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兒童下呼吸道感染痰涂片與痰培養(yǎng)結(jié)果一致性研究

2015-01-30 01:03:16王紅梅蔣元琴陳虹宇趙瑞珍馬東禮
中國感染控制雜志 2015年9期
關(guān)鍵詞:莫拉內(nèi)酰胺酶嗜血

張 艷,王紅梅,蔣元琴,陳虹宇,趙瑞珍,馬東禮

(1深圳市兒童醫(yī)院,廣東 深圳 518026;2重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗系,重慶 400016)

呼吸系統(tǒng)疾病是兒童的常見多發(fā)病,由于兒童呼吸系統(tǒng)尚未發(fā)育完善,免疫力較低,容易受到外界病原菌的感染,而且病情反復(fù)易危及生命。痰培養(yǎng)是臨床常用的診斷方法之一,但較為費時,而痰涂片檢查是一種簡單、快速的檢查方法。本研究通過對我院915份患兒痰標(biāo)本涂片和培養(yǎng)結(jié)果進行分析,旨在評估痰涂片在下呼吸道感染中的診斷價值,并對病原菌分布及耐藥性進行分析,現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 915份痰標(biāo)本來自2014年3—5月下呼吸道感染住院患兒(同一患兒標(biāo)本不重復(fù)計入),其中男性584例,女性331例,年齡2 h~13歲,平均年齡(1.67±1.97)歲。痰標(biāo)本均在患兒入院后未使用抗菌藥物前采集,采集方法為使用無菌吸痰管自鼻腔或口腔插入下呼吸道,利用負壓吸引器經(jīng)吸痰管吸取。

1.2 材料與儀器 血平板及麥康凱平板由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供,嗜血巧克力平板由廣州迪景微生物科技有限公司提供,PREVI Col or Gram12自動革蘭染色儀、VITEK 2 Compac全自動細菌鑒定儀及藥敏分析系統(tǒng)、β-內(nèi)酰胺酶快速檢測試劑均購自法國生物梅里埃公司。質(zhì)控菌株:金黃色葡萄球菌ATCC 29213,銅綠假單胞菌ATCC 27853,大腸埃希菌ATCC 25922,流感嗜血桿菌ATCC 9006,肺炎鏈球菌ATCC 49619,均購自衛(wèi)生部臨床檢驗中心。

1.3 培養(yǎng)鑒定及藥敏 實驗室收到標(biāo)本后,無菌操作挑取痰中膿性部分涂成均勻薄片,待干燥后使用PREVI Color Gram12自動革蘭染色儀進行革蘭染色,同時將痰標(biāo)本立即接種于血平板、麥康凱平板及含萬古霉素的嗜血巧克力平板,接種后的血平板和嗜血巧克力平板置于35℃的CO2孵育箱中,麥康凱平板置于35℃孵育箱中,培養(yǎng)18~24 h后觀察結(jié)果,對純培養(yǎng)和優(yōu)勢病原菌進行鑒定和藥物敏感性檢測,對嗜血桿菌和卡他莫拉菌僅進行β-內(nèi)酰胺酶檢測。

1.4 痰標(biāo)本質(zhì)量判斷標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)革蘭染色后鏡檢,確定標(biāo)本的質(zhì)量。參考《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版[1],并結(jié)合實際工作情況,將痰涂片分為3類。第1類:白細胞>25個/低倍視野,鱗狀上皮細胞<10個/低倍視野,視為合格標(biāo)本;第2類:白細胞>10個/低倍視野,鱗狀上皮細胞<25個/低倍視野,可見數(shù)量不等的纖毛柱狀上皮細胞或者細菌種類≤3,此類為可接受標(biāo)本;第3類:白細胞<10個/低倍視野,鱗狀上皮細胞>25個/低倍視野,此類為不合格標(biāo)本,不納入研究范圍。

1.5 痰涂片與痰培養(yǎng)是否相符的判斷方法 參考《實用臨床微生物學(xué)檢驗與圖譜》[2],經(jīng)革蘭染色后,根據(jù)被炎性包裹物包裹及膿細胞吞噬的細菌形態(tài)特征為依據(jù),將涂片與培養(yǎng)是否相符分為4類,其中第1、第2、第3類均被認為相符,第4類被認為不相符。見表1,圖1~4。

表1 痰涂片與痰培養(yǎng)是否相符的判斷方法Table 1 Methods for judging t he coincidence of sputum smear and culture

1.6 統(tǒng)計分析 應(yīng)用 WHONET 5.6對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 痰涂片與痰培養(yǎng)結(jié)果符合性 痰涂片與培養(yǎng)結(jié)果符合率為67.43%(617/915),具體結(jié)果見表2。

圖1 痰涂片和痰培養(yǎng)完全相符(第1類)Figure 1 Sputum smear and culture were completely consistent(category 1)

圖2 痰涂片和痰培養(yǎng)半相符(第2類)Figure 2 Sputum smear and culture were semi-consistent(category 2)

圖3 痰涂片和痰培養(yǎng)半相符(第3類)Figure 3 Sputum smear and culture were semi-consistent(category 3)

圖4 痰涂片和痰培養(yǎng)完全不相符(第4類)Figure 4 Sputum smear and culture were completely inconsistent(category 4)

表2 痰涂片與痰培養(yǎng)結(jié)果符合情況Table 2 Coincidence of sputum smear and culture results(%)

2.2 病原菌分布及藥敏結(jié)果 痰培養(yǎng)標(biāo)本陽性率為65.90%(603/915),共分離730株病原菌,按不同年齡組統(tǒng)計病原菌分布見表3。288株嗜血桿菌屬中,副流感嗜血桿菌占91.67%(264株),流感嗜血桿菌占8.33%(24株)。產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶率:副流感嗜血桿菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌分別為44.70%(118/264)、45.83%(11/24)、93.81%(91/97)。共分離肺炎鏈球菌178株,其對大多數(shù)抗菌藥物較敏感,對紅霉素、四環(huán)素、復(fù)方磺胺甲口惡唑耐藥率高,具體藥敏結(jié)果見表4。

表3 各年齡組病原菌分布(株數(shù),%)Table 3 Distribution of pathogens from children of different age groups(No.of isolates,%)

表4 肺炎鏈球菌對15種抗菌藥物的藥敏結(jié)果(%,株數(shù))Table 4 Antimicrobial susceptibility results of Streptococcus pneumoniae to 15 kinds of antimicrobial agents(%,No.of isolates)

3 討論

對于兒童下呼吸道感染性疾病,痰培養(yǎng)和痰涂片病原學(xué)檢查是臨床常用的診斷方法之一,但培養(yǎng)較為耗時,而痰涂片檢查快速簡單。痰涂片的意義在于:(1)通過涂片能篩選出合格的標(biāo)本,提高培養(yǎng)陽性率;(2)在痰涂片鏡檢中,對于一些具有特殊形態(tài)的細菌,如革蘭陽性矛頭狀排列的肺炎鏈球菌、革蘭陰性細小的嗜血桿菌、革蘭陰性腎形成對排列的卡他莫拉菌和革蘭陽性不規(guī)則排列的葡萄球菌,當(dāng)這幾類細菌單一或大量出現(xiàn)時,可直接描述形態(tài)報告疑似菌,同時結(jié)合細菌有無被炎性包裹物包裹及膿細胞吞噬情況,及時向臨床反饋初步結(jié)果,指導(dǎo)臨床醫(yī)生提前經(jīng)驗用藥,彌補培養(yǎng)時間較長的不足,縮短患兒的治療時間。915份痰標(biāo)本涂片與培養(yǎng)結(jié)果進行比較,兩者總體符合率為67.43%,可見痰涂片對臨床有一定的診斷價值,能作為一種簡便、快速向臨床提供病原學(xué)診斷的方法,因此,細菌室工作人員在痰培養(yǎng)接種之前應(yīng)進行涂片。本研究中痰涂片與培養(yǎng)仍有32.57%不符合,可能原因為(1)涂片陰性但培養(yǎng)陽性:與痰標(biāo)本性狀有關(guān),當(dāng)細菌被黏液包裹和細胞吞噬時不易著色;革蘭陰性菌染色與背景顏色接近,不易發(fā)現(xiàn);一些具有莢膜的黏液型細菌如肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌等,莢膜抵抗白細胞的吞噬,且有時在痰涂片中形態(tài)會發(fā)生臘腸樣等變化,不易識別。(2)涂片陽性但培養(yǎng)陰性:一些苛養(yǎng)菌如肺炎鏈球菌、嗜血桿菌等,如未及時接種容易死亡;一些生長較慢的致病菌容易被生長較快的優(yōu)勢正常菌掩蓋;另外,在涂片中,當(dāng)發(fā)現(xiàn)在常規(guī)培養(yǎng)條件下無法生長的細菌被細胞吞噬時也會造成兩者結(jié)果不符,如百日咳鮑特菌、厭氧菌等。針對以上分析的原因,建議臨床應(yīng)在抽取痰標(biāo)本后及時送檢,實驗室應(yīng)及時接種培養(yǎng),同時實驗室也應(yīng)定期組織相關(guān)的培訓(xùn)學(xué)習(xí),提高檢驗人員的閱片水平,避免漏檢。

將730株痰培養(yǎng)病原菌按不同年齡組進行統(tǒng)計,發(fā)現(xiàn)<1歲年齡組病原菌所占比率最高,占57.53%,1~3歲組占33.29%,4~6歲組占8.08%,≥7歲患兒僅占1.10%,說明下呼吸道感染性疾病容易發(fā)生于0~3歲嬰幼兒。痰培養(yǎng)病原菌分離居前3位的是副流感嗜血桿菌(36.17%,264株)、肺炎鏈球菌(24.38%,178株)和卡他莫拉菌(13.29%,97株),均為苛養(yǎng)菌,是兒童社區(qū)獲得性肺炎的主要致病菌,與文獻報道[4]一致。各年齡組病原菌分布也有所差異,0~1歲組主要以副流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌為主,卡他莫拉菌排第4位,僅次于金黃色葡萄球菌;而1~3歲和4~6歲組均以副流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌為主。嗜血桿菌屬和卡他莫拉菌均能產(chǎn)生質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶(青霉素酶和頭孢菌素酶),這些酶的產(chǎn)物是導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的常見原因[5]。288株嗜血桿菌中,以副流感嗜血桿菌為主(占91.67%),其次是流感嗜血桿菌(占8.33%),其中產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的嗜血桿菌占44.79%(129株),產(chǎn)酶率高于肖啟國[6]報 道 的23.50%,低 于 何 娟 妃 等[7]報 道 的55.80%,提示嗜血桿菌屬細菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶比率較高,應(yīng)引起高度重視。93.81%(91/97)的卡他莫拉菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶,與張玲等[8]報道一致。

本組研究中,肺炎鏈球菌對青霉素敏感率為54.49%,對紅霉素耐藥率已高達96.63%,與袁紅英等[9]報道的90.48%接近,提示紅霉素已不適用于臨床肺炎鏈球菌感染的治療。肺炎鏈球菌對頭孢曲松和頭孢噻肟的敏感率分別為82.02%和77.53%,尚有較佳的抗菌活性,提示第三代頭孢仍可用于臨床肺炎鏈球菌感染(非腦膜炎)的經(jīng)驗性治療。未發(fā)現(xiàn)對萬古霉素、利奈唑胺、莫西沙星耐藥的菌株。

本研究結(jié)果表明,痰涂片對臨床有一定的診斷價值,在痰培養(yǎng)接種之前應(yīng)進行涂片;重視病原學(xué)診斷,并將病原菌分布及其耐藥性為合理使用抗菌藥物提供參考,以減少耐藥菌株的形成。

[1] 葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:744-745.

[2] 陳東科,孫長貴.實用臨床微生物學(xué)檢驗與圖譜[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2011:158.

[3] Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing;t wenty-second informational supplement.CLSI document M100-S22[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2012.

[4] 張蕾,艾濤,楊亞靜,等.兒童社區(qū)獲得性肺炎病原菌分析[J].中國感染控制雜志,2014,13(1):50-52.

[5] Karlowsky JA,Ver ma G,Zhanel GG,et al.Presence of ROB-1 beta-lactamase correlates with cefaclor resistance among recent isolates of Haemophil us influenzae [J].J Antimicrob Chemot her,2000,45(6):871-875.

[6] 肖啟國.嗜血桿菌的分離及耐藥性分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(1):11-13.

[7] 何娟妃,陳群英,馬巧紅.兒童下呼吸道感染病原菌的耐藥性分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24(2):276-278.

[8] 張玲,程方雄,劉瑾,等.卡他莫拉菌臨床分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,24(3):545-546.

[9] 袁紅英,于軍校,府偉靈,等.兒童下呼吸道感染的肺炎鏈球菌耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(10):2127-2128.

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