秦曉明 柯國琳 楊孔超

·綜述·

黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)的研究進(jìn)展

秦曉明 柯國琳 楊孔超

黑素細(xì)胞移植是治療穩(wěn)定期白癜風(fēng)的方法之一，主要包括培養(yǎng)的黑素細(xì)胞移植和表皮細(xì)胞懸液移植。近年來動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)脂肪干細(xì)胞可代替角質(zhì)形成細(xì)胞與黑素細(xì)胞共培養(yǎng)移植治療白癜風(fēng)。白癜風(fēng)患者自體黑素細(xì)胞的移植效率可通過皮損周圍皮膚歸巢CD8＋T細(xì)胞活動(dòng)性來進(jìn)行預(yù)測，真皮間充質(zhì)干細(xì)胞可作為黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)的輔助劑。本文綜述黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)的國內(nèi)外進(jìn)展，旨在為臨床提供參考。

白癜風(fēng)； 黑素細(xì)胞； 移植

白癜風(fēng)是一種需要綜合治療的皮膚病。其病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確，近年來認(rèn)為基因遺傳因素、神經(jīng)學(xué)說、自身免疫假說和氧化應(yīng)激等可直接或間接破壞黑素細(xì)胞，引起黑素合成及分布異常，使色素脫失導(dǎo)致白癜風(fēng)。1對于穩(wěn)定期的局限型、節(jié)段型、散發(fā)型及泛發(fā)型暴露部位的白斑，移植是一種有效的治療手段。白癜風(fēng)的移植治療主要包括表皮移植和黑素細(xì)胞移植。2前者主要是指使用不同的技術(shù)使皮膚組織作為一個(gè)整體移植到受體區(qū)；而后者則需進(jìn)一步從皮膚組織中分離出黑素細(xì)胞，然后將黑素細(xì)胞移植到受體區(qū)。而自體黑素細(xì)胞移植又包括非培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植和培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植?，F(xiàn)對自體黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)的國內(nèi)外新進(jìn)展綜述如下。

1 患者的選擇

移植治療白癜風(fēng)取得良好美容效果的首要因素是選擇合適的患者。考慮的因素主要包括:患者的年齡、發(fā)病部位、瘢痕體質(zhì)及是否處在疾病的穩(wěn)定期。3臨床上，白癜風(fēng)穩(wěn)定期表現(xiàn)為原白斑無擴(kuò)大，無新發(fā)皮損，無同形反應(yīng)。IADVL專業(yè)組已達(dá)成共識(shí):白癜風(fēng)患者在過去的一年內(nèi)白斑無擴(kuò)大，無新發(fā)皮損，無同形反應(yīng)為白癜風(fēng)穩(wěn)定期。4洪為松等5認(rèn)為白癜風(fēng)穩(wěn)定期時(shí)間越長，移植療效越好。近年來研究發(fā)現(xiàn)在過去的18個(gè)月內(nèi)白斑無擴(kuò)大，無新發(fā)皮損，無同形反應(yīng)的白癜風(fēng)患者更適合進(jìn)行移植手術(shù)。6

2 黑素細(xì)胞移植

2.1 非培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植 非培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植是指表皮細(xì)胞懸液移植，該表皮細(xì)胞懸液是由角質(zhì)形成細(xì)胞和黑素細(xì)胞組成的混合物，是一種相對簡單的細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)的方法。1992年Galus等7首先報(bào)道用含角質(zhì)形成細(xì)胞的非培養(yǎng)黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)取得成功。1998年 Olsson和Juhlin也用表皮細(xì)胞懸液移植成功治療白癜風(fēng)。8隨后該技術(shù)被改進(jìn)和普遍應(yīng)用，包括三個(gè)主要步驟:9(1)通過刃厚皮片移植或負(fù)壓吸皰移植取供皮區(qū)皮膚；(2)制備富含黑素細(xì)胞的基底細(xì)胞懸液；(3)受皮區(qū)磨皮或者通過CO2激光磨削后將表皮細(xì)胞懸液移植于該區(qū)。同表皮移植相比該法具有以少量供皮區(qū)治療較大范圍皮損的優(yōu)點(diǎn)，受皮區(qū)與供皮區(qū)面積比可達(dá)1∶8～1∶10。10此外該移植技術(shù)的復(fù)色效果佳，可以達(dá)到更好的美容效果。11但同時(shí)它具有以下缺點(diǎn):3(1)需要特定的細(xì)胞培養(yǎng)基生化試劑及媒介；(2)同表皮移植相比花費(fèi)更高；(3)手術(shù)室需配備培養(yǎng)箱、離心機(jī)及用于制備細(xì)胞懸液的無菌環(huán)境；(4)耗時(shí)較長。

非培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)欲取得良好效果需注意以下幾方面:(1)確保胰蛋白酶消化完全，如果胰蛋白消化不完全，可延長孵育時(shí)間；12胰

蛋白有冷熱兩種消化方法，冷消化法分離的細(xì)胞數(shù)量多，熱消化法耗時(shí)少；13(2)將透明質(zhì)酸摻入到表皮細(xì)胞懸液中以增加其黏著性，以使其在移植床部位穩(wěn)定的附著；14(3)確保表皮細(xì)胞懸液均勻的涂于移植床部位，以減少復(fù)色區(qū)色素不均的可能性；3(4)表皮細(xì)胞懸液中的細(xì)胞成分需保持在理想的水平，以防止移植床部位色素過度沉著或者色素減退。供皮區(qū)和受皮區(qū)面積之比為1∶10可以達(dá)到最佳的復(fù)色效果，但是其科學(xué)性還有待驗(yàn)證；14(5)術(shù)后采用NB－UVB或PUVA照射可以加快復(fù)色的進(jìn)程，而一些學(xué)者僅僅在復(fù)色延遲時(shí)才使用這些補(bǔ)充治療；12，14(6)術(shù)中使用膠原蛋白敷料可以改善復(fù)色效果；3(7)通過計(jì)算所需表皮細(xì)胞懸液中黑素細(xì)胞數(shù)量可以得出供皮區(qū)面積:取得滿意復(fù)色效果的黑素細(xì)胞數(shù)量為210～250/mm2。15

2.2 培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植 1987年Jeong等16首次成功應(yīng)用培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)。具體方法是:用胰蛋白酶分離表皮，然后分離出黑素細(xì)胞，將黑素細(xì)胞放于含有生長因子的黑素細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～30天后，將黑素細(xì)胞懸液移植到受體區(qū)。12該方法的最大優(yōu)點(diǎn)是以較小的取皮面積治療較大范圍的皮損，受皮區(qū)與供皮區(qū)面積比可達(dá)1∶80～1∶100。17但此種方法的復(fù)色效果并不優(yōu)于非培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植。此外培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植還有以下缺點(diǎn):(1)實(shí)驗(yàn)室條件要求高，要有相應(yīng)的人力、物力、技術(shù)等各方面的條件支持；(2)細(xì)胞培養(yǎng)基中的某些成分特別是TPA可以導(dǎo)致細(xì)胞突變；(3)對患者來說治療費(fèi)用相對較高。

2.3 角質(zhì)形成細(xì)胞和黑素細(xì)胞共培養(yǎng)移植 1988年Lee等首次成功地建立角質(zhì)形成細(xì)胞和黑素細(xì)胞體外共培養(yǎng)。18Andreassi等將黑素細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞共培養(yǎng)于經(jīng)苯甲醇完全酯化的透明質(zhì)酸生物聚合膜，移植治療11例非泛發(fā)型白癜風(fēng)患者，1個(gè)月后即有色素再生征象，至18個(gè)月時(shí)有6例色素完全再生。19角質(zhì)形成細(xì)胞分泌的α－黑素細(xì)胞刺激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、神經(jīng)生長因子、內(nèi)皮素、粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子、肝細(xì)胞生長因子等能通過受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)黑素細(xì)胞的增殖和分化。且黑素細(xì)胞可在移植部位形成色素沉著，而角質(zhì)形成細(xì)胞保證了傷口快速愈合而不留瘢痕，可獲得較佳的復(fù)色效果和皮損的完美愈合。20

2.4 脂肪干細(xì)胞與黑素細(xì)胞共培養(yǎng)移植 近年來研究發(fā)現(xiàn)，脂肪干細(xì)胞可以用來代替角質(zhì)形成細(xì)胞與黑素細(xì)胞共培養(yǎng)移植治療白癜風(fēng)。Kim等通過用免疫組化和Boyeden小室等方法研究了脂肪干細(xì)胞對黑素細(xì)胞增殖、分化、遷移的影響。21通過共培養(yǎng)黑素細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，脂肪干細(xì)胞可以明顯刺激黑素細(xì)胞的增殖和遷移，盡管由脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)黑素細(xì)胞的增殖和移行不及角質(zhì)形成細(xì)胞，但卻優(yōu)于黑素細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)。這可能與脂肪干細(xì)胞可分泌干細(xì)胞因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子等有關(guān)。

Lim等22通過向裸小鼠和SD大鼠移植原代培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞和不同比例原代培養(yǎng)的人脂肪干細(xì)胞，進(jìn)一步驗(yàn)證了黑素細(xì)胞移植復(fù)色的耐久性及近期的安全性。培養(yǎng)的黑素細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞按1∶1、1∶2、1∶3的比例混合移植，復(fù)色效果均優(yōu)于純黑細(xì)胞培養(yǎng)移植。其中黑素細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞按1∶1及1∶2比例混合移植時(shí)，復(fù)色效果最佳。黑素細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞共培養(yǎng)移植的效果與培養(yǎng)的黑素細(xì)胞混合培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞移植膚色效果相同。

2.5 CD8＋T細(xì)胞及真皮間充質(zhì)干細(xì)胞與黑素細(xì)胞移植 Rao等23發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)疾病活動(dòng)期皮損中細(xì)胞毒性CD8＋T細(xì)胞的數(shù)量明顯高于穩(wěn)定期，皮損周邊的CD8＋T細(xì)胞數(shù)量同黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)的效率相關(guān)，干擾CD8＋T細(xì)胞活性可能對黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)有益。白癜風(fēng)皮損周邊的CD8＋T細(xì)胞可以誘導(dǎo)自體黑素細(xì)胞凋亡，表明CD8＋T細(xì)胞在白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中有重要作用。24Zhou等25研究了23例進(jìn)行自體黑素細(xì)胞移植的白癜風(fēng)患者，其中12例患者復(fù)色效果滿意(恢復(fù)正常膚色的面積/原皮損面積≥90%)，6例患者復(fù)色效果良好(恢復(fù)正常膚色的面積/原皮損面積≥50%～89%)，5例患者復(fù)色效果一般或者較差(恢復(fù)正常膚色的面積/原皮損面積＜50%)。所有患者皮損周圍均有CD8＋T細(xì)胞浸潤，且移植效率同皮膚歸巢CD8＋T細(xì)胞活動(dòng)性密切相關(guān)。皮損周邊CD8＋T細(xì)胞數(shù)量越多或其分泌的細(xì)胞因子、趨化因子越多則復(fù)色效果越差。體外實(shí)驗(yàn)中，他們成功分離并鑒定出人類真皮間充質(zhì)干細(xì)胞和皮膚歸巢CD8＋T細(xì)胞，并且建立了真皮間充質(zhì)干細(xì)胞和皮膚歸巢CD8＋T細(xì)胞共培養(yǎng)體系，發(fā)現(xiàn)真皮間充質(zhì)干細(xì)胞可抑制CD8＋T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)CD8＋T細(xì)胞凋亡并調(diào)節(jié)CD8＋T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子及趨化因子的分泌。這些研究結(jié)果表明，白癜風(fēng)患者自體黑素細(xì)胞的移植效率可通過皮損周圍皮膚歸巢CD8＋T細(xì)胞活動(dòng)性來進(jìn)行預(yù)測，真皮間充質(zhì)干細(xì)胞可能被用作自體黑素細(xì)胞移植的輔助劑。

3 結(jié)語

綜上所述，黑素細(xì)胞移植是治療穩(wěn)定期白癜風(fēng)的方法之一，治療面積大，復(fù)色效果好，值得臨床推廣應(yīng)用。同時(shí)脂肪干細(xì)胞代替角質(zhì)形成細(xì)胞與黑素細(xì)胞共培養(yǎng)移植治療白癜風(fēng)的安全性及療效已在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)，真皮間充質(zhì)干細(xì)胞在黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)方面也有重要作用，這些為黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)提供了新的思路。

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(收稿:2014－12－06 修回:2014－12－24)

Updata on transp lantion of melanocytes in the treatment of vitiligo

QIN Xiao-ming，KE Guo-lin，YANG Kong-chao.The Second Affiliated Hospital ofWangnan Medical College Dermatology，AnhuiWuhu，241000

Transplantion ofmelanocytes is one of the methods in the treatment of vitiligo at stable stage，including cultured melanocyte transplantation and epidermal cells suspension transplantation.Co－culturing of melanocyteswith adipose－derived stem cells may be a potential substitute for co－culturing with keratinocytes.The efficiency of autologousmelanocytes transplantation in vitiligo patientsmay be predicted by perilesional skin－h(huán)oming CD8＋T cell activities and the dermalmesenchymal stem cellsmight be used as auxiliary agent to improve the efficacy.The progress on transplantion ofmelanocytes in the treatment of vitiligo is reviewed.

vitiligo；melanocytes；transplantion

皖南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院皮膚性病科，安徽蕪湖，241000