌患者中表達(dá)(陽性表達(dá)：Ⅰ期6例, Ⅱ期14例, Ⅲ期4例,Ⅳ期1例)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05), 表明VEGF-C的表達(dá)與臨床分期無關(guān)。

3 討論

1996年Joukov等［3］克隆并分離出VEGF-C, Skobe等［4］研究發(fā)現(xiàn)它可以使腫瘤內(nèi)部和腫瘤周圍組織有新的淋巴管形成, 且可以增加淋巴轉(zhuǎn)移能力, 本文采用免疫組化S-P法分別檢測了食管正常上皮、食管上皮非典型增生和食管鱗癌中的表達(dá), 發(fā)現(xiàn)食管正常上皮及食管上皮非典型增生陽性表達(dá)率明顯低于食管鱗癌組織, 表達(dá)程度隨腫瘤的惡性程度增加而增高, 表明它在食管鱗癌發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用, 實驗發(fā)現(xiàn)VEGF-C表達(dá)與食管鱗癌分期無關(guān), 與分化程度呈負(fù)相關(guān),中高分化組中陽性表達(dá)率明顯低于低分化組, 表明其有癌分化抑制的作用, 且表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移緊密聯(lián)系, 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。本實驗中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中有10例表達(dá)陽性, 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度是食管鱗癌患者的兩個重要預(yù)后因素, 為食管癌患者預(yù)后的重要生物學(xué)指標(biāo), 抑制腫瘤生長最有效的治療是抑制血管的生成,但惡性腫瘤主要是通過淋巴管擴散, 本試驗在食管鱗癌組織標(biāo)本中基因表達(dá)增強, 可通過阻滯其表達(dá), 從而使淋巴管的生成受到抑制并且促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡, 從而抑制癌細(xì)胞的局部浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移, 對其通路抑制可為食管鱗癌的治療提供新途徑。

［1］ Niki T, Iba S, Tokunou M, et al. Expression of vascular endothelial growth factorA, B, C and D and their relationships to lymph node status in lung adenocarcinoma. Clin Cancer Res.2000.6(6):2431-2439.

［2］ Tang RF, Itakura I, Aikawa T, et al. Over expression of lymphangiogenic growth factor VEGF-C in human pancreatic cancer. Pancreas.2001.22(3):258-292.

［3］ Joukov V, Pajusola K, Kaipainen A, et al. A novelvascularendothelial growth factor, VEGF-C, is a ligand for the Flt4(VEGFR-3) and KDR (VEGFR-2) receptor tyrosine kinases. EMBO J.1996.15(2).290-298.

［4］ Skobe M, Hawighorst T, Jackson DG, et al. Induction of tumor limp angiogenesis by VEGF-C promotes breast cancermetastasis. Nat Med.2001.7(2):192-198.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.35.019

2015-06-01］

454001 河南省焦作市第二人民醫(yī)院病理科