何鴻雁李 華楊 艷汪春梅陳 潤

1 瀘州醫(yī)學院公共衛(wèi)生系，四川省瀘州市 646000； 2 瀘州醫(yī)學院藥理教研室

青果葛根配伍液對醉酒大鼠肝臟損傷的保護作用研究＊

何鴻雁1李 華2楊 艷1汪春梅1陳 潤1

1 瀘州醫(yī)學院公共衛(wèi)生系，四川省瀘州市 646000； 2 瀘州醫(yī)學院藥理教研室

目的：利用大鼠醉酒模型觀察青果葛根配伍使用對醉酒大鼠肝勻漿中谷草轉氨酶（AST）、丙氨酸轉氨酶（ALT）和γ－谷氨酰轉肽酶（γ－GT）活力的影響，探討青果葛根配伍使用對醉酒大鼠肝損傷的保護作用。方法：將60只SD大鼠隨機分為5組：空白對照組、模型組、青果葛根配伍使用低劑量組、青果葛根配伍使用中劑量組、青果葛根配伍使用高劑量組。采用白酒灌胃造模，連續(xù)灌胃4d后稱量大鼠重量，處死，取出肝臟后將大鼠肝臟制成肝勻漿并檢測AST、ALT和γ－GT活力水平。結果：模型組大鼠肝臟三項生化指標與其他各組相比差異都具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；空白組及青果葛根配伍使用高、中、低劑量組肝勻漿中AST、ALT和γ－GT水平低于模型組，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論：醉酒大鼠肝臟組織AST、ALT和γ－GT均有不同程度升高，青果葛根配伍使用對上述指標有調控作用，對肝臟具有保護作用，擁有良好的解酒功效，且其解酒功效隨著劑量的增加而增加。

青果葛根配伍使用 解酒 AST ALT γ－GT

在我國，酒是一種非常悠久的傳統(tǒng)飲品，是我國最大的消費品之一，受到廣大消費者的青睞，適量飲酒可怡情而有益健康，但過度飲酒會給人們帶來諸多傷害如引起頭痛、眩暈、嘔吐、神經模糊等癥狀，嚴重的會對肝、胃、脾等內臟器官造成傷害，引起機體生理紊亂。本地特色農產品青果具有清熱解毒、利咽生津等功效[1～3]，葛根具有清涼下火、開胃消食、利尿解酒的特效[4～6]，兩者自古以來都是解酒良藥[7，8]，但尚無將其配伍使用制成解酒產品的先例，故利用大鼠建立醉酒模型研究青果葛根配伍使用的解酒作用，以明確青果葛根配伍使用的解酒效果，為新解酒產品的研制提供相應的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 造模物：北京紅星二鍋頭白酒（56度），北京紅星股份有限公司生產，生產批號20110201。

1.1.2 受試物：青果葛根配伍液（原使用由瀘州市科技局青果葛根配伍液課題組提供），分為3種劑量：高劑量為原使用（液體）；中劑量為原使用1∶1兌蒸餾水使用；低劑量為1∶2兌蒸餾水使用。

1.1.3 對照物：蒸餾水（由本實驗室自制）

1.1.4 實驗動物及分組：同一批健康SD大鼠60只（購自瀘州醫(yī)學院動物科），雌雄各半，體重（200± 60）g。隨機分成5組：空白對照組、模型組、青果葛根配伍液低劑量組、青果葛根配伍液中劑量組和青果葛根配伍液高劑量組，每組12只?？瞻捉M不給酒和使用，模型組只給酒不給使用，低劑量組給酒并給予低劑量青果葛根配伍液，中劑量組給酒并給予中劑量青果葛根配伍液，高劑量組給酒并給予高劑量青果葛根配伍液。

1.1.5 試劑與儀器：（1）試劑：由南京建成生物工程研究所提供的AST（C010－1）試劑盒、ALT（C009－1）試劑盒、γ－GT（C107）試劑盒；冰醋酸（分析純，乙酸濃度≥99.5%市售）；生理鹽水（由本實驗室自制）。（2）儀器：S648型電熱恒溫水浴箱（上海醫(yī)療器械廠）；ZX6006臺式高速離心機（法國Jouan公司使用）；722型可見光分光光度計（上海奧析科學儀器有限公司）；WKYIII－1000型微量移液器（上海佳安分析儀器廠）；HM－200分析天平（上海天平儀器廠）。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模及給藥劑量：采用灌胃法進行造模，先灌青果葛根配伍液，半小時之后給56度北京紅星二鍋頭白酒，均按7.5gkg給予；2次d，上下午各1次，每次間隔4h以上，連續(xù)4d?？瞻捉M給予等量蒸餾水，模型組以等量蒸餾水代替使用。每次灌胃前2h禁食、禁飲，實驗期間其余時間各組大鼠均予飲用水及全價營養(yǎng)顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.2.2 標本采集、制備及指標檢測：飼養(yǎng)過程中觀察大鼠一般情況，于第4日末次灌胃2h后，先稱體重，處死，暴露腹腔，摘取肝臟。每只大鼠稱取200mg左右的肝組織塊按重量體積比加用生理鹽水制備成10%肝勻漿，1 000～3 000轉min，離心10min，然后取組織勻漿上清再用生理鹽水按1∶9稀釋成1%的肝勻漿，待測。按照ALT、AST、γ－GT試劑盒說明書檢測各組大鼠肝勻漿谷草轉氨酶（AST）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、γ－谷氨酰轉肽酶（γ－GT）水平，并記錄。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，結果用單因素方差分析，組間比較用SNK法檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠肝勻漿AST結果比較 由表1可見，模型組肝勻漿中AST均值較空白對照組明顯升高，經統(tǒng)計學單因素方差分析：各組大鼠肝勻漿AST含量差異總體上有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），進而進行各組兩兩比較，其中模型組與低劑量組肝勻漿AST含量差別無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），其余各組之間兩兩比較均有差異（P＜0.05）。AST均值從低、中、高劑量組逐漸下降。

2.2 各組大鼠肝勻漿ALT結果比較 由表2可見，模型組肝勻漿中ALT均值較空白組明顯升高，經統(tǒng)計學單因素方差分析：各組大鼠肝勻漿ALT含量差異總體上有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），進而進行各組兩兩比較，其中中劑量組與高劑量組肝勻漿ALT含量差別無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），其余各組之間兩兩比較均有差異（P＜0.05）。ALT均值從低、中、高劑量組逐漸下降。

表1 各組大鼠肝勻漿AST結果比較（±s）

表1 各組大鼠肝勻漿AST結果比較（±s）

組別n AST（Ugprot）空白對照組12155.127±42.733模型組12 311.906±59.333低劑量組12 283.689±53.069中劑量組12 233.609±47.348高劑量組12199.165±66.987

表2 各組大鼠肝勻漿ALT結果比較（±s）

表2 各組大鼠肝勻漿ALT結果比較（±s）

組別n ALT（Ugprot）空白對照組12161.082±22.208模型組12 357.664±44.916低劑量組12 267.579±38.620中劑量組12 228.560±44.151高劑量組12202.896±38.433

2.3 各組大鼠肝勻漿γ－GT結果比較 由表3可見，模型組肝勻漿γ－GT均值較空白對照組明顯升高，經統(tǒng)計學單因素方差分析：各組大鼠肝勻漿γ－GT含量差異總體上有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），進而進行各組兩兩比較，其中低劑量組與中劑量組肝勻漿γ－GT含量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），中劑量組與高劑量組肝勻漿γ－GT含量其差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），其余各組之間兩兩比較均有差異（P＜0.05）。γ－GT均值從低、中、高劑量組逐漸下降。

表3 各組大鼠肝勻漿γ－GT結果比較（±s）

表3 各組大鼠肝勻漿γ－GT結果比較（±s）

組別nγ－GT（Ugprot）空白對照組124.841±0.844模型組12 8.771±1.423低劑量組12 7.716±1.104中劑量組12 7.300±1.038高劑量組126.459±1.341

3 討論

近年來，隨著我國國民經濟的發(fā)展、生活方式和飲食結構的改變，飲酒者和飲酒量明顯增加。醉酒是指一次飲酒過量而導致的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、中樞神經系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)等的損傷過程[8]。過量飲酒不僅可以誘發(fā)或導致許多疾病，如心腦血管疾病、消化系統(tǒng)疾病、精神障礙、乙醇依賴等，同時還可能會降低自我行為的控制能力，引起行為異常，還可能引發(fā)許多意外事故甚至犯罪[9]。目前，在我國，酒精性肝損傷已經成為僅次于病毒性肝炎的主要肝損傷原因，酒精性肝?。ˋlcoholic liver disease，ALD）的發(fā)病率也呈逐年增加趨勢，嚴重威脅人民健康[10]。

酒對人體的影響可用諸多指標反映，本實驗采用大鼠肝勻漿中AST、ALT和γ－GT為檢驗指標，反映青果葛根配伍使用的解酒效果。AST主要存在于肝細胞漿和線粒體中，ALT主要存在于肝細胞原漿的可溶部分。醉酒時機體內可產生大量的活性氧，活性氧可將細胞卵磷脂中多價不飽和脂肪酸過氧化而生成自由基，致細胞膜脆弱化，透過性亢進；活性氧又有對脂質高親和性的特點，既損害細胞膜，又損害線粒體膜，細胞內轉氨酶被大量釋放，故轉氨酶是肝細胞損害的敏感標志，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標，是肝細胞損傷的“金標準”[11，12]。葛根可以顯著降低酒精性肝損傷模型中大鼠血清的AST、ALT水平[11，13，14]。本實驗中模型組肝勻漿中AST、ALT含量均較其他組高，低劑量組肝勻漿中AST、ALT含量高于中、高劑量組，表明青果葛根配伍使用能減輕酒精對肝細胞的損傷，減少AST、ALT的釋放，從而降低AST、ALT水平，對肝細胞有保護作用，且其效果隨著青果葛根配伍使用劑量的增加而加強。γ－GT在肝內主要存在于肝細胞漿和肝內膽管上皮[15]，是γ－谷氨酰循環(huán)的關鍵酶，分解谷胱甘肽（γ－谷氨酰半胱氨酰甘氨酸，GSH）及其S－結合物，并促進細胞內GSH的重新合成，酒精中毒者γ－GT明顯升高[16]。實驗中模型組肝勻漿中γ－GT含量較其他組高，且低劑量組γ－GT高于高劑量組，表明青果葛根配伍使用能有效降低醉酒模型肝臟內γ－谷氨酰轉肽酶的水平，對肝臟具有保護功效，且其效果隨著青果葛根配伍使用劑量的增加而增強。

通過上述實驗研究可見在地方特色農產品青果提取液中加入葛根，兩者配伍使用可通過對AST、ALT和γ－GT的顯著調節(jié)作用減輕酒精對肝細胞損害，改善肝功能，對肝臟有保護作用；且其解酒功效在一定范圍內隨著劑量的增加而增加，故擁有良好的解酒功效。

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The Protective Effects of Fructus Canarii and Puerariae Combination Treatment on Alcohol－induced Rat Liver Injury

HE Hongyan＃，LI Hua，YANG Yan，et al.＃Department of Public Health of Luzhou Medical College，Luzhou City，Sichuan Province 646000

Objective：To investigate the protective effects of fructus canarii and puerariae combination treatment on alcohol－induced rat liver injury through testing the activities of AST，ALT andγ－GT in liver homogenates of drunk rat.Methods：Sixty Sprague－Dawley（SD）rat were divided into five groups，including blank group，model group，low－dose fructus canarii and puerariae treatment group，middle－dose fructus canarii and puerariae treatment group and high－dose fructus canarii and puerariae treatment group.After 4days of liquor gavage，rats were sacrificed.The levels of AST，ALT andγ－GT of rat liver were measured.Results：Compared with other groups，the difference of the levels of AST，ALT andγ－GT of model group is significant（P＜0.05）.The levels of AST，ALT andγ－GT of blank group and fructus canarii and puerariae treatment group are lower than that of model group，and the difference is significant（P＜0.05）.Conclusion：The levels of AST，ALT andγ－GT are increased in the liver of drunk rat.Fructus canarii and puerariae combination treatment can reduce the levels of AST，ALT andγ－GT in drunk rat，and significantly inhibit liquor－induced rat liver injury.Moreover，fructus canarii and puerariae combination treatment exerts the anti－alcohol effects in an dose－dependent manner.

Fructus canarii and puerariae combination treatment，Anti－alcohol effects，AST，ALT，γ－GT

R－332

A

1001－7585（2015）12－1541－03

2015－01－27

（編輯落落）

四川省衛(wèi)生廳項目（100217）；瀘州市科技局項目[瀘市科函（2008）23]。通訊作者：陳潤