郭海燕 王志生 武 艷 孫 巖*

（吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長春130012）

病理HE染色制片的質(zhì)量控制實(shí)踐

郭海燕 王志生 武 艷 孫 巖*

（吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長春130012）

目的 掌握影響病理HE染色制片質(zhì)量的因素，規(guī)范且準(zhǔn)確地制備優(yōu)質(zhì)HE染色制片。方法 通過對我院2012年1月至2013年1月的石蠟病理切片800例進(jìn)行快速的組織病理染色，分析影響病理HE染色制片質(zhì)量的關(guān)鍵因素。結(jié)果 所有的病理切片在適宜溫度和試劑濃度下染色均獲得較好的效果。結(jié)論 病理HE染色制片的質(zhì)量與操作人員的技術(shù)水平、操作經(jīng)驗(yàn)、質(zhì)量的控制方法等有關(guān)，要制備出優(yōu)質(zhì)的切片需要嚴(yán)格做好每一操作環(huán)節(jié)。

病理；HE染色制片；質(zhì)量控制

在臨床工作中，病理診斷是一個非常重要的環(huán)節(jié)，決定著臨床治療的方法，如手術(shù)的方法、預(yù)后的治療、常規(guī)的護(hù)理等等［1］。病理醫(yī)師的診斷技術(shù)水平和組織病理切片制作的質(zhì)量直接影響病例診斷的結(jié)果，其中HE染色技術(shù)是制片質(zhì)量的核心內(nèi)容，只有保證制片的質(zhì)量，才能提高診斷的準(zhǔn)確率，目前，病理科最關(guān)心的問題就是如何提高制片的質(zhì)量，對于臨床工作中常常出現(xiàn)質(zhì)量不穩(wěn)定的問題，如切片組織破碎、病理染色模糊等等，工作人員進(jìn)行了控制病理HE染色制片的質(zhì)量的實(shí)踐，現(xiàn)對其總結(jié)分析如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：選擇2012年1月至2013年1月期間來我院就治患者的石蠟病理切片800例，其中子宮內(nèi)膜180例、活檢組織120例、骨組織 234例、脂肪組織 266 例。

1.2實(shí)踐操作方法

1.2.1標(biāo)本的取材要求和固定：標(biāo)本在取材時要選用合適的且鋒利的刀具，切割時一定不要拖拉，避免在取材時用力夾、鋸、壓使組織變形，組織大小要適宜一般為：長22 mm、寬22 mm、高不大于2 mm，然后進(jìn)行脫水。一旦組織切的太厚，會出現(xiàn)脫明透明浸蠟不徹底，這樣是很難切除完整切片的，而且染色不均勻，制片的質(zhì)量下降。染色不均、灰染的主要原因是組織固定不良，所以制片的關(guān)鍵是固定組織。離體后的組織要做到盡快固定，固定的效果會影響接下來的制片過程。固定液的種類有很多，一般選擇10%福爾馬林，它是常規(guī)HE切片的首選固定液，送檢的標(biāo)本通常采用乙醇固定，需要再使用上述濃度的福爾馬林溶液對標(biāo)本再次固定，否則，會使標(biāo)本染色不良造成所謂的灰染，原因是乙醇沉淀的球蛋白和白蛋白不溶于水，但是核蛋白會溶于水。

1.2.2脫水和透明處理：脫水和透明是HE制片技術(shù)的核心，關(guān)系到后面制片的每一個環(huán)節(jié)，所以脫水和透明的處理要給予足夠的重視，如果忽視了此過程浸蠟和切片就不能很好的完成，這樣會降低切片的質(zhì)量。脫水時選擇酒精作為溶劑，濃度按照梯度進(jìn)行：70%、80%、90%、95%酒精最后到無水酒精完畢。其中95%酒精和無水酒精需要足量要保證濃度。無水酒精對組織的處理時間控制在2～3 h內(nèi)，時間一旦過久組織脫水過多，切片的質(zhì)量會下降。二甲苯是常用的透明劑，作用是使組織變脆，但過脆就會使組織易碎，所以要嚴(yán)格控制組織在二甲苯溶液中的浸泡時間，1 h左右為較好時間，需要注意的是二甲苯和酒精需要依據(jù)組織多少來更換，所以絕不可以等到切片出問題才換。

1.2.3浸蠟的方法：目的是清除掉二甲苯，通常石蠟的溫度保持在56～58 ℃，不宜太高［2］，浸蠟的時間一般為1～3 h根據(jù)組織大小薄厚而定。過高的溫度導(dǎo)致組織收縮，變脆也變硬，這樣得到的切片與理想的切片相差很遠(yuǎn)了。

1.2. 4 包埋過程：包埋石蠟的選擇影響切片質(zhì)量，包埋石蠟的溫度60～65 ℃［3］，溫度過高時會引起組織蛋白變質(zhì)，染色出現(xiàn)障礙對染料拒染。如果操作在低溫進(jìn)行，動作一定要快，組織的溫度要與石蠟的溫度相融合，也要與使用的鑷子溫度保持一致，防止組織和周圍脫裂，包埋過程中病灶組織切面向下，層次清楚的腸管、囊壁組織進(jìn)行豎立包埋。對于皮膚組織表面必須與包面垂直，有益于較好的觀察到皮膚的各層結(jié)構(gòu)。

1.2.5石蠟切片技術(shù)：制作出一張薄厚均勻，完整的組織病理切片最為關(guān)鍵的是切片機(jī)的優(yōu)質(zhì)，所以醫(yī)院應(yīng)選用進(jìn)口的切片機(jī)，切片時要一次性切片，不要復(fù)切，切片刀具的鋒利程度會對切片是否產(chǎn)生缺口有決定作用，切片刀具選擇20°～30°角度大小放置，使用時要嚴(yán)格檢查切片機(jī)各部位零件螺絲是否已經(jīng)旋緊，避免產(chǎn)生橫皺紋。通常切片的厚度在3～5 μm為宜［4］，如果切片時用力過猛或者用力不均勻，這樣會造成切出的薄片薄厚不等，對像皮膚組織的表皮，胃腸組織的漿膜較硬難切的組織放在上端，這樣切片切出的很完整。對認(rèn)為是癌癥患者的病理，要做連續(xù)切片和深切片，通過鏡下的仔細(xì)觀察查找病變的原因。

1.2.6染色過程：病理工作中最基本的染色方法是蘇木精-伊紅染色方法，它能很好地展現(xiàn)組織的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞的形態(tài)，染色后的切片非常漂亮，細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)是粉紅色，不同部位對比較明顯，如果想讓該良好的染色效果保持長久，可將配好的染色溶液用濾紙過濾一次，然后根據(jù)染色液的量每100 mL染液加5 mL冰醋酸，再次過濾。石蠟切片需要脫掉石蠟后方能顯色，如果二甲苯放置的環(huán)境是低溫或者已經(jīng)擱置了很久（適宜時間5～10 min），在切片脫蠟是要適時加長時間，同時石蠟切片通過在Harris蘇木精染色后，不可以長時間在鹽酸酒精溶液中停留，需要在鏡下控制切片的分化程度，如果過度，必須經(jīng)水洗進(jìn)行第二次染色，染色后的切片再通過不同濃度的酒精脫水，酒精的濃度選擇由低到高，切片在低濃度酒精中停留時間短，隨著酒精濃度的變化，時間也逐漸延長，無水酒精要保證絕對無水，如果不放心可以加入無水CuSO4，溶液要是變成藍(lán)色說明無水酒精里面含水，這是要更換無水酒精。蘇木素、伊紅的配制與其染色方式以及所處的溫度、染色溶液的酸堿程度和染色時間都會影響染色的質(zhì)量，在病理HE染色制片時，最常用的染液就是Harris蘇木素和伊紅染液［5］，而關(guān)鍵的一步是蘇木素染好后的分化及藍(lán)化。

優(yōu)質(zhì)的病理組織切片猶如一張美觀的藝術(shù)圖片，紅與藍(lán)的圖痕與紋理，看到如此完美的工作成果更加激起工作人員積極上進(jìn)的決心，為病理診斷提供更好的條件，為患者的治療提供準(zhǔn)確的結(jié)果。

1.2.7操作中注意事項(xiàng)：石蠟切片的過程中出現(xiàn)切片脫落或者部分脫落是常見的問題，主要原因有組織中含有血液組成成分、膠質(zhì)成分，對此可以先在干凈的載玻片上涂一些蛋白甘油之后再進(jìn)行貼片；組織較硬、組織取材太大太厚也會引起脫落，所以要注意取材大小。用無水乙醇和二甲苯脫水過程中，時間過長，太低的浸蠟溫度，造成石蠟不溶解，而石蠟長時間沒有更換或者浸蠟時間太久，還有溫度太高這些因素會造成病理組織因收縮過大變脆變硬，不易進(jìn)行切片。

2　結(jié) 果

通過在適宜環(huán)境溫度和試劑濃度下對選取的800例病理切片進(jìn)行快速染色，均獲得了較好的染色效果。

3　討 論

目前病理HE染色制片已經(jīng)大量用于臨床診斷與科研中，這種技術(shù)在醫(yī)療診斷中占有重要地位，是最重要也是最基礎(chǔ)的，對臨床的治療具有指導(dǎo)作用，其切片質(zhì)量直接決定著病理診斷的準(zhǔn)確性，病理HE染色切片的優(yōu)劣，在電鏡下顯示各種各樣的圖像，甚至出現(xiàn)相反的結(jié)果。由此可見，病理HE染色切片質(zhì)量的重要性，醫(yī)療技術(shù)人員完全認(rèn)識到了這一點(diǎn)，不斷提高自身素質(zhì)和技術(shù)水平，追求高質(zhì)量的HE切片，為其他免疫組化染色等工作做基礎(chǔ)，當(dāng)然制備出優(yōu)質(zhì)的病理切片不是一件容易的事情，需要工作人員在平時的工作中注意觀察，細(xì)心總結(jié)，不斷提高自身的動手能力，這樣熟練技巧和實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)將會進(jìn)一步提高病理診斷的準(zhǔn)確性。通過上述實(shí)踐，組織細(xì)胞的取材過程、脫水過程、切片過程都對病理HE染色質(zhì)量具有很大的影響，染色的質(zhì)量又直接影響病理科室的診斷準(zhǔn)確率，如果HE染色的質(zhì)量不好，診斷的結(jié)果就不明確，進(jìn)而影響臨床上對患者疾病的治療，所以不同的標(biāo)本采用不同的取材方式。細(xì)胞核的著色決定著HE染色的質(zhì)量，可以說這項(xiàng)工作是物理和化學(xué)共同的作用，主要由于組織內(nèi)部有很多細(xì)小的孔，通過滲透作用染料溶液與組織結(jié)合，這時組織會吸收染料溶液發(fā)生擴(kuò)散和溶解作用，再次使二者緊密結(jié)合；染料溶液含有部分陽離子和部分陰離子，在與組織細(xì)胞接觸時會分別結(jié)合組織中的酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì)［6］，生成固定的分子，非常的牢固。病理HE染色的質(zhì)量與操作過程中的各個環(huán)節(jié)都息息相關(guān)，所以每一步驟都不容忽視，一定做到要提高制片質(zhì)量，為臨床診斷提供準(zhǔn)確的病理資料。

［1］ 武巧伶.淺談HE染色方法在臨床病理診斷中的作用［J］.中外醫(yī)學(xué)研究，2013，11（29）:591.

［2］ 劉定忠.病理HE制片中易出現(xiàn)問題的解決方略［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2011，32（20）:4205.

［3］ 陳宣世.HE染色兩次分化法在病理制片技術(shù)中的應(yīng)用與探索［J］.重慶醫(yī)學(xué)雜志，2010，39（22）:3109.

［4］ 袁艷華.改良冰凍切片HE染色方法在神經(jīng)病理診斷工作中的應(yīng)用［J］.中華神經(jīng)外科雜志，2009，20（3）:261.

［5］ 張曦.冰凍切片HE染色對腎臟疾病的快速診斷［J］.中國基層醫(yī)藥，2008，12（4）:506.

［6］ 王興波.HE染色褪色后免疫染色的病理觀察［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2009，4（22）:124.

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1671-8194（2015）24-0041-02