姜佳佳 孫文廣 屠越華 閻雅更 董鳳麗 葛 聲

5 -FU 是胃癌化學(xué)治療常用的一種細(xì)胞毒性藥物，但其對患者產(chǎn)生的毒性不良反應(yīng)及耐藥性問題使其臨床功效及應(yīng)用受到很大的限制，因此臨床以聯(lián)合應(yīng)用多見［2～6］。

生育三烯酚是維生素E 的一種亞型，目前其對多種腫瘤細(xì)胞系的抗增殖作用及其與某些藥物聯(lián)合的增敏作用已見報道，但γ -T3 與5 -FU 聯(lián)合應(yīng)用對胃癌SGC-7901 細(xì)胞系的增殖抑制作用卻未曾報道［7～9］。因此，本研究探討了γ -T3 與5 -FU 聯(lián)合應(yīng)用對SGC-7901 細(xì)胞系增殖抑制的作用。

材料與方法

1.材料:γ -T3，純度95%，溶于無水乙醇，購于美國Hygeia 公司。人胃癌細(xì)胞系SGC -7901，購自北京市腫瘤研究所。使用含10% 胎牛血清1% 青鏈霉素，1% 谷氨酰胺的RPIM 1640 培養(yǎng)液于37℃，5% CO2恒溫條件下培養(yǎng)，使用0.02%的EDTA 消化傳代。CCK -8 購于日本同仁化學(xué)研究所，AnexinⅤ-FITC 細(xì)胞凋亡試劑盒購于美國BD 公司。

2.方法:(1)細(xì)胞增殖抑制試驗(CCK -8 法):將對數(shù)生長期細(xì)胞按照每孔200μl 培養(yǎng)液(10%FBS)，5000 個細(xì)胞接種于96 孔板，后置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待24h 后，按照分組方式換成含有不同濃度的γ -T3 和5 -FU 的10%胎牛血清培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，于48h 后分別加入CCK -8 檢測液用酶標(biāo)儀測其吸光度值。(2)流式細(xì)胞分析:取對數(shù)生長期細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，按照每孔2ml 培養(yǎng)液，3.0 ×104個細(xì)胞，種于6 孔板中，用10%FBS 培養(yǎng)液種板，24h 后，換成含有不同濃度的γ-T3 和5 -FU 的2%胎牛血清培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h 后，進(jìn)行凋亡檢測前處理加入FITC 和PI 染色劑進(jìn)行染色，之后上機(jī)檢驗。

結(jié) 果

1.細(xì)胞增殖抑制實驗結(jié)果:5 -FU 和γ-T3 均可抑制SGC-7901 細(xì)胞的增殖，并隨著濃度的增加抑制作用增強，(P ＜0.05，圖1 中A、B)，增殖抑制作用呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系;而γ-T3(20 或30μmol/L)+5-FU 聯(lián)合應(yīng)用與5-FU 單藥組相比對SGC-7901 細(xì)胞的增殖抑制作用增強(圖1C)，有增效作用，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t = -3.57，P =0.005;t = -6.856，P =0.000)。通過CDI 值計算結(jié)果可以看出，CDI 值均＜1(表1)，說明兩藥聯(lián)合的抗腫瘤作用為協(xié)同作用。

2. 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞凋亡實驗結(jié)果:5 - FU(30μmol/L)單獨用藥組凋亡率(7.9% ±0.9%)、T3(20μmol/L)單獨用藥組凋亡率(38.7% ±1.2%)和5-FU(30μmol/L)+γ -T3(20μmol/L)聯(lián)合用藥組凋亡率(49.4% ±2.2%)與對照組(3.9% ±0.7%)相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.01)，詳見圖2、圖3。

討 論

圖1 不同藥物不同濃度下SGC-7901 細(xì)胞CCK-8 增殖抑制率

表1 5 -FU、γ-T3 及5 -FU+γ-T3 對SGC-7901細(xì)胞系生存指數(shù)的影響及其CDI 值

5 -FU 是胃癌治療的常用藥物之一，但是隨著治療的深入，其耐藥性及不良反應(yīng)的增加也成為一個重要的治療難題［6］。因此，如何提高5 -FU 敏感度，減少耐藥性和不良反應(yīng)就成為臨床上需要迫切解決的問題［2～6］。研究表明，生育三烯酚對多種腫瘤細(xì)胞具有增殖抑制與誘導(dǎo)凋亡的作用，而對正常組織上皮細(xì)胞不具有明顯毒性不良反應(yīng)［7，8，10］，因此，生育三烯酚被認(rèn)為是一種非常有前途的潛在抗癌劑［4］。

圖2 不同藥物濃度SGC-7901 細(xì)胞凋亡情況

圖3 不同藥物濃度下SGC-7901 細(xì)胞凋亡率

本實驗的結(jié)果證明了γ-T3 與5 -FU 單獨應(yīng)用與對照組相比對SGC-7901 細(xì)胞具有抑制增殖的作用，并隨著劑量的增加，抑制率也有明顯地增高。兩藥聯(lián)合應(yīng)用與其單獨應(yīng)用相比對腫瘤細(xì)胞的抑制率具有明顯的升高，這與Guligena 等發(fā)表γ-T3 與抑制素類的SMV 和ATV 聯(lián)合應(yīng)用與其分別單獨用于兩種間皮瘤細(xì)胞系與空白對照比較產(chǎn)生了非常明顯的生存抑制作用的結(jié)果相同［11～17］。本實驗通過計算國際通用的兩藥相互作用系數(shù)CDI 來確定兩藥聯(lián)合應(yīng)用是否是協(xié)同作用，當(dāng)CDI ＜1、=1、＞1 時，分別說明兩藥聯(lián)合是協(xié)同作用、相加作用和拮抗作用［1］。本次聯(lián)合用藥實驗CDI ＜1 則表明5 -FU 與生育三烯酚聯(lián)合是協(xié)同作用，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。聯(lián)合用藥增加了胃癌細(xì)胞系SGC -7901 的凋亡比率，比對照組和單獨用藥組有更強的凋亡誘導(dǎo)作用。

以上研究結(jié)果表明γ-T3 與5 -FU 聯(lián)合應(yīng)用與其分別單獨應(yīng)用同對照組相比對SGC -7901 細(xì)胞的增殖抑制作用具有明顯增效作用，并且其抑制作用可能與其促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

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